格雷夫斯病患者血漿β-內(nèi)啡肽、降鈣素基因相關(guān)肽和神經(jīng)肽Y水平變化及其與甲狀腺激素的相關(guān)性研究*

王攀，劉松，王霞，蔡小佳，王聚，蔣智鋼

（1.遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院 核醫(yī)學(xué)科，貴州 遵義 563003；2.遵義醫(yī)學(xué)院公共衛(wèi)生學(xué)院，貴州 遵義 563003）

格雷夫斯病患者血漿β-內(nèi)啡肽、降鈣素基因相關(guān)肽和神經(jīng)肽Y水平變化及其與甲狀腺激素的相關(guān)性研究*

王攀1，劉松1，王霞1，蔡小佳1，王聚1，蔣智鋼2

（1.遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院 核醫(yī)學(xué)科，貴州 遵義 563003；2.遵義醫(yī)學(xué)院公共衛(wèi)生學(xué)院，貴州 遵義 563003）

目的 探討格雷夫斯病（GD）患者血漿中β-內(nèi)啡肽（β-EP）、降鈣素基因相關(guān)肽（CGRP）和神經(jīng)肽Y（NPY）水平變化的臨床價值以及與甲狀腺激素[游離三碘甲狀腺原氨酸（FT3）、游離甲狀腺激素（FT4）、促甲狀腺激素（TSH）]之間的關(guān)系，為GD病尋找新的診療標(biāo)志物。方法 收集GD病患者90例，采用放射免疫分析法分別檢測其治療前、治療后以及治愈后β-EP、CGRP、NPY和甲狀腺相關(guān)激素水平，比較治療前、后β-EP、CGRP及NPY水平的變化情況；采用回歸方法分析三者與甲狀腺激素之間的關(guān)系。結(jié)果 治療前、后的β-EP、CGRP及NPY水平變化明顯，將治療前、后與治愈后的數(shù)據(jù)之間進(jìn)行兩兩比較，數(shù)據(jù)差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。隨著病程由治療前、治療后向治愈的轉(zhuǎn)歸，β-EP對FT3的關(guān)系表現(xiàn)為先增強后減弱，對FT4、TSH為先減弱后增強；CGRP對于FT3、FT4的相互關(guān)系表現(xiàn)為先增強后減弱，對TSH為先減弱后增強，NPY對于FT3、FT4的相互關(guān)系表現(xiàn)為先增強后減弱，對TSH表現(xiàn)為先減弱后增強的變化趨勢；在病程中CGRP、TSH與GD病嚴(yán)重程度呈現(xiàn)負(fù)相關(guān)（r=-0.933和-0.944，P＜0.05），而β-EP、NPY、FT3及FT4則與GD病嚴(yán)重程度表現(xiàn)為正相關(guān)（r=0.926，0.943及0.930，P＜0.05）。結(jié)論 β-EP、CGRP及NPY與GD疾病發(fā)展及其轉(zhuǎn)歸密切相關(guān)，有望成為新的診斷、療效觀察及預(yù)判治療停藥的參考指標(biāo)。

格雷夫斯??；β-內(nèi)啡肽；降鈣素基因相關(guān)肽；神經(jīng)肽Y；相關(guān)性

格雷夫斯?。℅raves disease，GD）是彌漫性甲狀腺腫大伴甲狀腺激素分泌過多引發(fā)的器官特異性自身免疫性疾病[1]。甲狀腺的功能主要受到下丘腦-垂體-甲狀腺軸的調(diào)節(jié)[2]。然而，早在1992年AHREN[3]報道甲狀腺濾泡細(xì)胞周圍有肽能神經(jīng)系統(tǒng)存在，但有關(guān)肽能神經(jīng)是否調(diào)節(jié)甲狀腺功能，與GD病的甲狀腺相關(guān)激素之間關(guān)系的報道甚少。通過檢測GD患者血漿中β-內(nèi)啡肽（β-endorphin，β-EP）、降鈣素基因相關(guān)肽（calcitonin gene-related peptide，CGRP）及神經(jīng)肽Y（neuropeptide Y，NPY）水平，探討三者與GD病及其與游離三碘甲狀腺原氨酸（free three iodine thyroid gland，F(xiàn)T3）、游離甲狀腺激素（free thyroid hormone，F(xiàn)T4）和促甲狀腺激素（thyroid stimulating hormone，TSH）之間存在的關(guān)系，為GD病尋找療效觀察及預(yù)判停藥的指標(biāo)。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來源

選取2012年1月-2013年12月本院收治的GD病患者共90例。其中，男性29例，女性61例；平均（36.5±14.3）歲。將90例GD患者在未接受任何治療前為治療前組；將患者采用抗甲狀腺藥物甲硫咪唑治療9個月后，高基礎(chǔ)代謝明顯下降，F(xiàn)T3、FT4恢復(fù)正常，TSH值水平異常為治療后組；持續(xù)治療1.5年后，所有甲亢臨床體征消失，F(xiàn)T3、FT4及TSH恢復(fù)正常為治愈組。

1.2 儀器與方法

所有患者靜脈空腹抽血2 ml，注入含有10%乙二胺四乙酸（ethylenediaminetetraacetic acid，EDTA）和抑肽酶40μl的試管中混勻。4℃ 4 000 r/min離心10 min，分離血漿放置-60℃冰箱保存待檢。采用放射免疫分析方法（radioimmunoassay，RIA）檢測血漿β-EP、CGRP和NPY水平，試劑由北京尚柏生物醫(yī)學(xué)技術(shù)有限公司提供，檢測儀器為中國醫(yī)科大中佳公司提供的GC-2010型放射免疫計數(shù)儀；采用全自動化學(xué)發(fā)光免疫分析法（chemiluminscence immunoassay，CLIA）檢測FT3、FT4及TSH水平，儀器為ADVIA Centaur XP，試劑和儀器均由德國西門子公司配套提供；所有操作嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

數(shù)據(jù)分析采用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件，計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，對3組數(shù)據(jù)做單因素方差分析，若存在差異則進(jìn)一步用LSD法進(jìn)行兩兩比較，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。各檢測指標(biāo)間進(jìn)行線性回歸分析，檢測指標(biāo)與疾病嚴(yán)重程度的關(guān)系做Spearman相關(guān)分析。

2 結(jié)果

2.1 3組的β-EP、CGRP和NPY水平變化

①β-EP。治愈組與治療后比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=24.314，P=0.000），指標(biāo)降低，治愈組較治療前組降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=26.275，P=0.001），治療后同樣低于治療前，兩者差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t= 18.236，P=0.000）；②CGRP。治愈組高于治療后，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=20.333，P=0.001），治愈組高于治療前，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=22.286，P=0.000），治療后較治療前升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=17.384，P= 0.001）；③NPY。治愈組低于治療后，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=16.333，P=0.000），治愈組低于治療前，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=21.245，P=0.000），治療后較治療前下降，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=16.884，P=0.001）。見表1。

2.2 β-EP、CGRP及NPY水平與 FT3、FT4和TSH之間的相關(guān)性

將治療前、治療后及治愈組中的β-EP、CGRP、NPY分別與各組間中的FT3、FT4、TSH進(jìn)行線性回歸分析，對其回歸系數(shù)（b）進(jìn)行比較發(fā)現(xiàn)，β-EP、CGRP在治療前、治療后以及痊愈組3個不同階段中均與甲狀腺激素存在一定的相關(guān)性（見表2）。從表中可以看出，β-EP與FT3、FT4的關(guān)系較為密切；CGRP僅與FT4關(guān)系緊密。

表1 3組CGRP、NPY水平的變化情況 （±s）

表1 3組CGRP、NPY水平的變化情況 （±s）

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表2 3組中β-EP、CGRP及NPY與FT3、FT4和TSH間回歸分析結(jié)果

3 討論

GD病是常見的內(nèi)分泌疾病[4]，發(fā)病原因尚不完全清楚[5]。有研究報道[6]，甲狀腺組織分布有多種肽能神經(jīng)，β-EP、CGRP及NPY均屬于肽能神經(jīng)遞質(zhì)類[7-8]。目前，國內(nèi)外研究神經(jīng)肽能神經(jīng)主要集中在神經(jīng)系統(tǒng)和心血管系統(tǒng)[9-10]，有關(guān)甲狀腺疾病方面，尤其在GD疾病中的作用研究甚少[11]。β-EP是促脂素氨基酸殘端的61～91片段，主要存在垂體，在機體應(yīng)激時分泌增加[12]；1983年ROSENFELD等[13]應(yīng)用分子生物技術(shù)就發(fā)現(xiàn)一種感覺神經(jīng)來源CGRP樣物質(zhì)，主要包括α-CGRP、β-CGRP和胰淀素亞單位，在人甲狀腺、垂體中均含有豐富的表達(dá)。有報道[14]，CGRP對甲狀腺髓樣癌診斷有很好的敏感性和特異性；NPY是含有36個氨基酸的神經(jīng)活性肽，參與多系統(tǒng)調(diào)節(jié)作用，主要由交感神經(jīng)末梢釋放，起著神經(jīng)遞質(zhì)、神經(jīng)調(diào)節(jié)及神經(jīng)內(nèi)分泌的作用[15]。

研究結(jié)果顯示，治療前和治療后中的β-EP、NPY水平顯著增高，CGRP水平顯著降低與文獻(xiàn)[16]報道一致。治療后甲狀腺相關(guān)激素恢復(fù)至正常水平時β-EP、CGRP及NPY依舊處于異常水平，其恢復(fù)速度慢于甲狀腺相關(guān)激素，推測這可能是由于GD疾病對身體造成的傷害范圍廣泛性所致。因此，當(dāng)FT3、和FT4恢復(fù)正常、臨床癥狀基本消失時，β-EP、CGRP及NPY等指標(biāo)仍處于異常水平。從臨床實驗觀察來看，盡管可能存在許多因素可能影響這3個指標(biāo)對GD疾病診斷的準(zhǔn)確性，但是能較好地觀察疾病治療療效和痊愈的判定，因此，應(yīng)將β-EP、CGRP和NPY三者恢復(fù)至正常水平作為GD疾病痊愈判定、療效觀察的判定指標(biāo)，尤其在指導(dǎo)停藥方面更具參考價值。

隨著病程的發(fā)展，β-EP、CGRP和NPY從治療前轉(zhuǎn)歸到痊愈組對甲狀腺激素的關(guān)系分別是：①β-EP對FT3、TSH變化的關(guān)系表現(xiàn)為先減弱后增強，對FT4則表現(xiàn)為先增強后減弱，其中對TSH的影響最為明顯?？赡苁铅?EP主要受到下丘腦--垂體前葉系統(tǒng)的分泌調(diào)節(jié)[17]，與TSH同屬垂體前葉分泌，GD狀態(tài)下機體免疫功能紊亂直接刺激β-EP的分泌，從而介導(dǎo)刺激對機體免疫反應(yīng)性影響，當(dāng)β-EP增高時明顯抑制心血管的功能，降低血壓、減慢心率，對抗體內(nèi)過多的甲狀腺素造成傷害維持機體內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定[18]；②CGRP與FT3、FT4變化的關(guān)系表現(xiàn)為持續(xù)減弱，對TSH則表現(xiàn)持續(xù)增強。CGRP對TSH影響最大，作用非常明顯，F(xiàn)T3可能只在疾病末期發(fā)揮的作用較大，而FT4在末期發(fā)揮的作用非常小。CGRP屬于辣椒素敏感感覺神經(jīng)的重要肽類遞質(zhì)[19]，參與甲狀腺分泌的調(diào)控，并隨著患者心率不斷加快、心率失常及心衰加重而表現(xiàn)為進(jìn)行性下降，主要是CGRP通過調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)Ca2+的內(nèi)流增加而發(fā)揮作用，使得甲狀腺細(xì)胞CGRP的分泌減少；同時CGRP可以影響免疫功能，與T淋巴細(xì)胞上CGRP受體結(jié)，可通過增加細(xì)胞內(nèi)cAMP水平而抑制自然殺傷細(xì)胞（NK細(xì)胞）的活性導(dǎo)致GD易感性加強[20]；③NPY與于FT3、FT4的關(guān)系均表現(xiàn)為先減弱后增強，對TSH則表現(xiàn)為持續(xù)增強的變化規(guī)律。但對FT3、FT4影響不大，與TSH的影響產(chǎn)生巨大的反差。在治療后其影響程度均逐漸減弱。表明NPY參與GD病發(fā)病的調(diào)節(jié)，可能是NPY調(diào)節(jié)神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)，直接收縮血管，加強血管平滑肌對神經(jīng)刺激，調(diào)節(jié)血液循環(huán)，影響激素分泌的生物學(xué)功能引起甲狀腺激素分泌的調(diào)節(jié)改變的結(jié)果[21]。

在GD狀態(tài)下，垂體前葉受到刺激β-EP的分泌，對抗甲狀腺激素的傷害作用。機體通過血管收縮介質(zhì)NPY的增多與血管舒張素介質(zhì)CGRP的減少，和控制甲狀腺激素進(jìn)入血液循環(huán)，這是機體在病理過程中的自穩(wěn)機制之一[11]。

總之，β-EP、CGRP和NPY在GD病過程中隨病程和轉(zhuǎn)歸密切相關(guān)，可能成為GD病的療效觀察、痊愈停藥判定的指標(biāo)。但與甲狀腺激素間相互影響關(guān)系的機制有待進(jìn)一步研究。

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Change of β-EP,CGRP and NPY in plasma and relationship with thyroid hormone in patients with Graves's disease*

Pan Wang1,Song Liu1,Xia Wang1,Xiao-jia Cai1,Ju Wang1,Zhi-gang Jiang2
(1.Department of Nuclear Medicine,Zunyi Medical College Affiliated Hospital,Zunyi, Guizhou 563003,China;2.School of Public Health,Zunyi Medical College, Zunyi,Guizhou 563003,China)

Objective To investigate the changes of β-EP,CGRP and NPY in plasma of patients with Graves's disease (GD)and their relationship with the changes of thyroid hormones during the course of GD. Methods The levels of β-EP,CGRP,NPY and related thyroid hormones in plasma in 90 GD patients were detected by radioimmunoassay before treatment,one year after treatment and healing respectively.The changes of levels of β-EP,CGRP and NPY were compared,furthermore,the relationship between them and thyroid hormones were analyzed by regression.Results There were significant differences (P＜0.05)between different time points after compared levels of β-EP,CGRP and NPY.With the development of the disease,the impact extent of β-EP to FT3increased at first and then decreased,and that to FT4,TSH were converse;the impact extent of CGRP to FT3and FT4increased at first and then decreased,but that toTSH was converse.The im－pact extent of NPY to FT3,FT4showed increased at first and then decreased,and that to TSH was converse. CPRG and TSH were negatively correlated with the severity of GD disease (rs=-0.933 and-0.944,P＜0.05),and β-EP,NPY,FT3,FT4were positively correlated with that (rs=0.940,0.926,0.943 and 0.930,P＜0.05).Conclusions β-EP,CGRP and NPY are closely related to the development and prognosis of GD.They are expected to become a new reference index for diagnosis,curative effect observation and discontinuation of GD disease.

graves disease;β-endorphin;calcitonin gene-related peptide;neuropeptide Y;correlation

R581.1

A

10.3969/j.issn.1005-8982.2017.05.008

1005-8982（2017）05-0038-04

2016-05-03

貴州省科學(xué)技術(shù)廳聯(lián)合基金（No：黔科合LH字【2015】7470）

蔣智鋼，E-mail：zhigangjiang@zmc.edu.cn