從醛固酮(ALD)的分泌與合成探討硝菔通結(jié)方從腎論治便秘的作用機(jī)制*

梁星琛，周永學(xué)，閆曙光，張小波

(1.成都中醫(yī)藥大學(xué)，成都 610075；2.陜西中醫(yī)藥大學(xué)，陜西 咸陽(yáng) 712046)

從醛固酮(ALD)的分泌與合成探討硝菔通結(jié)方從腎論治便秘的作用機(jī)制*

梁星琛1，周永學(xué)2△，閆曙光2，張小波2

(1.成都中醫(yī)藥大學(xué)，成都 610075；2.陜西中醫(yī)藥大學(xué)，陜西 咸陽(yáng) 712046)

目的：觀察硝菔通結(jié)方對(duì)功能性便秘大鼠醛固酮(ALD)合成和分泌的影響，從現(xiàn)代醫(yī)學(xué)腎臟調(diào)節(jié)水液代謝的角度揭示硝菔通結(jié)方從腎論治便秘的作用機(jī)制。方法：48只成年雄性SD大鼠采用隨機(jī)數(shù)字表法分為空白組(8只)和造模組(40只)，造模組灌胃復(fù)方地芬諾酯混懸液6周復(fù)制便秘模型后隨機(jī)分為模型組(FC組)、硝菔通結(jié)方高、中、低劑量組、陽(yáng)性藥物對(duì)照組(蓯蓉通便口服液組，簡(jiǎn)稱口服液組)。各治療組給予不同劑量的硝菔通結(jié)方，陽(yáng)性藥物對(duì)照組給予蓯蓉通便口服液(后簡(jiǎn)稱口服液組)灌胃1個(gè)月。觀察各組大鼠的一般情況以及結(jié)腸含水率，ELISA法檢測(cè)各組大鼠血清中醛固酮(ALD)、腎素(PRA)、血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)、血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)的含量,RT-PCR法檢測(cè)腎臟組織中MRmRNA的水平，Western-Blot法檢測(cè)結(jié)腸組織中AQP3的表達(dá)。結(jié)果：模型組大鼠糞便量少、質(zhì)地干硬，結(jié)腸含水率明顯降低，血清中ALD、PRA、AngⅡ、ACE的含量升高，腎臟組織中MRmRNA表達(dá)升高，結(jié)腸組織中AQP3的表達(dá)明顯升高；與模型組比較，各劑量硝菔通結(jié)方治療組以及口服液組大鼠糞便量增加且質(zhì)地稀軟，結(jié)腸含水率增高，血清中ALD、PRA、AngⅡ、ACE的含量均降低，腎臟組織中MRmRNA表達(dá)降低，結(jié)腸組織中AQP3的表達(dá)顯著降低。結(jié)論：腎臟能通過(guò)調(diào)節(jié)ALD合成與分泌而影響腸道的水液代謝，這可能是中醫(yī)從腎論治便秘的科學(xué)內(nèi)涵之一，硝菔通結(jié)方可通過(guò)影響ALD合成與分泌調(diào)節(jié)腸道的水液代謝，從而對(duì)功能性便秘發(fā)揮治療作用。

硝菔通結(jié)方；功能性便秘；ALD；RAAS

便秘是以排便次數(shù)減少、糞便量減少、糞便干結(jié)、排便費(fèi)力等表現(xiàn)為主的一種復(fù)雜癥狀?，F(xiàn)代研究表明，腸道水液代謝紊亂引起的腸道功能失常是功能性便秘形成的核心因素，調(diào)節(jié)腸道水液代謝成為功能性便秘治療的關(guān)鍵[1-2]。硝菔通結(jié)方是周永學(xué)教授根據(jù)“腎主水司二便”理論創(chuàng)制的對(duì)功能性便秘臨床療效確切的方劑。前期研究發(fā)現(xiàn)，該方能有效調(diào)節(jié)腸道水液代謝，改善功能性便秘大鼠所出現(xiàn)的脫毛、毛色干枯、膀胱水液潴留、扎堆等與中醫(yī)“腎虛”相關(guān)的癥狀，但其治療腎虛的機(jī)制尚不清楚。中醫(yī)學(xué)的“腎”主要是功能概念，其“主水司二便”的功能與現(xiàn)代醫(yī)學(xué)腎臟調(diào)節(jié)水液的作用相類似。腎臟主要是通過(guò)調(diào)節(jié)水電解質(zhì)的重吸收和分泌在水液代謝方面發(fā)揮重要作用，其對(duì)水液代謝的調(diào)節(jié)作用主要是通過(guò)調(diào)節(jié)醛固酮(ALD)的合成與分泌、涉及腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)(RAAS)來(lái)實(shí)現(xiàn)的[3]。因此本次研究擬以與腎臟水液代謝密切相關(guān)的ALD以及RAAS系統(tǒng)為切入點(diǎn)，觀察功能性便秘發(fā)生時(shí)腸道水液代謝與該系統(tǒng)的變化，進(jìn)一步觀察硝菔通結(jié)方對(duì)其影響，以期從現(xiàn)代醫(yī)學(xué)腎臟調(diào)節(jié)水液角度探討中醫(yī)“腎主水司二便”的科學(xué)內(nèi)涵，揭示硝菔通結(jié)方從腎論治便秘的作用機(jī)制，現(xiàn)將研究結(jié)果報(bào)告如下。

1 材料

1.1 動(dòng)物

清潔級(jí)雄性SD大鼠48只，體質(zhì)量(200±20)g，購(gòu)于中國(guó)人民解放軍第四軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心(許可證號(hào)SCXK-(軍)2012-0007)。

1.2 藥物及制備

硝菔通結(jié)方(芒硝30 g，鮮萊菔1000 g，肉蓯蓉15 g，當(dāng)歸15 g，白術(shù)15 g)中鮮萊菔購(gòu)于市場(chǎng)，其余中藥飲片購(gòu)于陜西興盛德中藥飲片有限公司，并經(jīng)陜西中醫(yī)藥大學(xué)中藥教研室鑒定合格。鮮萊菔切片水煮至熟爛撈出得濃汁，納芒硝至完全融化，其他藥物納入同煎，濃縮至56 ml(19 g/ml)，滅菌后于4℃冰箱保存。復(fù)方地芬諾酯片(常州康普藥業(yè)有限公司，批號(hào)1509020)粉碎后用蒸餾水配置成地芬諾酯混懸液，4℃冰箱保存。蓯蓉通便口服液購(gòu)于天水岐黃藥業(yè)有限責(zé)任公司(批號(hào)20160323)。

1.3 儀器與試劑

ELX808型酶標(biāo)儀(美國(guó)Bio-Tek公司)；KDC-40型低速離心機(jī)(科大創(chuàng)新股份有限公司中佳分公司)；高速冷凍離心機(jī)(日本日立CR22G II)；KDC-40低速離心機(jī)(科大創(chuàng)新股份有限公司)；全自動(dòng)凝膠成像系統(tǒng)(美國(guó)ProteinSimple公司FC3)；大鼠血管緊張素Ⅱ(ANGⅡ)ELISA KIT、醛固酮(ALD)ELISA KIT、大鼠血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)ELISA KIT、大鼠腎素(PRA)ELISA KIT，以上試劑均來(lái)自伊萊瑞特生物科技有限公司；CDNA合成試劑盒、Q-PCR試劑盒(北京全式金生物技術(shù)有限公司)；MR引物設(shè)計(jì)與合成(ABI公司)；BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒(上海貝博生物公司)；RIPA組織細(xì)胞裂解液(北京碧云天生物技術(shù)研究所)；PMSF(江蘇碧云天生物技術(shù)研究所)；TEMED(Sigma公司)；吐溫20 (Tween20)(Sigma公司)；PVDF膜(Immobilon-P)；4×上樣緩沖液(北京索萊寶科技有限公司)；10×電轉(zhuǎn)液(北京索萊寶科技有限公司)；ECL化學(xué)發(fā)光液(Biological Industries)。

2 方法

2.1 動(dòng)物分組

清潔級(jí)雄性SD大鼠48只，按隨機(jī)數(shù)字表法分為空白組(8只)和造模組(40只)，造模組灌胃復(fù)方地芬諾酯混懸液6周復(fù)制便秘模型，待大鼠出現(xiàn)明顯的糞便量減少、糞便顆粒變小、糞質(zhì)變干等便秘癥狀后再次采用隨機(jī)數(shù)字表法分為功能性便秘模型組(FC組)、硝菔通結(jié)方高劑量組、中劑量組、低劑量組、蓯蓉通便口服液組(簡(jiǎn)稱口服液組)各8只。

2.2 動(dòng)物模型建立

根據(jù)本課題前期實(shí)驗(yàn)中大鼠功能性便秘模型的建立方法，各組大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，F(xiàn)C組、硝菔通結(jié)方各劑量組及口服液組給予10 ml/kg體積(1.5 mg/ml濃度)復(fù)方地芬諾酯混懸液灌胃，空白組以等體積生理鹽水灌胃，每天1次，共給藥6周。當(dāng)大鼠出現(xiàn)精神狀態(tài)差、進(jìn)食減少、喜扎堆、糞便量少、質(zhì)地干硬等表現(xiàn)時(shí)，為造模成功。

2.3 給藥方法及劑量

造模結(jié)束后，空白組和便秘模型組正常飼養(yǎng)，并以0.9%生理鹽水灌胃。根據(jù)大鼠與人之間的用藥劑量換算方法，大鼠高、中、低劑量組給藥量分別為高劑量380 g/kg，中劑量190 g/kg，低劑量95 g/kg。根據(jù)蓯蓉通便口服液的臨床等效劑量，口服液組給予蓯蓉通便口服液每只0.3 mL/次灌胃。

2.4 實(shí)驗(yàn)技術(shù)與檢測(cè)方法

2.4.1 一般情況觀察 每日觀察動(dòng)物一般行為表現(xiàn)及排便情況。

2.4.2 ELISA法檢測(cè)模型大鼠血中ALD、PRA、AngⅡ以及ACE的含量 末次給藥2 h后，10%水合氯醛300 mg·kg-1ip麻醉，用真空采血負(fù)壓管腹主動(dòng)脈取血采血3～5 ml，室溫放置30 min后，將KDC-40低速離心機(jī)調(diào)至3000 r·min-1離心10 min，10 min后分離待測(cè)血清，大鼠ALD、PRA、AngⅡ和ACE按ELISA試劑盒說(shuō)明書步驟進(jìn)行。

2.4.3 RT-PCR法檢測(cè)腎臟MRmRNA的表達(dá) 按Trizol試劑盒提取腎臟總RNA測(cè)其濃度值并定量，然后進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄。PCR引物由ABI公司的Primer Express Software v 2.0設(shè)計(jì)，MR引物上游：5′-TGCCATCCAGGATGTGGTTC-3′，下游：5′- GGCCAGTCACACCATTGGAG -3′，同時(shí)擴(kuò)增β-actin為內(nèi)參，其引物上游：5′- TCACCCACACTGTGCCCATC -3′，下游：5′- AGCTGTAGCCACGCTCGGTC -3′，實(shí)驗(yàn)嚴(yán)格按照說(shuō)明書進(jìn)行，PCR反應(yīng)條件為95℃ 2 min，94℃ 10 s，60℃ 10 s，72℃ 40 s，共40個(gè)循環(huán)。反應(yīng)結(jié)束后上凝膠，電泳凝膠分析軟件分析結(jié)果。各組MRmRNA的表達(dá)水平以相對(duì)表達(dá)量即MRmRNA與β-actin的比值來(lái)表示。

2.4.4 結(jié)腸含水率的測(cè)定 給藥結(jié)束后，24 h內(nèi)大鼠禁食不禁水，腹腔注射麻醉(10%的水合氯醛4 ml/kg),取肛門上方2 cm部位結(jié)腸組織，冰生理鹽水清洗稱取濕重，放置60℃恒溫干燥箱干燥稱其干重，計(jì)算結(jié)腸含水率。結(jié)腸含水率=(濕重-干重)/濕重×100%。

2.4.5 Western-Blot法檢測(cè)大鼠結(jié)腸組織中AQP3的表達(dá) RIPA裂解液提取結(jié)腸組織總蛋白充分震蕩，冰上放置30 min，4℃12000 r/min離心3～5 min，收集上清液。采用BCA法進(jìn)行總蛋白定量。SDS-PAGE凝膠電泳，每孔加入50 μg蛋白，用夾心法電轉(zhuǎn)至PVDF膜上，封閉液(1×TBST，3%脫脂奶粉)室溫封閉1 h。將一抗用封閉液(5%脫脂奶粉+TBST)稀釋500倍，將洗好的膜放入塑料袋中加入稀釋好的一抗4 ml進(jìn)行孵育，4℃過(guò)夜。用洗滌液(1×TBST)洗滌3次，每次10 min。將二抗用封閉液(5%脫脂奶粉+TBST)稀釋1000倍，將洗好的膜放入塑料袋中加入稀釋好的二抗4 ml進(jìn)行孵育，室溫2 h。用洗滌液洗滌3 次，每次10 min，將膜平放于干燥的ECL發(fā)光板，將新鮮配置好的ECL發(fā)光液(A液2 ml+B液2ml)滴加到標(biāo)記過(guò)的膜表面，采用全自動(dòng)凝膠成像系統(tǒng)進(jìn)行拍照。Western blot結(jié)果用光密度掃描分析軟件分析各條帶的光密度值，以積分光密度值(IOD)表示。

2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

3 結(jié)果

3.1 一般情況表現(xiàn)

造模開(kāi)始后大鼠出現(xiàn)精神狀態(tài)差、倦怠倦臥、喜扎堆、食量減少、糞便量少、質(zhì)地干硬等表現(xiàn)，部分大鼠出現(xiàn)小便不利或(和)被毛脫落且光澤度下降等表現(xiàn)。給藥治療后，硝菔通結(jié)方低、中、高劑量組大鼠上述癥狀逐漸減輕至消失，其中高劑量組最為明顯。

3.2 對(duì)功能性便秘大鼠血清ALD含量的影響

表1顯示，與空白組比較，模型組大鼠血清中的ALD含量升高(P<0.05)，表明便秘發(fā)生時(shí)腎臟的水液代謝亦受到影響；與模型組比較，硝菔通結(jié)方各劑量組與口服液大鼠血清中ALD含量明顯降低(P<0.05)，表明硝菔通結(jié)方及蓯蓉通便口服液能調(diào)節(jié)腎臟的水液代謝。

表1 硝菔通結(jié)方對(duì)功能性便秘大鼠血清ALD的影響±s)

注：與空白組比較:★P<0.05；與模型組比較:▲P<0.05

3.3 對(duì)功能性便秘大鼠RAAS系統(tǒng)的影響

表2顯示， 與空白組比較，模型組大鼠血清中PRA含量顯著高于空白組(P<0.01),血清中AngⅡ以及ACE含量均高于空白組(P<0.05)；與模型組比較，硝菔通結(jié)方各劑量組與口服液組大鼠血清中AngⅡ及ACE含量降低(P<0.05)，大鼠血清中PRA的含量顯著降低(P<0.01)。

表2 硝菔通結(jié)方對(duì)功能性便秘大鼠血清PRA、AngⅡ以及ACE的影響±s)

注：與空白組比較:★P<0.05，★★P<0.01；與模型組比較:▲P<0.05，▲▲P<0.01

3.4 對(duì)功能性便秘大鼠腎臟MRmRNA表達(dá)的影響

表3顯示，與空白組比較，模型組大鼠腎臟MRmRNA表達(dá)升高(P<0.05)；與模型組比較，硝菔通結(jié)方各劑量組與陽(yáng)性藥物對(duì)照組大鼠腎臟MRmRNA明顯降低(P<0.05)。

3.5 結(jié)腸含水率

表4顯示，與空白組比較，模型組大鼠結(jié)腸含水率明顯減少(P<0.01)，與模型組比較，硝菔通結(jié)方高劑量組及陽(yáng)性藥物對(duì)照組大鼠結(jié)腸含水率顯著增多(P<0.01)，中劑量組和低劑量組大鼠結(jié)腸含水量增多(P<0.05)。

3.6 硝菔通結(jié)方對(duì)功能性便秘大鼠結(jié)腸組織中水通道蛋白3表達(dá)的影響

3.7 硝菔通結(jié)方對(duì)功能性便秘大鼠結(jié)腸組織中AQP3表達(dá)的影響

圖1表5顯示，與空白組比較，模型組大鼠結(jié)腸組織AQP3表達(dá)明顯升高(P<0.01)，表明便秘發(fā)生時(shí)，由AQP3所介導(dǎo)的腸道水液代謝出現(xiàn)了紊亂；給藥治療后，與模型組比較硝菔通結(jié)方各劑量組以及陽(yáng)性藥物對(duì)照組大鼠結(jié)腸AQP3表達(dá)水平降低(P<0.05)，其中高劑量組大鼠結(jié)腸AQP3表達(dá)水平顯著降低(P<0.01)。

表3 硝菔通結(jié)方對(duì)功能性便秘大鼠腎臟MRmRNA表達(dá)的影響

注：與空白組比較:★P<0.05；與模型組比較:▲P<0.05

表4 硝菔通結(jié)方對(duì)功能性便秘大鼠結(jié)腸組織含水率的影響±s)

注：與空白組比較:★★P<0.01；與模型組比較:▲P<0.05，▲▲P<0.01

圖1 各組大鼠結(jié)腸AQP3的表達(dá)注：1.空白組；2.便秘模型組；3.硝菔通結(jié)方高劑量組；4.硝菔通結(jié)方中劑量組；5.硝菔通結(jié)方低劑量組；6.蓯蓉通便口服液組

表5 硝菔通結(jié)方對(duì)功能性便秘大鼠結(jié)腸組織中AQP3含量的影響

注：與空白組比較:★★P<0.01；與模型組比較:▲P<0.05，▲▲P<0.01

4 討論

現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究表明，腎臟是人體水液代謝的核心，其對(duì)水液代謝的調(diào)節(jié)功能主要是通過(guò)影響水電解質(zhì)的重吸收和分泌來(lái)實(shí)現(xiàn)的，腎臟的功能又受到激素的調(diào)節(jié)。在眾多的調(diào)節(jié)激素中，ALD至關(guān)重要，具有調(diào)節(jié)腎臟對(duì)鈉的重吸收、維持水平衡的作用。ALD的合成和分泌涉及RAAS系統(tǒng)，RAAS系統(tǒng)是體內(nèi)分布最廣的內(nèi)分泌調(diào)節(jié)系統(tǒng)，具有直接或間接調(diào)節(jié)水電解質(zhì)的作用，其中腎素(PRA)、血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)、血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)為RAAS系統(tǒng)中的重要組成部分。PRA分泌增加可直接興奮醛固酮的分泌，從而促進(jìn)其發(fā)揮保鈉保水的生理功能；另一方面作為RAAS系統(tǒng)的引發(fā)物，能將血漿中的血管緊張素降解，將血管緊張素原分解為AngI，通過(guò)血管緊張素轉(zhuǎn)化酶的作用轉(zhuǎn)化為AngⅡ，AngⅡ可通過(guò)協(xié)同作用促進(jìn)鈉的重吸收或?qū)︹c的轉(zhuǎn)運(yùn)有直接作用調(diào)節(jié)鈉平衡[4]。同時(shí)，鹽皮質(zhì)激素受體(MR)是公認(rèn)的與ALD結(jié)合的特異性受體，ALD與MR結(jié)合成為復(fù)合物，并通過(guò)核膜與核中DNA特異性結(jié)合位點(diǎn)相互作用，調(diào)節(jié)特異性mRNA轉(zhuǎn)錄，最終合成多種醛固酮誘導(dǎo)蛋白，使管腔膜對(duì)Na+的通透性增大，導(dǎo)致對(duì)Na+的重吸收增強(qiáng)，對(duì)水的重吸收和K+的排出量增加，從而發(fā)揮其保鈉保水的作用[5-6]。AQPs是水分子蛋白，對(duì)維持機(jī)體水分子平衡具有重要作用，執(zhí)行著各部位的水分重吸收、液體分泌和細(xì)胞內(nèi)外的水平衡功能[7]。AQP3主要分布于結(jié)腸的黏膜上皮中。Yuan W T[8]等研究表明，AQP3在功能性便秘患者升結(jié)腸上表達(dá)升高，說(shuō)明其在大腸內(nèi)的異常表達(dá)導(dǎo)致結(jié)腸對(duì)水分的吸收過(guò)度，從而導(dǎo)致便秘的發(fā)生。錢海華[9]等經(jīng)過(guò)研究證實(shí)，通便顆粒通過(guò)下調(diào)AQP3的表達(dá)，從而減少腸道對(duì)水分的吸收，增加糞便含水量來(lái)治療功能性便秘。

中醫(yī)學(xué)的病因病機(jī)體系中，便秘的發(fā)生病位在大腸，但與腎密切相關(guān)，腎的氣化功能和腎精的滋養(yǎng)作用有關(guān)?！饵S帝內(nèi)經(jīng)》中此觀點(diǎn)尤為突出：“腎開(kāi)竅于二陰”。腎主司二便，腎氣足則氣化有度，二便排泄正常，故《黃帝內(nèi)經(jīng)》認(rèn)為大小便異常皆與腎有關(guān)。又腎主水，腎虛不能主持津液的排泄和分布，腸道津液不足也可導(dǎo)致排便困難。綜上所述，功能性便秘的病機(jī)以腎虛津虧為主，故配伍用藥應(yīng)以補(bǔ)腎益精為胃腸傳化之性提供動(dòng)力，驅(qū)除濁邪以為胃腸傳化之性肅清道路，從而恢復(fù)“大腸者，傳道之官，變化出焉”。根據(jù)便秘的臨床表現(xiàn)以及病因病機(jī)學(xué)說(shuō)，周永學(xué)教授倡導(dǎo)功能性便秘從腎論治，溫腎益精治其本，潤(rùn)腸通腑治其標(biāo)，在此基礎(chǔ)上創(chuàng)立了硝菔通結(jié)方(肉蓯蓉、當(dāng)歸、芒硝、萊菔、白術(shù))。該方參考《景岳全書》中濟(jì)川煎的組方，在張錫純硝菔通結(jié)湯基礎(chǔ)上加入肉蓯蓉、當(dāng)歸創(chuàng)制而成。四藥合用，共奏溫腎益精養(yǎng)血、軟堅(jiān)潤(rùn)下通便之功。且該方另一優(yōu)勢(shì)是各味藥材均不含蒽醌類成分，無(wú)導(dǎo)致“瀉劑結(jié)腸”之憂。經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期臨床應(yīng)用證實(shí)，其療效確切，明顯優(yōu)于對(duì)照組中成藥，且未發(fā)現(xiàn)明顯毒副作用[10]。前期實(shí)驗(yàn)研究表明，硝菔通結(jié)方治療功能性便秘療效確切，能有效糾正便秘大鼠腸道的水液代謝紊亂，然而目前從腎論治的本質(zhì)及其調(diào)節(jié)水液代謝的深層機(jī)制尚不清楚。中醫(yī)學(xué)的腎為功能概念，是多體系、多臟器共同作用的結(jié)果，其具有藏精、主生殖、主水、司二便等功能，其中腎主水司二便的功能與功能性便秘的發(fā)生密切相關(guān)。腎主水司二便的功能又與現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的水液代謝相對(duì)應(yīng)，人體二便的產(chǎn)生與排泄均與水液代謝密切相關(guān)，而現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的腎臟是人體水液代謝的核心，因此對(duì)腎臟水液代謝的觀察可部分反映“腎主水司二便的”的功能，從腎論治便秘有據(jù)可循。

本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果顯示，功能型便秘大鼠血清中ALD、PRA、AngⅡ、ACE含量升高，腎臟組織中MRmRNA表達(dá)均升高，同時(shí)結(jié)腸含水率降低，結(jié)腸組織中的AQP3表達(dá)增高，說(shuō)明RAAS系統(tǒng)的過(guò)度激活，導(dǎo)致ALD的合成與分泌加快，使得腎臟對(duì)水液的重吸收增加，導(dǎo)致腸中水液代謝也出現(xiàn)紊亂，從而引起便秘。硝菔通結(jié)方可使各組大鼠便秘癥狀得到明顯改善，并降低血清中ALD、PRA、AngⅡ、ACE的含量，還可下調(diào)大鼠MRmRNA水平，同時(shí)增加結(jié)腸組織的含水率，抑制結(jié)腸組織中AQP3的過(guò)度表達(dá)。此研究結(jié)果表明，腎臟能通過(guò)調(diào)節(jié)ALD合成與分泌及RAAS系統(tǒng)而影響腸道的水液代謝，這可能是中醫(yī)“從腎論治便秘”的科學(xué)內(nèi)涵之一；硝菔通結(jié)方能通過(guò)影響ALD合成與分泌，抑制RAAS系統(tǒng)的過(guò)度激活，從而降低腎臟對(duì)水液的重吸收，糾正便秘大鼠腸道水液代謝紊亂而對(duì)功能性便秘發(fā)揮治療作用。但ALD與RAAS系統(tǒng)是否直接作用于腸道中的AQP3，其機(jī)制又是什么，還需要進(jìn)一步深入的研究。

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Functional Mechanism of aldosterone(ALD) Secretion and Synthesis of Xiao Fu Tong Jie Decoction on Treating Constipation from the Kidney

LIANG Xing-chen1，ZHOU Yong-xue2△，YAN Shu-guang2，ZHANG Xiao-bo2

(1.ChengduUniversityofChineseMedicine，Chengdu610075,China; 2.ShanxiUniversityofChineseMedicine，Xianyang,Shanxi712046,China)

To observe the influnce that Xiao Fu Tong Jie Prescription to treat functional constipation rats from the view of aldosterone’s synthesis and secretion.From the view of the kindney adjust water metabolism,we reveal the mechanism of action of nursing functional constipation from the kindey.Methods:48 SD rats were randomly divided into blank control group(8 SD rats)and functional constipation model group(40 SD rats).All were given compound diphenoxylate for 6 weeks and then divided into Xiao Fu Tong Jie Prescription high, medium, low dose group and positive drug group(Cong Rong Tong Bian oral liquid).These treatment groups were treated with different dose of Xiao Fu Tong Jie Prescription. Positive drug group was treated with Cong Rong Tong Bian oral liquid.All for one month. Observed the general condition of each group and the water content of the colon.The protein expression of the aldosterone(ALD)、renin(PRA)、angiotensinⅡ(AngⅡ)、angiotensin-converting enzyme(ACE)by enzyme linked immunosorbent assay(ELISA). The mRNA and protein expression of MR were determined by Real-time PCR. The protein expression of the Western blot were used to detect the expression of AQP3 in colon. Results：Compared with the blank control group,the rats of model group had less feces and texture was hard.The water content of the colon levels were significantly decreased.ALD、PRA、AngⅡ、ACE content were increased.MR mRNA relative expression levels were increased. Levels of AQP3 relative expression levels were significantly increased；Compared with the model group,the rats of treatment groups had more feces and texture was loose.The water content of the colon levels were significantly increased.ALD、PRA、AngⅡ、ACE content were decreased.MR mRNA relative expression levels were decreased. Levels of AQP3 relative expression levels were significantly decreased after giving Xiao Fu Tong Jie Prescription and Cong Rong Tong Bian oral liquid.Conclusions:The kidney can affect water metabolism disorder in colon by adjusting ALD’s synthesis and secretion.This may be one of the scientific connotation of nursing functional constipation from the kindey；Xiao Fu Tong Jie Prescription can affect water metabolism disorder in colon by adjusting ALD’s synthesis and secretion to nursing functional constipation.

Xiao Fu Tong Jie Prescription；Functional Constipation；ALD；RAAS

國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(81273663)-基于VIP-CAMP-PKA-AQP3通路的硝菔通結(jié)方治療功能性便秘的作用機(jī)制研究；國(guó)家課題重大專項(xiàng)(2012ZX09103201-037)-硝菔通結(jié)丸研制

梁星琛(1987-)，女，陜西咸陽(yáng)人，在讀博士,從事中醫(yī)方劑學(xué)的臨床與研究。

△通訊作者：周永學(xué)，教授，博士研究生導(dǎo)師，從事方劑配伍基礎(chǔ)與臨床研究，Tel:18691068166,E-mail: zhou8521@163.com。

R285.5

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1006-3250(2017)02-0338-04

2016-06-12