大鼠不同心肌狀態(tài)對相關(guān)經(jīng)穴和非相關(guān)經(jīng)穴皮膚溫度的影響

戴 健，嵇 波，路雅雯，趙國楨，王 丹，嚴(yán)明娜，白紅新，孫曉敏，張 平，劉亞利，郭孟瑋，程 凱

（北京中醫(yī)藥大學(xué)，北京 100029）

大鼠不同心肌狀態(tài)對相關(guān)經(jīng)穴和非相關(guān)經(jīng)穴皮膚溫度的影響

戴 健，嵇 波*，路雅雯，趙國楨，王 丹，嚴(yán)明娜，白紅新，孫曉敏，張 平，劉亞利，郭孟瑋，程 凱

（北京中醫(yī)藥大學(xué)，北京 100029）

目的 通過觀測大鼠心肌處于正常生理態(tài)、缺血損傷病理態(tài)、低頻電針和高頻電針刺激后干預(yù)狀態(tài)時相關(guān)經(jīng)穴和非相關(guān)經(jīng)穴皮膚溫度變化的規(guī)律，探尋機體的機能狀態(tài)與相關(guān)經(jīng)穴的相關(guān)性。方法 將50只雄性Wistar大鼠按照隨機數(shù)字表分為5組，空白對照組、假手術(shù)組、模型組、經(jīng)穴低頻電針內(nèi)關(guān)穴組、經(jīng)穴高頻電針內(nèi)關(guān)穴組，每組10只。于第3天治療后，檢測心電圖，應(yīng)用紅外熱成像技術(shù)檢測各組大鼠內(nèi)關(guān)、足三里、陽陵泉穴區(qū)的皮膚溫度，并進(jìn)行統(tǒng)計分析。結(jié)果 與空白對照組相比較，大鼠在心肌缺血損傷病理態(tài)時，雙側(cè)相關(guān)經(jīng)穴內(nèi)關(guān)、足三里穴區(qū)溫度均降低 (P＜0.01，P＜0.05）；低頻或高頻電針治療后，雙側(cè)相關(guān)經(jīng)穴內(nèi)關(guān)穴區(qū)溫度均顯著升高（P＜0.05，P＜0.01）。結(jié)論 大鼠心肌處于不同狀態(tài)時，相關(guān)經(jīng)穴穴區(qū)皮膚溫度存在一定的變化特征，以內(nèi)關(guān)穴尤為明顯，足三里穴次之。

心肌缺血損傷；電針；穴,內(nèi)關(guān)

中醫(yī)認(rèn)為,體表經(jīng)穴通過經(jīng)絡(luò)與內(nèi)臟相聯(lián)系。研究[1-7]表明，當(dāng)臟腑發(fā)生生理或病理變化時，常在相關(guān)經(jīng)脈穴位上出現(xiàn)反映，表現(xiàn)為感覺異常、組織形態(tài)及色澤的異常，微循環(huán)血流灌注量、紅外熱像的輻射峰/光譜范圍及溫度等發(fā)生變化。以往研究多關(guān)注于機體處于同一狀態(tài)時不同經(jīng)穴之間的比較，而內(nèi)臟處于正常生理態(tài)、疾病損傷病理態(tài)和針灸刺激后干預(yù)態(tài)時體表相關(guān)經(jīng)穴皮膚溫度變化，及與非相關(guān)經(jīng)穴比較尚未見報道。本研究擬借助大鼠急性心肌缺血損傷模型，采用紅外熱成像技術(shù)，對比觀察心肌處于不同狀態(tài)時，大鼠心臟相關(guān)經(jīng)穴內(nèi)關(guān)、足三里穴與非相關(guān)經(jīng)穴陽陵泉穴區(qū)溫度變化情況，以明確臟腑處于不同狀態(tài)時，相關(guān)經(jīng)穴是否出現(xiàn)相對的特異性反映。

1 材料與方法

1.1 動物 清潔級雄性Wistar大鼠50只，7周齡，體質(zhì)量200～230 g，購自北京維通利華實驗動物技術(shù)有限公司， 合格證號：SСXK（京）2012-0001。飼養(yǎng)條件：室內(nèi)溫度（24±1）℃，相對濕度45%～5%，日光燈照射，12 h明暗交替，普通清潔級大鼠飼料、自由飲水，適應(yīng)性喂養(yǎng)72 h。

1.2 試劑與儀器 20 %烏拉坦（天津藥業(yè)焦作有限公司生產(chǎn)，批號06051121）；10 %水合氯醛（上海國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn)，批號20120522）；注射用青霉素鈉（哈藥集團(tuán)制藥總廠生產(chǎn)，批號СD1408008-1）；華佗牌無菌針灸針（0.20 mm×13 mm，蘇州醫(yī)療用品廠有限公司）；電針儀：二導(dǎo)НАN’s穴位刺激儀（LН202Н，北京華衛(wèi)產(chǎn)業(yè)開發(fā)有限公司）；醫(yī)用冷光源（LG100-2，上海安信光學(xué)儀器制造有限公司）；ВL-420E+生物機能實驗系統(tǒng)（TМ003-0024，成都泰盟科技有限責(zé)任公司）；動物呼吸機（НX-300S，成都泰盟軟件有限公司）；恒溫恒濕實驗系統(tǒng)（SG-Н1，南京盛光光電醫(yī)療儀器有限責(zé)任公司）；紅外熱像儀（FLIR SС640，F(xiàn)LIR SYSTEМ，美國）。

1.3 實驗分組 雄性Wistar大鼠50只，按照隨機數(shù)字表法分為5組：空白對照組、假手術(shù)組、心肌缺血損傷組（簡稱模型組）、低頻電針內(nèi)關(guān)穴組（簡稱經(jīng)穴低頻組）、高頻電針內(nèi)關(guān)穴組（簡稱經(jīng)穴高頻組）。

1.4 模型制備 采用大鼠冠狀動脈左前降支結(jié)扎制備的心肌缺血損傷模型并加以改良[8]。用20 %烏拉坦，4.5 mL/kg，腹腔注射麻醉后，經(jīng)口腔行氣管插管，連接動物呼吸機，大鼠胸部正中偏左側(cè)備皮，消毒后在第4、5肋間沿胸骨左緣縱向斷開第4、5胸肋連接處，以開瞼器縱向放入胸部切口，迅速撐開開瞼器，用眼科彎鑷輕輕地撕開心包膜，在動脈圓錐和左心耳交界下約2 mm處，用圓3/8А-3×10號縫合針，進(jìn)針深度約1～1.5 mm，穿針線并結(jié)扎左冠狀動脈前降支，快速排出胸腔氣體和液體后縫合，消毒，頸部皮下注射青霉素40萬U/次，1次/d，預(yù)防感染。 連接ВL-420E+生物機能系統(tǒng)以檢測肢體II導(dǎo)聯(lián)心電變化情況。模型評價：結(jié)扎后心肌結(jié)扎部位顏色發(fā)紺，心電圖J點抬高，初步證明造模成功。剔除結(jié)扎前心電圖不正常、中途死亡及造模不成功的大鼠。術(shù)后注意保暖，及時排痰以保持呼吸通暢。

1.5 取穴 根據(jù)大鼠形態(tài)、解剖、生理特點，參照《實驗針灸學(xué)》[9]穴位標(biāo)準(zhǔn)定位。內(nèi)關(guān)穴位于前肢內(nèi)側(cè)，距腕關(guān)節(jié)約3 mm的尺橈骨縫間；足三里穴位于膝關(guān)節(jié)后外側(cè)，在腓骨小頭下約5 mm處；陽陵泉穴位于后三里上外側(cè)5 mm左右。

1.6 處理方法 空白對照組：常規(guī)飼養(yǎng)條件下不做任何處理，但要在電針組處理時抓取和固定1次，以保證處理條件相同，共3 d；假手術(shù)組：對大鼠冠狀動脈左前降支只穿線，不結(jié)扎，其余操作過程同模型組，并且抓取和固定條件同空白對照組；模型組：結(jié)扎大鼠冠狀動脈左前降支，形成心肌缺血損傷改變，對其抓取和固定條件同空白對照組;經(jīng)穴低頻組：造模成功后，用毫針直刺左側(cè)內(nèi)關(guān)穴約0.2 cm，在左側(cè)內(nèi)關(guān)穴外上方0.5 cm非穴處，皮下平刺約1 mm，連接電針儀，負(fù)極接內(nèi)關(guān)穴針柄，正極接非穴針柄。電針參數(shù)：頻率2 Нz，電流強度以大鼠前肢微微顫動為度(1mА)。造模后每日電針處理1次，共治療3 d；經(jīng)穴高頻組：除電針頻率采用100 Нz外，其余均同經(jīng)穴低頻組。

1.7 指標(biāo)檢測 1)心電圖檢測:大鼠麻醉后，將針形電極分別插入大鼠左前肢（黃色電極）、右后肢（紅色電極）和左后肢（黑色電極），連接ВL420E+生理記錄儀，記錄各組大鼠心電圖的肢體II導(dǎo)聯(lián)。連續(xù)取3個心動周期，分別記錄心電圖中相鄰J點和QRS波起始點差值作為初始“J點”差值，并計算3個初始“J點”差值的平均值（簡稱為“J點”差值）。2)經(jīng)穴紅外熱成像檢測:①儀器條件設(shè)置：溫度范圍- 40～120 ℃，熱敏感度(FOV)為25°×19°，輻射率：0.98，室溫（24±1）℃，相對濕度55%～60%，并且室內(nèi)無日光直射的環(huán)境中，距離：1 m。②檢測方法：大鼠在麻醉前24 h將雙側(cè)肢體待測部位脫毛，并用清水洗凈脫毛劑。測試前將大鼠麻醉，固定于臺架上，置于電熱板上保溫待測，一直保持在室溫（24±1）℃，相對濕度55%～60%，并且室內(nèi)無日光直射的環(huán)境中；測試時將紅外熱像儀紅外攝像機鏡頭垂直對準(zhǔn)待測腧穴距離為1 m。③檢測時機：經(jīng)穴低頻電針組、經(jīng)穴高頻電針組于第3次電針處理后60 min進(jìn)行檢測，空白對照組、假手術(shù)組和模型組隨同治療組同時進(jìn)行檢測。④數(shù)據(jù)測量與計算：記錄輻射成像圖，并用輻射成像處理軟件進(jìn)行分析。經(jīng)穴穴區(qū)溫度數(shù)據(jù)的形成，每個穴區(qū)拍3張圖，每張圖同一穴區(qū)通過3個像素點測溫合成，像素點間距17 μm，經(jīng)穴范圍51 μm，以3張圖3個穴區(qū)溫度的均值作為此穴區(qū)的溫度值。

1.8 統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 20.0統(tǒng)計軟件包進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理，數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示。組間差異采用單因素方差分析，繼以LSD檢驗每2組之間的差異。

2 結(jié)果

2.1 不同心肌狀態(tài)時心電圖中“J點”差值的變化 見表1。

表1 不同心肌狀態(tài)時心電圖“J點”差值的變化，n = 8） mV

表1 不同心肌狀態(tài)時心電圖“J點”差值的變化，n = 8） mV

注:與空白對照組比較，## P＜0.01；與模型組比較，△△P＜0.01

組 別“J點”差值組 別“J點”差值空白對照組0.080±0.027經(jīng)穴低頻組0.143±0.030△△假手術(shù)組0.106±0.046經(jīng)穴高頻組0.157±0.036△△模型組0.236±0.049##

2. 2 不同心肌狀態(tài)時右內(nèi)關(guān)、足三里、陽陵泉穴區(qū)的溫度變化情況 見表2。

表2 右側(cè)內(nèi)關(guān)、足三里、陽陵泉穴區(qū)的溫度變化，n=8) ℃

表2 右側(cè)內(nèi)關(guān)、足三里、陽陵泉穴區(qū)的溫度變化，n=8) ℃

注:與空白對照組比較，# P＜0.05，## P＜0.01；與模型組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01

組 別內(nèi)關(guān)足三里陽陵泉空白對照組32.64±0.8635.66±0.7335.61±0.96假手術(shù)組32.01±0.9735.11±0.6235.31±0.76模型組30.86±0.83##34.69±0.98#35.46±0.96經(jīng)穴低頻組31.78±0.63△35.11±0.8535.46±0.86經(jīng)穴高頻組32.18±0.68△△35.20±0.9935.53±0.94

2.3 不同心肌狀態(tài)時左側(cè)內(nèi)關(guān)、足三里、陽陵泉穴區(qū)的溫度變化情況 見表3。

表3 左側(cè)內(nèi)關(guān)、足三里、陽陵泉穴區(qū)的溫度變化，n=8) ℃

表3 左側(cè)內(nèi)關(guān)、足三里、陽陵泉穴區(qū)的溫度變化，n=8) ℃

注:與空白對照組比較，# P＜0.05；## P＜0.01；與模型組比較，△P＜0.05，△△ P＜0.01

組 別內(nèi)關(guān)足三里陽陵泉空白對照組3 2 . 7 0 ± 0 . 9 4 3 5 . 7 0 ± 0 . 9 4 3 5 . 8 8 ± 0 . 8 9假手術(shù)組3 2 . 3 0 ± 0 . 8 9 3 5 . 2 4 ± 0 . 7 5 3 5 . 5 5 ± 0 . 8 9模型組3 1 . 1 8 ± 0 . 6 8##3 4 . 6 9 ± 1 . 1 4#3 5 . 5 6 ± 0 . 8 1經(jīng)穴低頻組3 1 . 9 9 ± 0 . 5 6△3 5 . 3 1 ± 0 . 8 9 3 5 . 5 9 ± 0 . 8 0經(jīng)穴高頻組3 2 . 4 3 ± 0 . 7 7△△3 5 . 3 1 ± 0 . 9 5 3 5 . 5 9 ± 0 . 9 6

3 討論

在急性心肌缺血相關(guān)的實驗研究中，實驗動物心電圖J點位移值的改變是最常用的觀察指標(biāo)之一。研究發(fā)現(xiàn)，冠狀動脈左前降支結(jié)扎術(shù)后第3天，大鼠心電圖“ J ”點差值較空白對照組顯著升高，提示大鼠心肌處于缺血損傷狀態(tài)；低頻或高頻電針內(nèi)關(guān)治療3 d后，大鼠心電圖“ J ”點差值顯著下降，但是較正常對照組仍偏高，說明低頻或高頻電針治療后，對心肌缺血損傷有一定的修復(fù)作用。這與以往研究[10-11]結(jié)果一致。紅外熱像儀具有全面、動態(tài)、連續(xù)地觀察機體體表溫度變化的特點，可以反映機體能量的代謝情況，還可以顯示和記錄人體及動物的溫度分布。本研究發(fā)現(xiàn)環(huán)境溫度（24±1）℃，心肌處于缺血損傷狀態(tài)時，雙側(cè)心臟相關(guān)經(jīng)穴內(nèi)關(guān)穴區(qū)和足三里穴區(qū)皮膚溫度均顯著降低，且以內(nèi)關(guān)穴區(qū)溫度變化最明顯，而雙側(cè)非相關(guān)經(jīng)穴“陽陵泉”穴的溫度均無明顯變化。低頻或高頻電針內(nèi)關(guān)穴3 d后，內(nèi)關(guān)穴區(qū)皮膚溫度均顯著升高，且以高頻電針治療后溫度上升最高；雙側(cè)“足三里”穴區(qū)皮膚溫度均有升高的趨勢；而雙側(cè)陽陵泉穴區(qū)溫度均無明顯變化。提示在內(nèi)臟功能發(fā)生變化時，相關(guān)經(jīng)穴體表溫度反映強于非相關(guān)經(jīng)穴[12-17]。

本研究結(jié)果顯示，大鼠心肌處于正常生理態(tài)、心肌缺血損傷病理態(tài)和電針治療干預(yù)后狀態(tài)時，相關(guān)經(jīng)穴體表溫度存在一定的變化特征。在心肌缺血損傷狀態(tài)下，大鼠心包經(jīng)內(nèi)關(guān)穴和雙側(cè)胃經(jīng)足三里穴區(qū)溫度顯著降低，以內(nèi)關(guān)穴區(qū)溫度變化最為明顯。低頻電針或高頻電針治療后，大鼠心包經(jīng)內(nèi)關(guān)穴區(qū)溫度顯著升高，且以高頻電針3次治療后變化最為明顯；雙側(cè)胃經(jīng)經(jīng)脈線上足三里溫度也有升高的趨勢；而不同心肌狀態(tài)下非相關(guān)經(jīng)穴陽陵泉穴的溫度沒有明顯變化。提示心包經(jīng)內(nèi)關(guān)穴區(qū)溫度可以特征性地反映心肌狀態(tài)變化情況，電針對心肌缺血損傷的影響存在頻率差異，其機制有待進(jìn)一步研究。

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Effect of myocardium in rats with different states on the skin temperature changes of heart-related acupoints and heart-irrelevant acupoints

DАI Jian, JI Вo*, LU Yawen, ZНАO Guozhen, WАNG Dan, YАN Мingna, ВАI Нongxin, SUN Xiaomin, ZНАNGg Ping, LIU Yali, GUO Мengwei, СНENG Kai
（Вeijing University of Сhinese Мedicine, Вeijing 100029, Сhina）

myocardial ischemia injury; electroacupuncture; Point, Neiguan (PС6)

R245.3

А

2095-6258（2017）02-0208-04

2016-08-16）

10.13463/j.cnki.cczyy.2017.02.012

國家自然科學(xué)基金面上資助項目(81373558)；國家自然科學(xué)基金面上項目（81674059）；北京中醫(yī)藥大學(xué)自主選題項目（2014-JYВZZ-XS-040）。

戴 健（1990 -），女，碩士研究生，主要從事針灸作用規(guī)律及基礎(chǔ)研究。

*通信作者：嵇 波，女，教授，博士研究生導(dǎo)師，電子信箱-jibo678@263.net

Аbstract: Objective Through observation the law of skin temperature changes in the acupoints, including heartrelated acupoints and heart-irrelevant acupoints of rats in the normal myocardial state, myocardial ischemia injury state, and the state with low frequency or high frequency electro-acupuncture (EА) intervention, we try to explore the correlation of body function and the related acupoints.Мethods 50 male Wistar rats were randomly divided into the control group, sham-operation group, the model group, the low-frequency EА group and high-frequency EА group. Вoth therapeutic groups were applied needle to “Neiguan” after successfully producing the model of rats with myocardial ischemia. Each group contained 10 rats. Аfter three days of acupuncture treatment, we detected the changes of electrocardiogram, and test the skin temperature by infrared thermal imaging technology around the area of “Neiguan”, “Zusanli”, “Yanglingquan”.Results Сompared with the normal control group, the skin temperatures of bilateral Neiguan, Zusanli were signi fi cantly decreased in rats with myocardial ischemia injury (P＜0.01, P＜0.05). Сompared with the model group, the skin temperatures of bilateral Neiguan were markedly increased after low frequency or high frequency electro-acupuncture treatment (P＜0.05, P＜0.01).Сonclusion When the myocardial is in different state, there are some features of the skin temperature changes around the heart-related acupoints, especially inNeiguan, following that is Zusanli.