梅毒聯(lián)合檢測(cè)在梅毒首診中的應(yīng)用

蒲濤

摘要：目的 通過梅毒酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）、梅毒甲苯胺紅不加熱血清試驗(yàn)（TRUST），梅毒螺旋體明膠顆粒凝集試驗(yàn)（TPPA）3種方法的對(duì)比，評(píng)價(jià)梅毒聯(lián)合檢測(cè)在梅毒首診中的運(yùn)用。方法 收集住院及門診7224例血清標(biāo)本同時(shí)用3種方法檢測(cè)。結(jié)果 7224例血清標(biāo)本中TP-ELISA陽性325例，陽性檢出率4.50%；TRUST法陽性260例，陽性檢出率3.60%；TPPA陽性檢出率320例，陽性檢出率4.43%。結(jié)論 3種檢測(cè)方法在方法學(xué)上各有其優(yōu)缺點(diǎn)，同時(shí)3種檢測(cè)技術(shù)可以互補(bǔ)方法學(xué)上的缺點(diǎn)，減少梅毒診斷和治療中的誤差。

關(guān)鍵詞：梅毒；ELISA；TRUST；TPPA；誤差

梅毒是由蒼白螺旋體蒼白亞種即梅毒螺旋體引起的一種慢性性傳播疾病，可以侵犯皮膚、粘膜及其他多種組織器官，可有多種多樣的臨床表現(xiàn)，病程中有時(shí)呈無癥狀的潛伏狀態(tài)。目前我院采用ELISA、TRUSAT、TPPA三種血清學(xué)試驗(yàn)聯(lián)合檢測(cè)梅毒，這3種檢測(cè)方法在梅毒的診療過程中各有不同的作用，常需聯(lián)合檢測(cè)才能滿足臨床的診療需求。

1 資料與方法

1.1標(biāo)本來源 標(biāo)本來源于醫(yī)院門診梅毒疑似患者和住院感染性疾病篩查患者血清樣本。

1.2檢測(cè)試劑

1.2.1 ELISA 檢測(cè)試劑與儀器：上海萬泰生物藥業(yè)有限公司 上?？迫AST-36W型酶標(biāo)儀（450 nm和630 nm雙波長）及洗板機(jī)。

1.2.2金標(biāo)法 英科新創(chuàng)科技有限公司。

1.2.3 TRUSAT檢測(cè)試劑 上海榮盛生物藥業(yè)有限公司。

1.2.4 TPPA檢測(cè)試劑 日本富士賽樂迪亞TP-PA。

2 結(jié)果

7224例梅毒聯(lián)合檢測(cè)結(jié)果中，TP-ELISA法檢測(cè)出325例陽性標(biāo)本，陽性檢出率4.50%；TRUST法檢出陽性260例，陽性檢出率3.60%；TPPA法檢測(cè)出陽性320例，陽性檢出率4.43%。三種血清學(xué)方法檢測(cè)梅毒結(jié)果的臨床意義見表1。

3 討論

我院以往臨床醫(yī)師為了減少患者就診的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)，要求對(duì)梅毒感染者只用ELISA一種方法或和TRUSAT同時(shí)對(duì)患者血清標(biāo)本進(jìn)行篩查，二者陽性再用TPPA確診。但是單一梅毒項(xiàng)目的檢測(cè)常由于假陰性或假陽性結(jié)果引起診斷誤差導(dǎo)致漏診和誤診，引起不必要的醫(yī)療糾紛。現(xiàn)在我院對(duì)門診疑似梅毒感染者和住院患者做感染性疾病篩查時(shí)，均采用TP-ELISA、TRUST和TPPA法三種方法同時(shí)檢測(cè)，提高了梅毒的診斷率，降低誤診率和漏診率。常用的梅毒檢測(cè)方法都存在技術(shù)性和生物性的假陽性和假陰性，如何有效避免和控制需要我們不斷探索。我們只有了解每一種實(shí)驗(yàn)方法的優(yōu)缺點(diǎn)和適用范圍，了解假陽性和假陰性的影響因素才能有效避免差錯(cuò)事故的發(fā)生。

梅毒螺旋體侵入人體后，機(jī)體可針對(duì)梅毒螺旋體產(chǎn)生非特異性抗心磷脂抗體和特異性抗梅毒螺旋體抗體。非特異性抗心磷脂抗體是螺旋體半抗原與宿主蛋白結(jié)合，刺激機(jī)體產(chǎn)生抗磷脂的自身IgM和IgG抗體，即反應(yīng)素。特異性抗梅毒螺旋體抗體主要是IgM和IgG抗體，IgM抗體出現(xiàn)時(shí)間早持續(xù)時(shí)間短，IgG抗體較IgM抗體出現(xiàn)時(shí)間晚且持續(xù)時(shí)間長，因此梅毒IgG抗體在有效的抗梅毒治療后相當(dāng)長時(shí)間仍可持續(xù)存在，有些患者甚至終身抗體陽性，適用于梅毒的早期診斷和治療，但其抗體濃度較低不能預(yù)防再次感染為非保護(hù)性抗體?，F(xiàn)在臨床實(shí)驗(yàn)室常用的血清學(xué)試驗(yàn)主要就是針對(duì)這兩種抗體的非螺旋體抗原試驗(yàn)和螺旋體抗原試驗(yàn)[1]。非密螺旋體抗原試驗(yàn)為非特異性試驗(yàn)，多用牛心類脂質(zhì)作為抗原，測(cè)定患者血清中的反應(yīng)素（抗脂質(zhì)抗體）。密螺旋體抗原試驗(yàn)是用密螺旋體抗原檢測(cè)患者血清中的特異性抗梅毒螺旋體抗體[1]。因此，為了提高梅毒的檢出率，降低梅毒假陽性和假陰性結(jié)果，我們針對(duì)這兩種抗體采用ELISA，TRUSAT，TPPA三種方法來協(xié)助臨床梅毒的輔助診斷和治療以及療效觀察。

ELISA：梅毒血清學(xué)的初篩試驗(yàn)?，F(xiàn)在ELISA采用雙抗原夾心法，主要是用基因重組體外表達(dá)的梅毒螺旋體特異抗原包被，包括螺旋體四種膜抗原檢測(cè)患者血中的特異性抗梅毒螺旋體抗體，由于ELISA檢測(cè)的是梅毒IgG和IgM混合抗體，因此該檢測(cè)方法對(duì)早晚期梅毒有較高的診斷特異性和敏感性，但陽性結(jié)果只能解釋病原體曾經(jīng)感染過或正在感染機(jī)體，不能對(duì)梅毒疾病活動(dòng)情況做出判斷，所以不能作為抗梅毒治療效果的監(jiān)測(cè)手段[1]。同時(shí)血清中高濃度的梅毒特異性抗體常引起前帶現(xiàn)象，導(dǎo)致ELISA檢測(cè)的假陰性結(jié)果，此血清標(biāo)本經(jīng)倍數(shù)稀釋后可出現(xiàn)陽性反應(yīng)，若同時(shí)用TRUAT和TPPA方法檢測(cè)結(jié)果均為陽性，這種情況常常出現(xiàn)在二期梅毒患者中，應(yīng)該引起我們高度重視。檢測(cè)中還發(fā)現(xiàn)5例老年人假陽性結(jié)果，可能是少數(shù)老年人血清中存在干擾ELISA反應(yīng)的白蛋白抗體或一些異常蛋白[5]。

梅毒金標(biāo)法是新近發(fā)展起來的快速體外診斷技術(shù)，根據(jù)雙抗原夾心免疫層析原理，檢測(cè)梅毒螺旋體特異性抗體，操作簡(jiǎn)單快速[2]。我們主要用于ELISA法陽性結(jié)果的復(fù)查，特別是前帶現(xiàn)象引起的ELISA法假陰性結(jié)果的確定。缺點(diǎn)是梅毒特異性抗體滴度較低的標(biāo)本，由于測(cè)定值低于試劑的測(cè)定下線金標(biāo)法結(jié)果往往為陰性。

TRUSAT：主要用于檢測(cè)血清中的反應(yīng)素，操作簡(jiǎn)單快速常作為梅毒的篩查試驗(yàn)。但是此試驗(yàn)特異性不高，檢測(cè)結(jié)果易受多種因素影響，除感染梅毒和其他螺旋體感染出現(xiàn)陽性外，某些自身免疫性疾病和生理狀況的改變?nèi)缂甭愿腥?、懷孕、麻風(fēng)、吸毒、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等也可能產(chǎn)生低滴度的抗類脂質(zhì)抗體引起交叉反應(yīng)，造成生物學(xué)假陽性[4]，一般滴度小于1∶8，因此不能單獨(dú)根據(jù)此項(xiàng)檢測(cè)結(jié)果陽性診斷梅毒，可以用特異性較強(qiáng)的TPPA法來證實(shí)結(jié)果。同時(shí)為了避免TRUST假陰性或弱陽性結(jié)果，我們?cè)跈z測(cè)過程中梅毒TRUSA滴度常做到1∶8。另外肉眼觀察結(jié)果，其漏檢率也較高，故特異性和敏感性較低。同時(shí)由于抗心磷脂抗體較特異性抗體出現(xiàn)晚，而在梅毒晚期可以轉(zhuǎn)陰，因此該方法不適合一期和三期梅毒診斷[4]。TRUST滴度在臨床上主要用于患者驅(qū)梅治療后的療效觀察，有效治療后其檢測(cè)滴度表現(xiàn)為逐漸下降甚至轉(zhuǎn)陰，復(fù)發(fā)時(shí)又可出現(xiàn)，滴度變化與梅毒有效治療呈正關(guān)系。因此，該方法既可用于梅毒病原診斷，又可用于梅毒療效觀察、隨訪和復(fù)發(fā)的輔助診斷[2]。

TPPA：具有較高的特異性和敏感性，并且檢測(cè)方法快速、簡(jiǎn)便。梅毒特異性抗體在感染梅毒螺旋體后血中出現(xiàn)時(shí)間及1、2期梅毒中的檢出率幾乎等同于非特異性抗體，感染者一旦感染后該抗體有可能終身檢測(cè)為陽性，因此不能作為梅毒的療效評(píng)估、復(fù)發(fā)和再感染診斷。梅毒特異性抗體生物學(xué)假陽性極低，可以利用此試驗(yàn)排除非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)所致的生物學(xué)假陽性?？傊诿范究贵w檢測(cè)方法特異性上優(yōu)于TRUST法，適用于梅毒ELISA和TRUST測(cè)定陽性后的確診試驗(yàn)[4]，但不適合大批量標(biāo)本的篩查。

由此可見，不同梅毒血清學(xué)檢測(cè)方法聯(lián)合運(yùn)用能夠提高梅毒檢出的準(zhǔn)確率[3]，同時(shí)在臨床工作中對(duì)待特殊結(jié)果應(yīng)積極與醫(yī)生和患者溝通，做出合理的解釋。在操作過程中，除了生物學(xué)影響因素外，標(biāo)本的溶血、細(xì)菌污染、保存不當(dāng)、洗板時(shí)洗液溢孔污染等都會(huì)引起結(jié)果假陽性，這些情況都要注意避免。梅毒血清學(xué)檢查是診斷梅毒的重要依據(jù)，但不是唯一依據(jù)。因此，為了避免梅毒檢測(cè)方法學(xué)上的誤差，我們針對(duì)上述情況與醫(yī)生協(xié)商溝通，要求醫(yī)生對(duì)于疑似患者最好進(jìn)行三種方法的聯(lián)合檢測(cè)，以提高梅毒血清學(xué)檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性，同時(shí)對(duì)梅毒的診斷除依據(jù)化驗(yàn)結(jié)果外，更要詳細(xì)了解患者的生活史和既往病史，結(jié)合患者臨床表現(xiàn)、年齡等因素綜合分析后慎重做出判斷，這樣才能從根本上減少實(shí)驗(yàn)方法學(xué)缺陷造成的假陽性和假陰性誤差，降低梅毒個(gè)體的漏檢和誤診。

參考文獻(xiàn)：

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編輯/王海靜