• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    HBV睞CLF患者外周血和肝臟IL32的表達(dá)水平與肝損傷的相關(guān)性

    2018-09-10 06:04:45鄒勇鄭常龍楊小安
    新醫(yī)學(xué) 2018年2期
    關(guān)鍵詞:肝衰竭乙型肝炎病毒

    鄒勇 鄭常龍 楊小安

    【摘要】目的探討HBV相關(guān)慢加急性肝衰竭(HBVACLF)患者外周血和肝臟IL32的表達(dá)水平與肝損傷的相關(guān)性。方法選擇需肝移植手術(shù)的HBVACLF患者及輕度慢性乙型病毒性肝炎(CHB)患者各20例。收集HBVACLF患者和CHB患者外周血血清,HBVACLF患者手術(shù)中切除的肝組織及輕度CHB患者肝穿刺標(biāo)本,另收集5例手術(shù)切除肝血管瘤患者的血液標(biāo)本及遠(yuǎn)離腫瘤的正常肝組織作為正常對照。分別利用ELISA和免疫組織化學(xué)染色檢測輕度CHB患者和HBVACLF患者外周血血清及肝組織中IL32的水平。分析外周血和肝臟IL32的表達(dá)水平及與肝損傷程度(總膽紅素水平)的相關(guān)性。結(jié)果HBVACLF患者外周血IL32水平高于輕度CHB患者及正常對照者(P均<0001);HBVACLF患者肝組織中IL32的水平亦高于輕度CHB患者及正常對照者(P均<0001)。HBVACLF患者外周血和肝臟IL32水平與血清總膽紅素水平均呈正相關(guān)(rs分別為0686和0544,P均<005)。 結(jié)論促炎細(xì)胞因子IL32高表達(dá)可能是導(dǎo)致HBVACLF免疫性肝損傷加劇、肝細(xì)胞大量凋亡和壞死的重要因素。

    【關(guān)鍵詞】乙型肝炎病毒;肝衰竭;白介素32;促炎細(xì)胞因子

    【Abstract】ObjectiveTo investigate the correlation between the expression levels of interleukin32 (IL32) in the peripheral blood and liver and liver injury in patients diagnosed with hepatitis B virusrelated acuteonchronic liver failure (HBVACLF) MethodsTwenty HBVACLF patients scheduled to undergo liver transplantation and 20 counterparts diagnosed with mild chronic hepatitis B (CHB) were enrolled in this study Peripheral blood serum samples were obtained from HBVACLF and CHB patients Liver tissues were collected from HBVACLF patients by surgical resection, and those were obtained from CHB patients via needle biopsy Another 5 cases of surgical resection of hepatic hemangioma were removed from normal liver tissue as a normal control The expression levels of IL32 in the peripheral blood and liver tissues were quantitatively measured by enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) and immmunohistochemical staining The correlation between the expression levels of IL32 in the peripheral blood and liver and liver injury (total bilirubin, TBIL level) was analyzed ResultsThe expression level of IL32 in the peripheral blood of HBVACLF patients was remarkably higher than those of mild CHB counterparts and normal controls (all P<0001) The expression level of IL32 in the liver of HBVACLF patients was significantly upregulated compared with that in those with mild CHB and normal liver tissues (all P<0001) The expression levels of IL32 in the peripheral blood and liver of HBVACLF patients were positively correlated with the serum TBIL levels with correlation coefficients of 0686 and 0544(both P<005) ConclusionThe significantly upregulated expression of IL32, as a proinflammatory cytokine, is a potential biomarker which aggravates immunitymediated liver injury and promotes hepatic cellular apoptosis and necrosis in HBVACLF patients

    【Key words】Hepatitis B virus; Liver failure; Interleukin32; Proinflammatory cytokine

    HBV相關(guān)慢加急性肝衰竭(HBVACLF)是在慢性乙型病毒性肝炎(CHB)的基礎(chǔ)上,因急性誘因如HBV再激活、感染、酒精、藥物、未知的肝毒等因素作用下發(fā)生的急性或亞急性肝功能失代償?shù)呐R床癥候群,臨床表現(xiàn)為黃疸和凝血障礙,失代償性腹水,伴或不伴有肝性腦病[12]。其病情兇險,發(fā)展迅猛,許多患者在數(shù)周甚至數(shù)日內(nèi)即出現(xiàn)大片肝細(xì)胞壞死,廣泛的炎性細(xì)胞浸潤和纖維蛋白的沉積,最后發(fā)展為肝衰竭。目前臨床上缺乏特異、有效的治療和干預(yù)手段,除非實施緊急肝移植(國外以肝移植為主要治療手段,肝移植后1年存活率約為50%~60%),否則絕大部分患者預(yù)后不良。HBVACLF已經(jīng)成為嚴(yán)重危害人民健康的惡性疾病,因此深入研究其發(fā)病機(jī)制對于降低肝衰竭患者的病死率及改善預(yù)后有著重要意義。HBVACLF的發(fā)生、發(fā)展與大量促炎細(xì)胞因子的生成和暴發(fā)密切相關(guān)。大量促炎細(xì)胞因子如TNF、IL2、IL6、IL10、IL17等通過一系列的級聯(lián)反應(yīng)形成炎性因子的“瀑布效應(yīng)”及SIRS等,進(jìn)一步加重肝細(xì)胞的變性、壞死、凋亡及功能衰竭,并可導(dǎo)致MODS[35]。本研究通過檢測HBVACLF患者外周血和肝臟促炎細(xì)胞因子IL32的表達(dá)水平,探討其與肝損傷的相關(guān)性,旨在為揭示HBVACLF的發(fā)病機(jī)制提供新的思路和理論依據(jù)。

    一、研究對象

    HBVACLF和CHB患者均來自中山大學(xué)附屬第三醫(yī)院肝臟外科和感染科。研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn),患者及家屬

    簽署知情同意書后,收集20例住院輕度CHB患者外周血血清樣本和肝組織穿刺標(biāo)本,20例行肝移植手術(shù)的HBVACLF患者術(shù)前外周血血清樣本和術(shù)中切除的肝組織標(biāo)本。另收集5例手術(shù)切除肝血管瘤患者的血清樣本及遠(yuǎn)離腫瘤的正常肝組織作為正常對照。輕度CHB和HBVACLF的診斷參考《CHB防治指南(2010年版)》和《肝衰竭診治指南(2012年版)》的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)。同時排除合并甲、丙、丁、戊型肝炎病毒,HIV、真菌、細(xì)菌等其他病原體感染以及自身免疫性肝病、酒精性肝病和原發(fā)性肝癌患者。正常對照者、輕度CHB患者及HBVACLF患者的一般資料見表1。

    二、儀器與試劑

    包括7170A型全自動生化分析儀(日本日立公司),ELX800酶標(biāo)儀(美國寶特公司);Human IL32 DuoSet ELISA試劑盒(美國R&D公司),Purified antihuman IL32αβγδ(美國BioLegend公司);HRP酶標(biāo)二抗(丹麥DAKO公司)。

    三、研究方法

    1血清IL32水平的檢測

    用ELISA檢測3組受試者血清IL32水平,嚴(yán)格按照說明書操作。

    2肝組織IL32水平的檢測

    免疫組織化學(xué)染色的步驟如下:①石蠟切片脫蠟至水;②抗原修復(fù)(001 mmol/L枸櫞酸鈉緩沖液,pH=60),微波中高檔5 min 3次,每次間隔1 min,自然冷卻至室溫,磷酸鹽緩沖液浸泡3 min;③3%過氧化氫溶液浸泡15 min,Tris緩沖液振洗5 min共3次;④ 1∶[KG-*2]20正常兔血清室溫孵育30 min;⑤倒去溶液,不沖洗,滴加50 μl(1∶[KG-*2]100)鼠抗人IL32單克隆混合抗體于切片上,置濕盒內(nèi)37℃孵育1 h;⑥Tris緩沖液沖洗5 min共3次,每張切片加入50~100 μl辣根過氧化物酶標(biāo)記山羊抗小鼠二抗,濕盒中孵育30 min,Tris緩沖液沖洗2 min共3次;⑦滴加足以覆蓋組織的現(xiàn)配二苯聯(lián)苯胺工作液,鏡下觀察顯色情況,蒸餾水沖洗終止反應(yīng);⑧滴加足以覆蓋組織的紅色堿性磷酸酶工作液,孵育5~20 min,鏡下觀察顯色情況,蒸餾水沖洗終止顯色;⑨通風(fēng)櫥吹干玻片,封片劑封片。利用ImagePro Plus 60圖像分析軟件分析肝組織IL32的相對表達(dá)量。

    四、統(tǒng)計學(xué)處理

    應(yīng)用SPSS 150進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。正態(tài)分布的計量資料以[AKx-D]±s表示,多組間均數(shù)的比較采單因素方差分析,進(jìn)一步兩兩比較采用LSDt檢驗;非正態(tài)分布的計量資料采用中位數(shù)(最小值~最大值)表示。相關(guān)性采用Spearman秩相關(guān)分析。P<005為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

    [JZ]結(jié)果

    一、HBVACLF、輕度CHB患者和正常對照者的血清IL32水平比較

    HBVACLF患者外周血血清IL32水平為(8367±2297)ng/L,輕度CHB患者外周血血清

    IL32水平為(1862±386)ng/L,正常對照者外周血血清IL32水平為(712±92)ng/L,HBVACLF患者外周血血清IL32水平均高于輕度CHB患者和正常對照者(3者比較F=104058、P<0001,兩兩比較P均<0001),見圖1。

    二、HBVACLF、輕度CHB患者和正常對照者的肝組織IL32相對表達(dá)量比較

    HBVACLF患者肝組織IL32表達(dá)水平為1763±369,高于輕度CHB患者的326±76和正常對照者的153±57(3者比較F=188922、P<0001,兩兩比較P均<0001),見圖2及圖3。

    三、外周血和肝臟IL32的表達(dá)水平與肝損傷的相關(guān)性分析

    討論

    IL32是一種新發(fā)現(xiàn)的促炎細(xì)胞因子,主要由T細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞(NK細(xì)胞)、上皮細(xì)胞分泌,具有促炎介質(zhì)的特性,可通過激活NFκB、AP1和p38 MAPK等通路誘導(dǎo)IL1β、TNFα、IL6等細(xì)胞因子的表達(dá)[67]。業(yè)已發(fā)現(xiàn),IL32作為促炎細(xì)胞因子在風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、炎癥性腸病、特異性皮炎、胰腺炎、CHB、慢性丙型病毒性肝炎等炎癥性疾病的發(fā)生、發(fā)展中起重要作用[814]。本研究顯示,HBVACLF患者外周血和肝組織IL32水平均高于輕度CHB患者及正常對照者,并且與肝損傷嚴(yán)重程度密切相關(guān),表明IL32在HBVACLF肝細(xì)胞的凋亡和壞死中可能發(fā)揮著重要作用。

    然而,IL32是如何促進(jìn)HBVACLF免疫介導(dǎo)的肝細(xì)胞損傷?我們推測可能有以下機(jī)制:①HBVACLF的發(fā)病與促炎細(xì)胞因子的生成和暴發(fā)密切相關(guān)。大量促炎細(xì)胞因子如IL1β、TNFα、IL2、IL18、IFNγ等均可誘導(dǎo)T細(xì)胞、NK細(xì)胞、單核細(xì)胞、外周血單個核細(xì)胞、上皮細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞等表達(dá)IL32。IL32亦可誘導(dǎo)肝臟免疫細(xì)胞分泌TNFα、IL1β、IL6、IFNγ等促炎細(xì)胞因子和IL8、巨噬細(xì)胞炎性蛋白2、CC類趨化因子配體5等趨化因子,激活細(xì)胞因子“瀑布級聯(lián)效應(yīng)”,募集

    大量炎癥細(xì)胞,從而進(jìn)一步加重免疫細(xì)胞介導(dǎo)的肝細(xì)胞損傷。②IL32可能通過活化凋亡相關(guān)蛋白Caspase3通路誘導(dǎo)HBV感染細(xì)胞凋亡,加重肝細(xì)胞損傷。③IL32可能通過增強免疫細(xì)胞如NK細(xì)胞的殺傷活性,促進(jìn)免疫介導(dǎo)的肝細(xì)胞損傷。IL32促進(jìn)肝細(xì)胞損傷的確切機(jī)制值得深入研究。

    綜上所述, IL32表達(dá)與HBVACLF肝損傷密切相關(guān),提示血清或肝臟IL32水平可作為反映肝衰竭患者病情危重程度的指標(biāo)之一,進(jìn)一步深入研究IL32介導(dǎo)的肝細(xì)胞損傷機(jī)制將有助于為臨床治療提供新的分子靶點和理論依據(jù)。

    參考文獻(xiàn)

    [1]中華醫(yī)學(xué)會感染病學(xué)分會肝衰竭與人工肝學(xué)組,中華醫(yī)學(xué)會肝病學(xué)分會重型肝病與人工肝學(xué)組肝衰竭診治指南

    (2012年版)中華肝臟病雜志,2013, 21(3): 177183.

    [2]許成芳,劉東連,戴麗珍妊娠期肝衰竭的臨床特點分析 新醫(yī)學(xué), 2016, 47(8):544548

    [3]Zou Z, Li B, Xu D, Zhang Z, Zhao JM, Zhou G, Sun Y, Huang L, Fu J, Yang Y, Jin L, Zhang W, Zhao J, Sun Y, Xin S, Wang FSImbalanced intrahepatic cytokine expression of interferongamma, tumor necrosis factoralpha, and interleukin10 in patients with acuteonchronic liver failure associated with hepatitis B virus infectionJ Clin Gastroenterol,2009,43(2):182190

    [4]趙軍,孫穎,李保森,徐東平,張政,趙景明,周光德,孫艷玲,黃磊,張偉,辛紹杰,王福生,鄒正升肝內(nèi)CD68陽性細(xì)胞及TNFα在慢加急性乙型肝炎肝衰竭發(fā)病機(jī)制中的作用實用肝臟病雜志,2009,12(1):3134

    [5]楊波,趙彩彥,王亞東,車宏浩,閻文昭,趙萌 Thl17細(xì)胞在慢性乙型肝炎及其重癥化中的變化 中華傳染病雜志,2012,30(8):472477

    [6]Hong JT, Son DJ, Lee CK, Yoon DY, Lee DH, Park MH Interleukin 32, inflammation and cancerPharmacol Ther,2017,174:127137

    [7]Joosten LA, Heinhuis B, Netea MG, Dinarello CANovel insights into the biology of interleukin32Cell Mol Life Sci,2013,70(20):38833892

    [8]Damen MSMA, Popa CD, Netea MG, Dinarello CA, Joosten LABInterleukin32 in chronic inflammatory conditions is associated with a higher risk of cardiovascular diseasesAtherosclerosis,2017,264:8391

    [9]Khawar MB, Abbasi MH, Sheikh N IL32: a novel pluripotent inflammatory interleukin, towards gastric inflammation, gastric cancer, and chronic rhino sinusitis Mediators Inflamm,2016,2016:8413768

    [10]Kim S Interleukin32 in inflammatory autoimmune diseases Immune Netw, 2014,14(3):123127

    [11]Xu WD, Zhang M, Feng CC, Yang XK, Pan HF, Ye DQIL32 with potential insights into rheumatoid arthritisClin Immunol,2013,147(2):8994

    [12]Heinhuis B, Koenders MI, van de Loo FA, Netea MG, van den Berg WB, Joosten LAInflammationdependent secretion and splicing of IL32[gamma] in rheumatoid arthritisProc Natl Acad Sci U S A,2011,108(12):49624967

    [13]Nguyen H, Sankaran S, Dandekar SHepatitis C virus core protein induces expression of genes regulating immune evasion and antiapoptosis in hepatocytesVirology,2006,354(1):5868

    [14]Moschen AR, Fritz T, Clouston AD, Rebhan I, Bauhofer O, Barrie HD, Powell EE, Kim SH, Dinarello CA, Bartenschlager R, Jonsson JR, Tilg HInterleukin32: a new proinflammatory cytokine involved in hepatitis C virusrelated liver inflammation and fibrosisHepatology,2011,53(6):18191829

    (收稿日期:20170920)

    (本文編輯:林燕薇)

    猜你喜歡
    肝衰竭乙型肝炎病毒
    脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞對肝衰竭治療作用機(jī)制的探討
    血清銅藍(lán)蛋白在慢性乙型肝炎肝衰竭中的臨床意義
    兩種血漿分離器進(jìn)行血漿置換治療后對血細(xì)胞的影響
    枯否細(xì)胞在肝衰竭中的作用及機(jī)制研究進(jìn)展
    乙肝病毒檢測在臨床應(yīng)用的研究進(jìn)展
    乙型肝炎人免疫球蛋白聯(lián)合乙肝疫苗阻斷乙肝病毒母嬰傳播的療效觀察
    人工肝血漿置換對肝衰竭的治療效果及影響因素的探究
    老年乙肝及HBV相關(guān)肝硬化患者外周血Th17細(xì)胞水平與IL—17、α—SMA及肝功能的相關(guān)性研究
    血清免疫球蛋白檢驗在肝衰竭患者中的應(yīng)用意義探究
    妊娠合并乙型肝炎病毒感染的觀察與護(hù)理
    丝袜美足系列| 成人亚洲精品一区在线观看| 亚洲精品在线观看二区| 国产乱人伦免费视频| 国产免费男女视频| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 成熟少妇高潮喷水视频| 免费在线观看亚洲国产| 日本wwww免费看| 男人操女人黄网站| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 欧美日韩视频精品一区| 超色免费av| 欧美日韩福利视频一区二区| 亚洲五月天丁香| 一进一出抽搐gif免费好疼 | 两个人免费观看高清视频| 亚洲成人精品中文字幕电影 | 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 国产免费av片在线观看野外av| avwww免费| 亚洲视频免费观看视频| 乱人伦中国视频| 色在线成人网| 亚洲国产精品sss在线观看 | 欧美激情 高清一区二区三区| 亚洲av美国av| 成人亚洲精品一区在线观看| 欧美日韩乱码在线| 国产精品亚洲av一区麻豆| 精品国产国语对白av| 色哟哟哟哟哟哟| 免费在线观看完整版高清| 1024视频免费在线观看| 午夜免费鲁丝| 久久婷婷成人综合色麻豆| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 日本免费a在线| 国产亚洲欧美98| 精品国产国语对白av| 99久久人妻综合| 国产亚洲欧美在线一区二区| 操美女的视频在线观看| 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 亚洲国产看品久久| 久久亚洲真实| 亚洲精品国产色婷婷电影| 亚洲专区国产一区二区| 国产91精品成人一区二区三区| 中国美女看黄片| 成人18禁在线播放| 色哟哟哟哟哟哟| 久久精品影院6| 一区在线观看完整版| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 欧美一区二区精品小视频在线| 国产一区二区三区综合在线观看| 午夜老司机福利片| 老司机深夜福利视频在线观看| 男女午夜视频在线观看| 精品国产乱码久久久久久男人| 免费不卡黄色视频| 色老头精品视频在线观看| 午夜福利欧美成人| 亚洲人成电影观看| 怎么达到女性高潮| 午夜免费成人在线视频| 69av精品久久久久久| 成人亚洲精品av一区二区 | 男人的好看免费观看在线视频 | 嫩草影院精品99| 美女 人体艺术 gogo| 一区二区三区国产精品乱码| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 精品日产1卡2卡| 亚洲国产精品合色在线| 1024香蕉在线观看| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 精品第一国产精品| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃| 51午夜福利影视在线观看| 久久久国产一区二区| 午夜激情av网站| 国产精品久久久人人做人人爽| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 国产av一区在线观看免费| 国产亚洲av高清不卡| 黄片小视频在线播放| 欧美日韩视频精品一区| 一本综合久久免费| 丰满的人妻完整版| 中文字幕人妻熟女乱码| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 国产在线观看jvid| 日韩高清综合在线| 可以在线观看毛片的网站| 三上悠亚av全集在线观看| 午夜福利在线免费观看网站| 校园春色视频在线观看| 亚洲熟女毛片儿| 99精品欧美一区二区三区四区| 久久午夜亚洲精品久久| 亚洲色图综合在线观看| 国产成人系列免费观看| a在线观看视频网站| 怎么达到女性高潮| 亚洲成人免费av在线播放| 高清黄色对白视频在线免费看| 亚洲avbb在线观看| 妹子高潮喷水视频| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片 | 黄色视频不卡| 99国产精品免费福利视频| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放 | 91精品三级在线观看| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 曰老女人黄片| 久久中文看片网| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 丝袜美足系列| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 99riav亚洲国产免费| 怎么达到女性高潮| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 国产精品 国内视频| 久久人妻av系列| 日韩免费av在线播放| 天天添夜夜摸| 国产高清videossex| 亚洲精品在线美女| 久久狼人影院| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 一二三四在线观看免费中文在| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 激情视频va一区二区三区| 久久久国产欧美日韩av| 老汉色av国产亚洲站长工具| 男女下面插进去视频免费观看| 亚洲一区二区三区欧美精品| 国产成人av教育| 国产高清videossex| a级毛片黄视频| 无遮挡黄片免费观看| 1024香蕉在线观看| 久久精品成人免费网站| 99久久综合精品五月天人人| 91在线观看av| 欧美+亚洲+日韩+国产| 啦啦啦免费观看视频1| 极品教师在线免费播放| 老鸭窝网址在线观看| 精品久久久久久电影网| 窝窝影院91人妻| 国产深夜福利视频在线观看| 最近最新免费中文字幕在线| 午夜日韩欧美国产| 国产主播在线观看一区二区| 两性夫妻黄色片| 亚洲欧美一区二区三区久久| 欧美黄色片欧美黄色片| 午夜老司机福利片| 夜夜看夜夜爽夜夜摸 | 国产精品秋霞免费鲁丝片| 99国产精品一区二区三区| 欧美午夜高清在线| 亚洲成国产人片在线观看| 欧美成人午夜精品| 精品国产乱码久久久久久男人| 成人18禁在线播放| 亚洲美女黄片视频| 国产精品久久视频播放| 欧美乱码精品一区二区三区| 国产欧美日韩一区二区三| 欧美日韩一级在线毛片| 国产精品免费视频内射| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 久久久久久久久免费视频了| 国产不卡一卡二| 欧美日韩视频精品一区| av免费在线观看网站| 国产三级黄色录像| 搡老乐熟女国产| 97碰自拍视频| 视频在线观看一区二区三区| 无限看片的www在线观看| 国产精品国产av在线观看| 99热国产这里只有精品6| 女性被躁到高潮视频| 男女床上黄色一级片免费看| 欧美另类亚洲清纯唯美| 久久欧美精品欧美久久欧美| 男人的好看免费观看在线视频 | 久久久久久久久久久久大奶| 久久精品国产综合久久久| av欧美777| 制服诱惑二区| 国产亚洲精品一区二区www| 国产三级在线视频| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| bbb黄色大片| 久久 成人 亚洲| 一边摸一边做爽爽视频免费| 在线视频色国产色| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 国产精品一区二区在线不卡| 亚洲五月色婷婷综合| 亚洲片人在线观看| 久久久国产精品麻豆| 国产熟女午夜一区二区三区| 亚洲在线自拍视频| 超碰成人久久| 亚洲欧美日韩无卡精品| 国产免费av片在线观看野外av| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 999久久久国产精品视频| 夜夜爽天天搞| 成人精品一区二区免费| www.999成人在线观看| 亚洲成国产人片在线观看| 老汉色∧v一级毛片| 嫩草影院精品99| 无人区码免费观看不卡| 欧美乱码精品一区二区三区| 天天影视国产精品| 亚洲精品中文字幕一二三四区| 波多野结衣一区麻豆| av天堂久久9| 天堂俺去俺来也www色官网| 欧美日本中文国产一区发布| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 国产精品一区二区精品视频观看| 亚洲国产精品sss在线观看 | 在线看a的网站| 日韩大码丰满熟妇| 制服人妻中文乱码| 午夜视频精品福利| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 精品日产1卡2卡| 女同久久另类99精品国产91| 国产一区二区三区综合在线观看| 夜夜夜夜夜久久久久| 又紧又爽又黄一区二区| 深夜精品福利| 女警被强在线播放| 久久久久久久久免费视频了| 亚洲少妇的诱惑av| 亚洲,欧美精品.| 国产精品久久视频播放| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 亚洲av五月六月丁香网| 18禁国产床啪视频网站| av福利片在线| 91精品国产国语对白视频| 婷婷精品国产亚洲av在线| 香蕉丝袜av| 法律面前人人平等表现在哪些方面| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 99热只有精品国产| 国产成人影院久久av| 久久热在线av| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 狠狠狠狠99中文字幕| 一级片'在线观看视频| 91在线观看av| 国产精品影院久久| 久久久久久久午夜电影 | 久久 成人 亚洲| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 在线天堂中文资源库| 精品一区二区三区四区五区乱码| 成人永久免费在线观看视频| 在线观看一区二区三区| 亚洲五月婷婷丁香| 中文字幕高清在线视频| 国产亚洲精品第一综合不卡| 亚洲av熟女| 99久久精品国产亚洲精品| 在线观看舔阴道视频| 日韩欧美一区视频在线观看| 精品久久蜜臀av无| 久久人人精品亚洲av| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 一区二区三区激情视频| 天堂中文最新版在线下载| 在线观看免费高清a一片| 国产一卡二卡三卡精品| 国产精品 欧美亚洲| 亚洲欧美日韩无卡精品| 国产成人欧美在线观看| 亚洲成人免费av在线播放| 午夜精品久久久久久毛片777| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 亚洲七黄色美女视频| 国产成人精品久久二区二区免费| 国产一区二区在线av高清观看| 中文字幕最新亚洲高清| 午夜福利一区二区在线看| 老司机午夜福利在线观看视频| 波多野结衣高清无吗| 一级作爱视频免费观看| 超碰97精品在线观看| 亚洲一区二区三区欧美精品| 久热爱精品视频在线9| 一夜夜www| 看黄色毛片网站| 久久久水蜜桃国产精品网| 久久人妻av系列| 午夜福利一区二区在线看| 成熟少妇高潮喷水视频| 男人舔女人下体高潮全视频| 亚洲avbb在线观看| 国产主播在线观看一区二区| www.精华液| 日本欧美视频一区| 欧美一级毛片孕妇| 天天影视国产精品| 成人黄色视频免费在线看| 国产亚洲精品一区二区www| 一进一出好大好爽视频| 精品无人区乱码1区二区| 亚洲专区字幕在线| 在线天堂中文资源库| 亚洲国产中文字幕在线视频| 波多野结衣高清无吗| 日韩大码丰满熟妇| 欧美人与性动交α欧美软件| 午夜福利一区二区在线看| 国产国语露脸激情在线看| 不卡av一区二区三区| 88av欧美| 国产单亲对白刺激| 夜夜看夜夜爽夜夜摸 | 日韩大码丰满熟妇| 最近最新中文字幕大全电影3 | 男女之事视频高清在线观看| 国产精品 欧美亚洲| 国产精品亚洲一级av第二区| 久久久水蜜桃国产精品网| 国产成人一区二区三区免费视频网站| 黑人操中国人逼视频| 成人三级黄色视频| 电影成人av| 制服人妻中文乱码| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 久久久精品欧美日韩精品| 可以免费在线观看a视频的电影网站| 色老头精品视频在线观看| 欧美激情 高清一区二区三区| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 99久久99久久久精品蜜桃| 一区福利在线观看| 女警被强在线播放| 一区二区三区激情视频| 制服诱惑二区| 日本免费一区二区三区高清不卡 | 丁香六月欧美| 国产精品爽爽va在线观看网站 | aaaaa片日本免费| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 大型黄色视频在线免费观看| 日本wwww免费看| 久久欧美精品欧美久久欧美| 最新在线观看一区二区三区| 搡老岳熟女国产| 精品久久蜜臀av无| 黄色a级毛片大全视频| 99re在线观看精品视频| 国产激情久久老熟女| 美女大奶头视频| 99久久综合精品五月天人人| 亚洲国产精品sss在线观看 | 女性被躁到高潮视频| 国产精品九九99| 多毛熟女@视频| 免费看a级黄色片| 免费不卡黄色视频| 欧美在线黄色| 成人18禁在线播放| 国产精品二区激情视频| 精品国内亚洲2022精品成人| 久久久久久大精品| 高清欧美精品videossex| 日本a在线网址| 亚洲国产精品合色在线| 免费看十八禁软件| 久久婷婷成人综合色麻豆| 在线观看日韩欧美| av天堂在线播放| 亚洲免费av在线视频| 99国产极品粉嫩在线观看| 夜夜夜夜夜久久久久| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 午夜久久久在线观看| 黄色女人牲交| 精品久久久久久久久久免费视频 | 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 国产不卡一卡二| svipshipincom国产片| 亚洲成人国产一区在线观看| 国产99久久九九免费精品| 国产精品九九99| 精品国产国语对白av| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 免费高清在线观看日韩| 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 交换朋友夫妻互换小说| 国产视频一区二区在线看| 青草久久国产| 国产深夜福利视频在线观看| 中出人妻视频一区二区| 午夜福利一区二区在线看| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 在线天堂中文资源库| 国产成人精品久久二区二区免费| 一夜夜www| 水蜜桃什么品种好| 国产av又大| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 亚洲成a人片在线一区二区| 免费少妇av软件| 午夜成年电影在线免费观看| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 亚洲av成人一区二区三| 在线看a的网站| 又紧又爽又黄一区二区| 中文字幕人妻熟女乱码| 久久国产乱子伦精品免费另类| 亚洲欧美精品综合久久99| 在线观看一区二区三区| 亚洲在线自拍视频| 天天添夜夜摸| 97人妻天天添夜夜摸| 亚洲五月婷婷丁香| 欧美+亚洲+日韩+国产| 成人国语在线视频| 国产av一区二区精品久久| 91老司机精品| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 国产熟女xx| 国产成人精品无人区| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 丝袜人妻中文字幕| 亚洲专区中文字幕在线| 中文字幕色久视频| 亚洲激情在线av| 免费观看精品视频网站| 日韩欧美免费精品| 国产精品1区2区在线观看.| 一区二区三区精品91| 欧美日韩亚洲高清精品| 最新在线观看一区二区三区| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 我的亚洲天堂| 黑丝袜美女国产一区| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 桃红色精品国产亚洲av| 自线自在国产av| 91麻豆av在线| 久久亚洲精品不卡| 亚洲色图综合在线观看| 精品免费久久久久久久清纯| 久久狼人影院| 欧美中文综合在线视频| 长腿黑丝高跟| 国产精品久久久久成人av| 国产成人精品久久二区二区91| 亚洲精品成人av观看孕妇| 久久精品亚洲av国产电影网| 久久久久亚洲av毛片大全| 欧美成人免费av一区二区三区| 精品国产美女av久久久久小说| 啦啦啦在线免费观看视频4| 久久中文字幕人妻熟女| 变态另类成人亚洲欧美熟女 | 久久国产精品人妻蜜桃| 久久久国产精品麻豆| 岛国在线观看网站| 成人黄色视频免费在线看| 国产野战对白在线观看| 欧美大码av| 国产成人精品在线电影| 曰老女人黄片| 欧美日韩一级在线毛片| 精品国产一区二区三区四区第35| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 香蕉丝袜av| 一边摸一边做爽爽视频免费| 久久这里只有精品19| av欧美777| 国产99久久九九免费精品| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 少妇 在线观看| 黄色片一级片一级黄色片| 国产不卡一卡二| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 久久中文字幕人妻熟女| 亚洲三区欧美一区| 女人精品久久久久毛片| 亚洲第一青青草原| 看片在线看免费视频| 久久久久久久精品吃奶| 欧美亚洲日本最大视频资源| 国产单亲对白刺激| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 又黄又粗又硬又大视频| 香蕉国产在线看| 日韩成人在线观看一区二区三区| 国产精品一区二区免费欧美| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 久久久久久久久久久久大奶| 欧美日韩亚洲高清精品| 校园春色视频在线观看| 久久香蕉国产精品| 9热在线视频观看99| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 无遮挡黄片免费观看| av天堂久久9| 成在线人永久免费视频| 一级黄色大片毛片| 操美女的视频在线观看| 黄片小视频在线播放| 国产熟女xx| 男人的好看免费观看在线视频 | 国产人伦9x9x在线观看| 嫩草影院精品99| 欧美成人午夜精品| 99久久精品国产亚洲精品| 国产91精品成人一区二区三区| 9191精品国产免费久久| 中国美女看黄片| 午夜免费成人在线视频| 丰满迷人的少妇在线观看| 91av网站免费观看| 老汉色∧v一级毛片| 老司机福利观看| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 手机成人av网站| 视频区图区小说| 欧美黑人精品巨大| 在线观看免费高清a一片| 最近最新免费中文字幕在线| 亚洲精品在线观看二区| 最近最新中文字幕大全电影3 | 99re在线观看精品视频| 丁香六月欧美| 久久精品91无色码中文字幕| 免费看a级黄色片| 欧美久久黑人一区二区| а√天堂www在线а√下载| 国产高清视频在线播放一区| 老司机福利观看| 国产精品日韩av在线免费观看 | 91麻豆精品激情在线观看国产 | 超色免费av| 亚洲国产精品sss在线观看 | 亚洲第一青青草原| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 久9热在线精品视频| 精品一品国产午夜福利视频| 在线国产一区二区在线| 一区二区三区精品91| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 黄色怎么调成土黄色| 日韩av在线大香蕉| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| av天堂久久9| 性色av乱码一区二区三区2| 黄色 视频免费看| 欧美另类亚洲清纯唯美| 国产精品日韩av在线免费观看 | 免费在线观看完整版高清| 99国产精品一区二区三区| 国产熟女午夜一区二区三区| 在线观看免费视频网站a站| 在线国产一区二区在线| 国产精品成人在线| 久久狼人影院| 9191精品国产免费久久| 欧美乱妇无乱码| avwww免费| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 成年人黄色毛片网站| 日韩精品免费视频一区二区三区| 色综合婷婷激情| 中文欧美无线码| 午夜a级毛片| 9191精品国产免费久久| tocl精华| 国产av一区二区精品久久| 一本综合久久免费| 在线观看日韩欧美| 欧美午夜高清在线| 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 国产成人av教育| 88av欧美| 国产精品99久久99久久久不卡| 国产区一区二久久| 老汉色av国产亚洲站长工具| 国产精品一区二区精品视频观看| 最新在线观看一区二区三区| 国产黄a三级三级三级人| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 亚洲一区高清亚洲精品| 美女高潮到喷水免费观看| 国产精品亚洲一级av第二区| 精品午夜福利视频在线观看一区| 亚洲av电影在线进入| 丝袜在线中文字幕|