棘皮動(dòng)物神經(jīng)肽結(jié)構(gòu)與功能研究進(jìn)展

郭雪瑩 ， 丁 奎 ， 王天明， 呂志猛 張立斌

(1. 寧波大學(xué)， 浙江 寧波 315211； 2. 中國科學(xué)院海洋生態(tài)與環(huán)境科學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室， 山東 青島 266071； 3. 青島海洋科學(xué)與技術(shù)國家實(shí)驗(yàn)室 海洋生態(tài)與環(huán)境科學(xué)功能實(shí)驗(yàn)室， 山東 青島 266237； 4. 中國科學(xué)院海洋大科學(xué)研究中心， 山東 青島 266071； 5. 中國科學(xué)院海洋牧場工程實(shí)驗(yàn)室， 山東 青島 266071； 6. 浙江海洋大學(xué) 海洋科學(xué)與技術(shù)學(xué)院， 浙江 舟山 316022)

神經(jīng)肽(neuropeptide)是指在神經(jīng)細(xì)胞中合成的內(nèi)源性肽段， 一般由1～300個(gè)氨基酸組成， 在細(xì)胞通訊、體內(nèi)穩(wěn)態(tài)、行為和生理過程中發(fā)揮著重要作用[1-2]。目前研究認(rèn)為， 所有神經(jīng)肽均從較大的前體蛋白衍生而來， 由基因編碼的神經(jīng)肽前體蛋白， 在轉(zhuǎn)運(yùn)過程中經(jīng)過酶的剪切和修飾， 最終生成具有生物活性的神經(jīng)肽[2-3]。神經(jīng)肽可作為神經(jīng)遞質(zhì)或調(diào)質(zhì)在神經(jīng)系統(tǒng)局部發(fā)揮作用， 也可作為神經(jīng)激素經(jīng)循環(huán)系統(tǒng)作用于特定靶細(xì)胞； 其通過結(jié)合并激活特定G蛋白偶聯(lián)受體(GPCRs)， 介導(dǎo)細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)， 并導(dǎo)致下游效應(yīng)物(如酶、離子通道等)活性發(fā)生變化或者基因表達(dá)調(diào)控， 最終實(shí)現(xiàn)靶細(xì)胞及靶組織的功能轉(zhuǎn)變， 影響行為及生理過程[1，4]。

棘皮動(dòng)物門(Echinodermata)共包含五個(gè)綱， 分屬于三個(gè)亞門。其中海百合綱(Crinoidea)屬有柄亞門(Plematozoa)， 海參綱(Holothuroidea)和海膽綱(Echinoidea)屬有棘亞門(Echinozoa)， 海星綱(Asteroidea)和海蛇尾綱(Ophiuroidea)屬海星亞門(Asterozoa)[5]。棘皮動(dòng)物在生物進(jìn)化中占有特殊地位， 雖屬后口動(dòng)物， 但較為低等， 與原口動(dòng)物關(guān)系密切， 又在無脊索動(dòng)物中進(jìn)化地位較高， 與脊索動(dòng)物關(guān)系也十分密切。棘皮動(dòng)物還具有獨(dú)特的發(fā)育生物學(xué)特征， 幼蟲時(shí)期為兩側(cè)對稱而成體為輻射對稱[5]。此外， 棘皮動(dòng)物神經(jīng)系統(tǒng)結(jié)構(gòu)簡單， 主要由圍口神經(jīng)環(huán)和與其相連的五條橈神經(jīng)索組成， 具有五輻射對稱和去中心化的結(jié)構(gòu)特征， 但功能復(fù)雜， 其身體組織的自切和再生，體壁結(jié)締組織硬度變化均與神經(jīng)系統(tǒng)相關(guān)[3，5]。

棘皮動(dòng)物具有與其他高等生物近緣的神經(jīng)肽信號系統(tǒng)， 某些神經(jīng)肽的發(fā)現(xiàn)將原口動(dòng)物和脊索動(dòng)物中相關(guān)神經(jīng)肽家族聯(lián)系起來。目前， 棘皮動(dòng)物神經(jīng)肽研究主要集中在組學(xué)分析， 鑒定出大量神經(jīng)肽，但功能研究， 特別是神經(jīng)肽與受體互作及其活性研究相對缺乏。深入開展棘皮動(dòng)物神經(jīng)肽發(fā)掘和功能鑒定， 可以幫助解析一些特有生理現(xiàn)象， 如組織再生， 刺參吐腸和夏眠等。本文在歸納棘皮動(dòng)物各物種中所鑒別的神經(jīng)肽種類及幾類重要神經(jīng)肽家族結(jié)構(gòu)的基礎(chǔ)上， 基于神經(jīng)肽在不同棘皮動(dòng)物組織器官的分布情況總結(jié)了各神經(jīng)肽信號系統(tǒng)特征， 并概述了神經(jīng)肽對棘皮動(dòng)物各組織器官及行為的調(diào)節(jié)作用， 以期為神經(jīng)肽信號系統(tǒng)結(jié)構(gòu)、功能和進(jìn)化研究提供參考。

1 棘皮動(dòng)物神經(jīng)肽鑒定

1.1 神經(jīng)肽種類鑒定

近年來， 基因組和轉(zhuǎn)錄組測序技術(shù)的發(fā)展使快速識別單一物種的神經(jīng)肽成為可能[6]。隨著該技術(shù)的廣泛應(yīng)用， 目前已在環(huán)節(jié)動(dòng)物、軟體動(dòng)物、刺胞動(dòng)物和棘皮動(dòng)物等多個(gè)動(dòng)物門類中展開了神經(jīng)肽鑒定工作， 在棘皮動(dòng)物海膽綱、海參綱、海星綱和海蛇尾綱均有神經(jīng)肽鑒定的相關(guān)報(bào)道， 但海百合綱鮮有報(bào)道[5-7]。

綜合研究報(bào)道數(shù)據(jù)， 棘皮動(dòng)物各綱中鑒定的神經(jīng)肽數(shù)量分布如圖1所示。在棘皮動(dòng)物中， 海星綱、海參綱、海膽綱、海蛇尾綱中共同鑒定出的神經(jīng)肽種類為20種， 海星綱中鑒定的特有神經(jīng)肽種類最多，為12種， 而海膽綱為3種， 海參綱為2種， 海蛇尾綱中無特有神經(jīng)肽(圖1； 表1)。棘皮動(dòng)物各物種的神經(jīng)肽詳細(xì)鑒定結(jié)果如表2所示。

圖1 棘皮動(dòng)物神經(jīng)肽數(shù)量分布Fig. 1 The quantity distribution of neuropeptides in echinoderms

表1 棘皮動(dòng)物各綱共有和特有神經(jīng)肽種類鑒定情況Tab. 1 Identification of common and unique neuropeptides in echinoderms

1.2 神經(jīng)肽序列及結(jié)構(gòu)鑒定

目前識別出的棘皮動(dòng)物神經(jīng)肽有50多種， 具體鑒定出的神經(jīng)肽種類見表2。

物種名稱： Sp：Strongylocentrotus purpuratus； Ar：Asterias rubens； Ap：Acanthaster planci； Aj：Apostichopus japonicus； Hs：Holothuria scabra； Hg：Holothuria glaberrima； Ov：Ophionotus victoriae； Af：Amphiura filiformis； Oa：Ophiopsila aranea。

神經(jīng)肽名稱： CCH： CCHamide神經(jīng)肽； CRH： 促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素型神經(jīng)肽； SALMF：SALMFamide神經(jīng)肽， 神經(jīng)肽1； GnRH： 促性腺激素釋放激素型神經(jīng)肽， 神經(jīng)肽2； TRH： 促甲狀腺激素釋放激素型神經(jīng)肽， 神經(jīng)肽3； 鈣素樣肽： 神經(jīng)肽4；AN肽： 神經(jīng)肽5； pedal肽型神經(jīng)肽1： 神經(jīng)肽6；pedal肽型神經(jīng)肽2： 神經(jīng)肽7； 神經(jīng)肽11： 在Ov、Af、Oa、Sp、Ar中證實(shí)為蛻殼激素1； 黑化誘導(dǎo)激素： 神經(jīng)肽12； MCH： 黑色素聚集激酶素， 神經(jīng)肽14； 神經(jīng)肽15： 在Ov、Af、Oa、Sp、Ar中證實(shí)為蛻殼激素2； 生長激素抑制素： 神經(jīng)肽19。

1.2.1 SALMFamide神經(jīng)肽

SALMFamide神經(jīng)肽家族分為L型和F型兩類， L型多肽C端氨基酸序列為L×F， 而F型多肽C端序列為F×F(×為可變氨基酸)[11]。L型SALMFamide神經(jīng)肽前體可產(chǎn)生L型神經(jīng)肽， 而F型前體可產(chǎn)生F型或L型神經(jīng)肽[7]。此外， 某些SALMFamide神經(jīng)肽并非嚴(yán)格的L型或F型神經(jīng)肽， 而是類L型或類F型神經(jīng)肽[7]。海星Asterias rubensL型前體衍生的神經(jīng)肽(AYHSALPF-NH2、GYHSGLPF-NH2和LHSALPF-NH2)含ATCUN基序(H2N-××H， ×為可變氨基酸)， 即N端銅鎳結(jié)合基序， 其位于N端第三位的組氨酸可高度親和Cu2+和Ni2+， 形成銅配合物(單體或二聚體)， 使神經(jīng)肽更耐酶解， 并參與調(diào)節(jié)海星獨(dú)特的攝食行為[12]。

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海星A. rubens和Asterias forbesi的橈神經(jīng)索中可分離出2種SALMFamide神經(jīng)肽， 一種是八肽GFN SALMF-NH2(S1)， 另一種是十二肽SGPYSFNSGLTFNH2(S2)[13]。S1和S2的C端區(qū)域是決定其生物活性的關(guān)鍵因素[14]。S2的N端四肽(SGPY)有利于S2自結(jié)合成多聚體， 改變其結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性來影響生物活性[14-15]。此后， 在海參Holothuria glaberrima中發(fā)現(xiàn)了S3(GFSK LYF-NH2)和S4(SGYSVLYF-NH2)[16]。這4種神經(jīng)肽均屬于L型SALMFamide神經(jīng)肽。在仿刺參Apostichopus japonicus中鑒定出的神經(jīng)肽GYSPFMFamide和FKSPFMFamide以及海膽Strongylocentrotus purpuratus中7種推定的SALMFamide神經(jīng)肽均為F型SALMFamide神經(jīng)肽[11，17]。

目前， 海星Patiria Miniata中已鑒定出2種SALMFamide神經(jīng)肽前體， 各含有6個(gè)和7個(gè)推定的SALMFamide神經(jīng)肽； 在海蛇尾Ophionotus victoriae中也鑒定出兩種SALMFamide神經(jīng)肽前體， 各含有4個(gè)和11個(gè)推定的SALMFamide神經(jīng)肽； 而海百合Antedon mediterranea中僅鑒定出1種SALMFamide前體， 含有12個(gè)推定的SALMFamide神經(jīng)肽[18]。此外， 在另一種海星Marthasterias glacialis中發(fā)現(xiàn)幾種新型SALMFamide神經(jīng)肽： SGPYSMTSGLTF-NH2(MagS2)、AYHSALPF-NH2(MagS3)和AYQTGLPF-NH2(MagS4)， 表明SALMFamide神經(jīng)肽多樣性較高[19]。

1.2.2 GnRH型神經(jīng)肽

促性腺激素釋放激素(GnRH)最初是在哺乳動(dòng)物中發(fā)現(xiàn)的一種肽類激素， 其同系物大量存在于無脊椎動(dòng)物中[4，20]。棘皮動(dòng)物GnRH型神經(jīng)肽N端谷氨酰胺殘基(Q)和C端甘氨酸殘基(G)經(jīng)翻譯修飾后產(chǎn)生N端焦谷氨酸殘基(pQ)和C端酰胺基(G-NH2)[3，6，9]。最初通過分析海膽S. purpuratus轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)鑒定得到棘皮動(dòng)物GnRH型神經(jīng)肽， 其推定序列為pQVHHRFSGWRPG-NH2[3]。海星A. rubens中共鑒定得到兩種GnRH神經(jīng)肽， 分別為pQIHYKNPGWGPG-NH2(GnRH1)和HNTFTMGGQ NRWKAGG-NH2(GnRH2)[21]。海星Acanthaster planci中鑒定出GnRH神經(jīng)肽pQIHYKVPGWGPG-NH2[22]。海參Holothuria scabra中GnRH肽序列為pQLPAGP WAFWE-NH2，A. japonicus中的推定序列為pQLLGNV QLPLPGG-NH2[9，23]。海蛇尾O. victoriae中鑒定出的GnRH肽為pQLHSRMRWEPG-NH2[5]。海膽S. purpuratusGnRH型神經(jīng)肽和海星A. rubensGnRH1也含ATCUN基序， 可結(jié)合Cu2+和Ni2+， GnRH2位于N端第一位的組氨酸也可結(jié)合Cu2+[22，24]。與Cu2+結(jié)合后GnRH1更耐酶解， 與Ni2+結(jié)合可改變受體激活[22]。

1.2.3 NG肽

NG肽因其在肽鏈N端含有Asn-Gly(NG)雙肽序列而得名[25]。最早在仿刺參A. japonicus中分離得到第一種NG肽， 其序列為NGIWYamide[26]。隨后在其他棘皮動(dòng)物中發(fā)現(xiàn)NGIWYamide相關(guān)神經(jīng)肽， 如海膽S.purpuratus的NGFFFamide和海星A. rubens的NGFFYamide等[27]。目前， 在海蛇尾O. victoriae中鑒定出兩種NG肽， 分別為NGFFFamide和NGFFYamide，與S. purpuratus和A. rubens中NG肽序列一致[5]。

1.2.4 Pedal肽型神經(jīng)肽

Pedal肽最初在軟體動(dòng)物海兔Aplysia californica的足神經(jīng)節(jié)中分離得到， 因而命名為pedal肽[28]。在棘皮動(dòng)物中， pedal肽型神經(jīng)肽前體(PPLNP)有3種，分別為PPLNP1、PPLNP2和PPLNP3， PPLNP3僅在海蛇尾中發(fā)現(xiàn)[3，5]。海膽S. purpuratus和海星A. ruben中某些pedal肽型神經(jīng)肽C端含有SGF×基序(其中×是疏水氨基酸殘基)， 仿刺參A. japonicuspedal肽型神經(jīng)肽N端均含有FG基序， 其余棘皮動(dòng)物pedal肽型神經(jīng)肽序列相似度不高[3，6，9]。最初在海膽S. purpuratus中發(fā)現(xiàn)編碼pedal肽型神經(jīng)肽前體(SpPPLNP1、SpPPLNP2)的基因， 2種前體均含有9個(gè)推定的神經(jīng)肽(SpPPLN1a-i、SpPPLN2a-i)[6，28]。隨后， 在海星A.rubens中發(fā)現(xiàn)2種pedal肽型神經(jīng)肽前體(ArPPLNP1、ArPPLNP2)， ArPPLNP1包 含5個(gè) 推 定 神 經(jīng) 肽(ArPPLN1a-e)， 而ArPPLNP2則包含11個(gè)推定神經(jīng)肽(ArPPLN2a-k)[29-30]。此外， 在海星Patiria pectinifera和A. rubens中分離得到一種pedal肽型神經(jīng)肽， 也稱作SMP型神經(jīng)肽， 其氨基酸序列分別為FGKGGAYDPLSAGFTD和FGGKGAFDPLSAGFTD，因而ArPPLNP1也稱作SMP型前體[29，31]。仿刺參A. japonicus中目前僅發(fā)現(xiàn)PPLNP2， 其含有6個(gè)pedal肽型神經(jīng)肽(AjPPLN2a-f)[10]。

1.2.5 Luqin型神經(jīng)肽

根據(jù)海星A. rubens和A. planci的luqin型神經(jīng)肽前體推定其序列分別為EKGRFPKFMRW-NH2和EEKTRFPKFMRW-NH2[32]。在海參A. japonicus、H.glaberrima、H. scabra和Holothuria leucospilota中l(wèi)uqin型神經(jīng)肽推定序列均為KPYKFMRW-NH2[32]。海膽S. purpuratus中l(wèi)uqin型神經(jīng)肽序列為GKPHKF MRW-NH2[5]。海蛇尾O. victoriae中l(wèi)uqin型神經(jīng)肽推定序列為QGFNRDGPAKFMRW-NH2，Ophiopsila aranea為QGFNRGEGPAKFMRW-NH2，Amphiurafiliformis中為QGFSRDGPAKFMRW-NH2[32]。比較棘皮動(dòng)物luqin型神經(jīng)肽可以發(fā)現(xiàn)高度的序列一致性，其C端均含有KFMRW-NH2序列[3]。

1.2.6 Kisspeptin神經(jīng)肽

棘皮動(dòng)物kisspeptin神經(jīng)肽C端均含有L×F-NH2基序(×為可變氨基酸)[9]。棘皮動(dòng)物kisspeptin神經(jīng)肽前體均可推定出2種kisspeptin神經(jīng)肽。海星A. rubenskisspeptin神經(jīng)肽為SGRCRSGTKCIMRGPNPNTASR VLPF-NH2(ArKP1)和GRGPPKNSRARGGRTLLPF-NH2(ArKP2)[3]。海膽S. purpuratus中kisspeptin型神經(jīng)肽序列為SRCRGRQCRNVGGLNPNANLRPLPF-NH2(SpKP1)和GRTKNRIRERVPHFLPF-NH2(SpKP2)[3]。海參A. japonicuskisspeptin型神經(jīng)肽結(jié)構(gòu)為AGSLDCLEASCEDVE RRGRQPNRNAHYRTLPF-NH2(AjKP1)和SAVKNKNK SRARPPLLPF-NH2(AjKP2)，H. scabrakisspeptin型神經(jīng)肽結(jié)構(gòu)為AGTLDCLEQSCEGVERRRQPSRNAHYRTL PF-NH2(HcKP1)和PSSKKTRGRLNPPPLLPF-NH2(HcKP2)，H. glaberrimakisspeptin型神經(jīng)肽結(jié)構(gòu)為GGSLDCLEQS CEDVERRRQPSRNAHYRTLPF-NH2(HgKP1)和PLPKK TKGRIVVPQRLLPF-NH2(HgKP2)[33]。海蛇尾O. victoriaekisspeptin型神經(jīng)肽序列為QPSTACMNVMCRMIRGRP RVNANAGSRALPF-NH2(OvKP1)和GRGRPRTRGSPNG HPQQHKL PF-NH2(OvKP2)[5]。

1.2.7 降鈣素樣肽

降鈣素樣肽N端區(qū)域含有2個(gè)半胱氨酸殘基，可通過二硫鍵與其他降鈣素樣肽相連， C端含有相同基序FG××GP-NH2[3，5]。海星A. rubens和海膽S.purpuratus僅含有1種降鈣素樣肽， 分別為NGESR GCSGFGGCGVLTIGHNAAMRMLAESNSPFGASGPNH2(ArCTP)和SKGCGSFSGCMQMEVAKNRVAAL LRNSNAHLFGLNGP-NH2(SpCTP)[3，6]。海參A. japonicus、H. scabra和海蛇尾O. victoriae中均含有兩種降鈣素樣肽。A. japonicus中降鈣素樣肽結(jié)構(gòu)為

SCSNKFAGCAHMKVANAVLKQNSRGQQQFKFGS AGP-NH2(AjCTP1)和RVGGCGDFSGCASLKAGRD LVRAMLRPSKFGSGGP-NH2(AjCTP2)，H. scabra中降鈣素樣肽結(jié)構(gòu)為SCSDRFSGCAHLKVAKALLDQ ARREENSRFGISGP-NH2(HsCTP1)和RMGGCGDFS GCASLKAGRDLVRAMLRQPSKFGSGGP-NH2(HsC TP2)， 海蛇尾O. victoriae降鈣素樣肽為SGNGGCA GFTGCAQLAAGQNALRNFMHSNRASLFTGASGPNH2(OvCTP1)和NGNGGCAGFTGCAQLAAGQSAL QAMIHSGRASLFGSGGP-NH2(OvCTP2)[1，5，9]。

1.2.8 松弛素樣肽

棘皮動(dòng)物中松弛素樣神經(jīng)肽有2種， 松弛素樣性腺刺激肽(RGP或RLP1)和松弛素樣肽2(RLP2)。推測松弛素樣神經(jīng)肽是由A/B兩條肽鏈的組成的異二聚體蛋白， 兩條肽鏈由二硫鍵相連[1，34]。A鏈包含半胱氨酸基序CC×××C××××××××C， B鏈包含半胱氨酸基序C×××××××××××C[3，9，34]。海星A. rubensRGP A鏈氨基酸序列為PETYVGMGSYCCLVGCTRDQL SQVC， B鏈序列為AEKYCDEDFHMAVTRTCTEH，RLP2 A鏈為QDYQGMATYCCTNGCTISQLTNSGIC，B鏈為RSDHASVKHFCGLEFSYAVVTACGEA[3]。海星Asterina pectiniferaRGP A鏈為SEYSGIASYCCL HGCTPSELSVVC， B鏈為 EKYCDDDFHMAVFRTC AVS[35]。海參H. scabraRGP A鏈為NGGIARRCCASG CSSSDIAKLC， B鏈為VRLCGADLSRAVYRVCSH[1]。

1.2.9 VP/OT型神經(jīng)肽

成熟的VP/OT型神經(jīng)肽通常是C端酰胺化的，在兩個(gè)高度保守的半胱氨酸殘基之間有1個(gè)二硫鍵，這對VP/OT型神經(jīng)肽的生物活性至關(guān)重要[5，9]。海膽S. purpuratusVP/OT型神經(jīng)肽echinotocin是第一個(gè)在棘皮動(dòng)物中被識別的VP/OT型神經(jīng)肽， 其結(jié)構(gòu)序列為CFISNCPKG-NH2[5，36]。海星A. rubensVP/OT型神經(jīng)肽asterotocin結(jié)構(gòu)序列為CLVQDCPEG-NH2[3]。仿刺參A. japonicus中VP/OT型神經(jīng)肽holotocin為CFITNCPLGG-NH2[9]。海蛇尾O. victoriaeVP/OT型神經(jīng)肽序列為CLVSDCPEG-NH2[5]。

1.2.10 其他神經(jīng)肽

在仿刺參A. japonicus中鑒定出多種神經(jīng)肽， 包括GN-19神經(jīng)肽(GGRLPNYAGPPRMPWLIHN-NH2)，GLRFA神 經(jīng) 肽(GLRFA-NH2)， KIamide-9神 經(jīng) 肽(KHKTAYTGI-NH2)， stichopin神經(jīng)肽(DRQGWPACY DSKGNYKC-NH2)， 3種SWYG肽SWYG-1(SWYGS LG-NH2)、SWYG-2(SWYGTLG-NH2)、SWYG-3(SWY GSLA-NH2)， 4種holokinin神經(jīng)肽holokinin-1(PLG YMFR-NH2)、holokinin-2[PLGYM(O)FR-NH2]、holokinin-3[PLGY(Br)M(O)FR-NH2]、holokinin-1(3-7)(GYMFR-NH2)[37]。

2 棘皮動(dòng)物神經(jīng)肽信號系統(tǒng)鑒定

2.1 SALMFamide神經(jīng)肽

SALMFamide神經(jīng)肽為棘皮動(dòng)物特有神經(jīng)肽，基于結(jié)構(gòu)上的相似性， SALMFamide神經(jīng)肽可能是NPFF1/NPFF2型受體的配體[6，38]。SALMFamide-1(S1)和SALMFamide-2(S2)是最早被鑒定的棘皮動(dòng)物神經(jīng)肽[6]。S1在海星A. rubens橈神經(jīng)索、圍口神經(jīng)環(huán)、管足、頂端肌肉和消化系統(tǒng)中均有存在， 而S2主要分布于橈神經(jīng)索、管足和邊緣神經(jīng)[16，39-40]。此外， 在A. rubens的神經(jīng)系統(tǒng)橈神經(jīng)索中檢測到高濃度的S1和S2， 且含量相當(dāng)， 管足中也含有一定濃度， 但其他部位如頂端肌肉、賁門胃和幽門胃等肌肉器官內(nèi)含量較少， 性腺中含量最低， 且在這些部位中S2的免疫反應(yīng)活性高于S1， 差異從兩倍到十倍不等[41]。海星Patiriella regularis的橈神經(jīng)索和管足中發(fā)現(xiàn)S1，海星M. glacialis的橈神經(jīng)索和賁門胃中同時(shí)發(fā)現(xiàn)S1和S2[7]。

GFSKLYF-NH2(S3)在海參H. glaberrima的腸道、食管、胃、橈神經(jīng)索、體壁、呼吸樹、性腺、觸手、管足中均有分布[42]。海參H. scabra的胃部和小腸中可檢測到GFSKLYFamide樣神經(jīng)肽[43]。此外，在海膽Arbacia lixula的管足神經(jīng)細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)S2免疫反應(yīng)， 而海蛇尾Ophiura ophiura的橈神經(jīng)索和圍口神經(jīng)環(huán)中則發(fā)現(xiàn)大量S1免疫反應(yīng)聚集[11，44]。

2.2 GnRH型神經(jīng)肽

海星A. rubens體內(nèi)存在兩種GnRH型神經(jīng)肽，GnRH1可特異性激活GnRH型受體， 而GnRH2則可特異性激活CRZ型受體[21]。GnRH型和CRZ型受體為異源表達(dá)， 表明GnRH1和GnRH2分別是這2種受體的選擇性配體[4]。因此， GnRH1被稱為GnRH肽，而GnRH2被重新命名為CRZ肽[4]。原位雜交和免疫組化結(jié)果表明，A. rubens中GnRH肽在神經(jīng)系統(tǒng)(包括橈神經(jīng)索、圍口神經(jīng)環(huán)和邊緣神經(jīng))、管足、觸手、體壁、和消化系統(tǒng)(包括圍口膜、食道、賁門胃、幽門胃和幽門盲腸)中均有表達(dá)[45]。CRZ肽的分布與GnRH相似， 但存在局部差異， 如在觸手中未檢測到CRZ， 而在消化系統(tǒng)中CRZ僅在賁門胃、幽門胃和幽門管中表達(dá)[45]。

半定量RT-PCR檢測結(jié)果表明海參H. scabra神經(jīng)環(huán)、橈神經(jīng)索、卵巢、精巢和縱紋肌提取物中均有GnRH基因表達(dá)， 且在卵巢、橈神經(jīng)索和神經(jīng)環(huán)中表達(dá)最多[23]。原位雜交結(jié)果顯示， GnRH的mRNA在H. scabra的卵母細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中雜交信號很強(qiáng)[23]。質(zhì)譜分析結(jié)果表明GnRH在海膽S. purpuratus體壁和內(nèi)臟組織中均有表達(dá)[46]。

2.3 NG肽

基于原位雜交技術(shù)， 在海星A. rubens的橈神經(jīng)索、圍口神經(jīng)環(huán)、體腔上皮、頂端肌肉、體壁、胃、管足等組織器官中均發(fā)現(xiàn)表達(dá)NG肽(NGFFYamide)前體轉(zhuǎn)錄本的細(xì)胞[47]。海星A. pectinifera橈神經(jīng)索、邊緣神經(jīng)和管足中存在NGIWYamide神經(jīng)肽[48]。免疫組化結(jié)果表明仿刺參A. japonicus橈神經(jīng)索、圍口神經(jīng)環(huán)、管足、體壁、觸手、腸道中存在NGIWYamide神經(jīng)肽[26]。此外， 在海膽S. purpuratus的體壁和內(nèi)臟組織中檢測到NGFFFamide神經(jīng)肽， 但具體組織分布情況還未見報(bào)道[46]。目前已證實(shí)海膽S. purpuratusNPS/CCAP型受體可被NGFFFamide神經(jīng)肽激活[49]。

2.4 Pedal肽型神經(jīng)肽

海星P. pectinifera中pedal肽型神經(jīng)肽前體1(PPLNP1)轉(zhuǎn)錄本在橈神經(jīng)索中的表達(dá)量最高， 但在頂端肌肉、管足和賁門胃等的神經(jīng)肌肉組織中較低[31]。Pedal肽型神經(jīng)肽1(PPLN1)廣泛存在于海星A. rubens橈神經(jīng)索、圍口神經(jīng)環(huán)、消化系統(tǒng)、頂端肌肉和管足中[29]。此外， 由pedal肽型神經(jīng)肽前體2(PPLNP2)中衍生出來的神經(jīng)肽在海星A. rubens的橈神經(jīng)索、圍口神經(jīng)環(huán)、邊緣神經(jīng)、管足、體壁、觸手和消化系統(tǒng)中均有分布[30]。此外， 在海膽S.purpuratus的橈神經(jīng)提取物和仿刺參A. japonicus的圍口神經(jīng)環(huán)中均鑒定出pedal肽型神經(jīng)肽[6，9]。

2.5 Kisspeptin神經(jīng)肽

仿刺參A. japonicus中kisspeptin神經(jīng)肽前體產(chǎn)生兩種成熟肽AjKiss1a和AjKiss1b， 可通過其受體(AjKissR1和AjKissR2)激活后， 介導(dǎo)Gαq偶聯(lián)的細(xì)胞信號通路， 參與生殖和代謝調(diào)控過程； 其中AjKissR1優(yōu)先被AjKiss1b激活， 而AjKissR2優(yōu)先被AjKiss1a激活[33]。免疫印跡分析顯示kisspeptin神經(jīng)肽前體和AjKissR1在仿刺參A. japonicus神經(jīng)環(huán)、性腺及呼吸樹等組織中均有表達(dá)[33]。

2.6 降鈣素樣肽

海星A. rubens降鈣素型神經(jīng)肽(ArCT)和前體mRNA在其神經(jīng)系統(tǒng)(橈神經(jīng)索和圍口神經(jīng)環(huán))、消化系統(tǒng)(賁門胃、幽門胃和幽門盲腸)、體腔上皮、頂端肌肉和管足中均有表達(dá)[50]。海星P. pectinifera中發(fā)現(xiàn)的一種肌肉松弛劑最終被鑒定為ArCT的同源物，并被命名為PpCT[50]。與ArCTP在A. rubens中的表達(dá)相似， PpCT前體轉(zhuǎn)錄本在P. pectinifera的橈神經(jīng)索、賁門胃、幽門胃、幽門盲囊、管足和體腔上皮中表達(dá)， 且橈神經(jīng)索中表達(dá)量最高[50]。

2.7 松弛素樣肽

海星A. rubens鑒定出兩種松弛素樣神經(jīng)肽前體ArRGPP和ArRLPP2[3]。松弛素樣性腺刺激肽(RGP)曾作為性腺刺激物質(zhì)(GSS)在海星A. pectinifera中鑒定出來， 后被證實(shí)為松弛素樣神經(jīng)肽的一種[3]。RGP在A. pectinifera的橈神經(jīng)索、管足和A. rubens的橈神經(jīng)索、圍口神經(jīng)環(huán)、體壁和管足中表達(dá)[34-35]。

2.8 VP/OT型神經(jīng)肽

海星A. rubens中的一種G蛋白偶聯(lián)受體被證實(shí)為VP/OT型神經(jīng)肽受體的同源物， 是A. rubensVP/OT型神經(jīng)肽asterotocin的配體[51]。原位雜交和免疫組織化學(xué)顯示神經(jīng)肽asterotocin及其受體在神經(jīng)系統(tǒng)(橈神經(jīng)索和圍口神經(jīng)環(huán))、消化系統(tǒng)(賁門胃)、體壁及其附屬物中均有表達(dá)[51]。

2.9 其他神經(jīng)肽

海星A. rubens中鑒定出的luqin型神經(jīng)肽(ArLQ)是兩個(gè)luqin型受體ArLQR1和ArLQR2的配體[52]。Luqin型神經(jīng)肽在橈神經(jīng)索、圍口神經(jīng)環(huán)、賁門胃、幽門胃和管足中均有發(fā)現(xiàn)[52]。mRNA原位雜交顯示，CRH型神經(jīng)肽在A. rubens橈神經(jīng)索、圍口神經(jīng)環(huán)、邊緣神經(jīng)、體腔上皮、賁門胃和幽門胃以及幽門盲腸中表達(dá)[53]。海參特異性神經(jīng)肽GN-19和GLRFA分別在H. scabra橈神經(jīng)索、縱紋肌、腸道和橈神經(jīng)索、圍口神經(jīng)環(huán)中表達(dá)[1]。

3 棘皮動(dòng)物神經(jīng)肽功能研究

大量神經(jīng)肽前體和神經(jīng)肽的發(fā)現(xiàn)為研究棘皮動(dòng)物神經(jīng)肽信號系統(tǒng)的生理作用提供了基礎(chǔ)[9]。目前，一般采用藥理學(xué)技術(shù)進(jìn)行神經(jīng)肽功能研究， 現(xiàn)已研究的神經(jīng)肽功能如表3所示[46]。

表3 棘皮動(dòng)物神經(jīng)肽功能特點(diǎn)Tab. 3 Functional characteristics of neuropeptides in echinoderms

續(xù)表

3.1 調(diào)節(jié)肌肉運(yùn)動(dòng)

神經(jīng)肽對肌肉的調(diào)節(jié)主要分為2種， 使肌肉收縮或松弛。NG肽作為肌活性肽在不同棘皮動(dòng)物中的作用有所差別。NGFFYamide神經(jīng)肽可引起海星A.rubens頂端肌肉的舒張和管足的收縮， 還能從一定程度上降低其運(yùn)動(dòng)能力[47]。NGIWYamide神經(jīng)肽能引發(fā)海星A. pectinifera管足和仿刺參A. japonicus體壁縱紋肌和觸手的收縮[26，48]。NGFFFamide神經(jīng)肽和VP/OT型神經(jīng)肽echinotocin均可引起海膽Echinus esculentus管足的收縮[36]。GnRH和CRZ均可引發(fā)海星A. rubens頂端肌肉和管足的收縮， 且CRZ作為頂端肌肉的收縮劑比GnRH更有效[45]。電流可誘發(fā)仿刺參A. japonicus縱紋肌的收縮， GLRFA可增強(qiáng)這種收縮， holokinin、stichopin、SWYG肽和KIamide-9神經(jīng)肽則會抑制這種收縮[54]。

SALMFamide神經(jīng)肽可使海星和海參的肌肉松弛，從一定程度上增強(qiáng)仿刺參A. japonicus運(yùn)動(dòng)耐力并提高運(yùn)動(dòng)效率[55-56]。SALMFamide神經(jīng)肽也能引發(fā)海膽E.esculentus管足舒張， 可見SALMFamide神經(jīng)肽作為肌肉松弛劑在整個(gè)棘皮動(dòng)物門中發(fā)揮普遍作用[36，56]。體內(nèi)注射pedal肽， 可在一定程度上增強(qiáng)仿刺參A. japonicus的運(yùn)動(dòng)耐力并降低運(yùn)動(dòng)效率， 可能參與肌肉收縮性調(diào)節(jié)[55]。SMP則可引起海星P. pectinifera頂端肌肉和管足舒張[30]。此外， luqin型神經(jīng)肽可導(dǎo)致海星A.rubens管足舒張， 在強(qiáng)度和程度上與SALMFamide-2(S2)相似[52]。降鈣素樣肽可引起海星A. rubens頂端肌肉和管足松弛， 參與海星運(yùn)動(dòng)行為調(diào)節(jié)[50]。

3.2 調(diào)節(jié)消化系統(tǒng)

NGFFYamide神經(jīng)肽可引起海星A. rubens賁門胃收縮， 體內(nèi)注射該神經(jīng)肽后， 可使外翻的賁門胃縮回體內(nèi)[27]。仿刺參A. japonicus的體外藥理學(xué)研究表明， NGIWYamide神經(jīng)肽可引起腸道收縮[26]。NGFFFamide神經(jīng)肽和VP/OT型神經(jīng)肽echinotocin均能引起海膽E. esculentus食道的收縮[36]。體外藥理實(shí)驗(yàn)表明， GnRH和CRZ均可引起海星A. rubens賁門胃收縮， 但體內(nèi)注射未能使外翻的賁門胃回縮[45]。此外， GnRH和CRZ對A. rubens腸道纖毛也具有一定調(diào)節(jié)作用[45]。GnRH同樣可導(dǎo)致海膽S. purpuratus食道收縮[46]。神經(jīng)肽GLRFA、holokinin和KIamide-9可引起仿刺參A. japonicus腸道收縮， 而海參特異性神經(jīng)肽GN-19則可引發(fā)腸道收縮或松弛[9，54]。

SALMFamide神經(jīng)肽可使海星A. rubens的賁門胃舒張， 引發(fā)賁門胃外翻[41]。仿刺參A. japonicus中兩種SALMFamide肽(GYSPFMF-NH2和FKSPFMFNH2)均可導(dǎo)致腸道肌肉松弛[54]。海星VP/OT型神經(jīng)肽asterotocin也可引起A. rubens賁門胃外翻， 且比SALMFamide-2(S2)效率更高[51]。體外藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)表明， PPLN1可引起海星P. pectinifera賁門胃舒張，PPLN2則是A. rubens賁門胃的一種強(qiáng)松弛劑[29-30]。然而， 體內(nèi)藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)表明， 海星體內(nèi)注射2種pedal肽型神經(jīng)肽均不會引起賁門胃外翻[29]。此外， 研究表明降鈣素樣肽也可能參與海星消化系統(tǒng)調(diào)節(jié)[50]。

3.3 生殖調(diào)控

GnRH的主要功能是對生殖過程起調(diào)節(jié)作用，已在海參H. scabra中得到證實(shí)。向海參H. scabra體內(nèi)注射GnRH樣肽可顯著加速性腺發(fā)育， 提升性腺指數(shù)(GSI)， 同時(shí)可刺激配子生成， 加速卵母細(xì)胞的成熟[23]。NGIWYamide可誘導(dǎo)仿刺參A. japonicus胚泡破裂和成熟卵母細(xì)胞釋放， 并刺激雌雄配子的釋放[57]。此外， SALMFamide可抑制海星生殖活動(dòng)。體外研究表明， SALMFamide-1(S1)可抑制海星A.pectinifera橈神經(jīng)索釋放松弛素樣肽RGP[38，41]。降鈣素樣肽可能參與調(diào)節(jié)海星A. rubens多個(gè)生理過程， 包括刺激配子釋放等[50]。松弛素樣肽RGP可促進(jìn)海星A. rubens和A. pectinifera配子成熟和卵子排放[34-35]。Kisspeptin神經(jīng)肽則參與調(diào)節(jié)仿刺參A. japonicus季節(jié)性繁殖[33]。

3.4 其他功能

除了對肌肉、消化系統(tǒng)、生殖功能的調(diào)控外， 神經(jīng)肽還涉及其他生理活動(dòng)的調(diào)控。如， NGFFYamide神經(jīng)肽可在一定程度上抑制海星的攝食行為，SALMFamide神經(jīng)肽可調(diào)節(jié)海蛇尾的發(fā)光， 降鈣素樣肽可能參與調(diào)節(jié)海星的攝食和呼吸行為[36，41，47，50]。此外， 神經(jīng)肽NGIWYamide、stichopin和holokinin可調(diào)節(jié)仿刺參A. japonicus體壁結(jié)締組織硬度[54]。Stichopin能抑制乙酰膽堿引起的體壁硬化， NGIWYamide可使體壁硬化， 而holokinin則可使體壁軟化[54]。海星A.rubensVP/OT型神經(jīng)肽asterotocin可引發(fā)A. rubens的攝食行為， 使海星的腕發(fā)生彎曲并阻止口面向上的海星翻正[51]。

4 棘皮動(dòng)物神經(jīng)肽信號系統(tǒng)的進(jìn)化

神經(jīng)肽是一種古老的神經(jīng)信號介質(zhì)， 在動(dòng)物體內(nèi)調(diào)節(jié)多種生理過程和行為， 原口動(dòng)物和后口動(dòng)物的共同祖先中已存在大量的神經(jīng)肽信號通路[32，58]。在脊椎動(dòng)物和原口無脊椎動(dòng)物神經(jīng)肽信號系統(tǒng)及其功能方面， 已取得了一系列研究進(jìn)展， 但對脊索動(dòng)物和原口動(dòng)物之間神經(jīng)肽信號系統(tǒng)的進(jìn)化關(guān)系仍缺乏研究[58]。棘皮動(dòng)物作為非脊索后口動(dòng)物， 在進(jìn)化上處于脊索動(dòng)物和原口無脊椎動(dòng)物的中間位置[50]。此外， 棘皮動(dòng)物還具有獨(dú)特的生物學(xué)特性， 如幼蟲時(shí)期為兩側(cè)對稱而成體為輻射對稱、身體組織可自切和再生等， 這在生物進(jìn)化過程中獨(dú)一無二[1]。因此，棘皮動(dòng)物是生物進(jìn)化研究的重點(diǎn)， 也是神經(jīng)肽信號系統(tǒng)及功能研究的重要模型， 可為神經(jīng)肽信號系統(tǒng)的進(jìn)化史和比較生理學(xué)提供關(guān)鍵支撐[50]。

目前， 越來越多的棘皮動(dòng)物相繼完成基因組測序， 為神經(jīng)肽的進(jìn)化和多樣性研究奠定了基礎(chǔ)[58]。通過對海膽S. purpuratus基因組分析， 首次在無脊椎動(dòng)物中發(fā)現(xiàn)了促甲狀腺素釋放激素型神經(jīng)肽(TRH)，

并在后口動(dòng)物中首次發(fā)現(xiàn)pedal肽型神經(jīng)肽， 其與軟體動(dòng)物pedal肽和節(jié)肢動(dòng)物orcokinin型肽同源， NG肽的發(fā)現(xiàn)將甲殼動(dòng)物心源性神經(jīng)肽(CCAP)和脊椎動(dòng)物神經(jīng)肽S(NPS)歸類到同一個(gè)神經(jīng)肽家族[29，49，58]。此外， 通過對海星A. rubens神經(jīng)轉(zhuǎn)錄組測序結(jié)果分析， 首次在脊索動(dòng)物外發(fā)現(xiàn)了kisspeptin和MCH型神經(jīng)肽的前體， 并在后口動(dòng)物體內(nèi)首次發(fā)現(xiàn)GnRH型神經(jīng)肽[58]。由于無脊椎動(dòng)物缺乏性腺軸， 因而GnRH型神經(jīng)肽在無脊椎動(dòng)物中并非真正意義上的促性腺激素釋放激素， 僅表明其與最初在哺乳動(dòng)物中發(fā)現(xiàn)的促性腺激素釋放激素具有同源關(guān)系[4，20]。在昆蟲和其他節(jié)肢動(dòng)物中發(fā)現(xiàn)的AKH、紅色素聚集激素、corazonin肽(CRZ)和AKH/CRZ相關(guān)肽(ACP)均為GnRH的同源肽[4，20]。海星A. rubens體內(nèi)的兩種GnRH型神經(jīng)肽(GnRH1、GnRH2)可同時(shí)激活GnRH型和CRZ型受體， 表明這兩種信號通路同源， 可追溯至兩側(cè)對稱動(dòng)物共同祖先的同一基因[4]。此外， 棘皮動(dòng)物SALMFamide神經(jīng)肽、脊索動(dòng)物GnIH/NPFF型神經(jīng)肽和原口動(dòng)物SIFamide型神經(jīng)肽之間存在相似結(jié)構(gòu)特征， 表明這些肽可能衍生自同一信號系統(tǒng)[38]。不同種類的神經(jīng)肽同源物往往具有高度的差異性， 僅根據(jù)神經(jīng)肽序列的比較來確定神經(jīng)肽之間的關(guān)系非常困難[4]。因此， 識別介導(dǎo)神經(jīng)肽作用的受體對于確定不同門中神經(jīng)肽家族代表的同源性至關(guān)重要[4]。利用這種方法， 可發(fā)現(xiàn)不同神經(jīng)肽的同源關(guān)系，并可詳細(xì)重建神經(jīng)肽信號通路的進(jìn)化歷史， 如神經(jīng)肽S、NG肽、CCAP神經(jīng)肽家族[4]。目前， 雖然對神經(jīng)肽整體進(jìn)化過程的研究還不完善， 但在過去十年取得了顯著進(jìn)展。神經(jīng)肽研究從大量不相關(guān)多肽分子的無序集合到現(xiàn)在已開始重建神經(jīng)肽進(jìn)化的核心框架，這其中就包括棘皮動(dòng)物門神經(jīng)肽相關(guān)研究[4]。全基因組的研究已開始揭示神經(jīng)肽信號系統(tǒng)的進(jìn)化起源， 為棘皮動(dòng)物神經(jīng)肽系統(tǒng)的分析提供了新思路[58]。

5 展望

從最早期的SALMFamide神經(jīng)肽研究至今已有幾十年， 隨著研究方法和技術(shù)不斷進(jìn)步， 目前已將組學(xué)測序、原位雜交、免疫組化、藥理學(xué)和行為學(xué)等研究方法綜合應(yīng)用于棘皮動(dòng)物神經(jīng)肽相關(guān)研究， 并在近些年取得一定成果[1]。盡管研究方法較為系統(tǒng)， 但總體來看， 棘皮動(dòng)物神經(jīng)肽的研究相較其他無脊椎動(dòng)物[如果蠅(Drosophila melanogaster)、線蟲(Caenorhabditis elegans)、海兔(A. californica)等]仍處于初級階段。

5.1 海百合綱動(dòng)物神經(jīng)肽鑒定亟待補(bǔ)充

隨著組學(xué)技術(shù)的發(fā)展和應(yīng)用， 在海膽綱、海參綱、海星綱和海蛇尾綱中先后鑒定出幾十種神經(jīng)肽， 而海百合綱相關(guān)研究成果鮮有報(bào)道[7]。除SALMFamide神經(jīng)肽相關(guān)研究外， 海百合其他神經(jīng)肽研究較少。海百合為非典型棘皮動(dòng)物， 其神經(jīng)肽研究常被忽略， 但其系統(tǒng)發(fā)育地位與現(xiàn)存的其他4類棘皮動(dòng)物相同， 均屬于后口無脊椎動(dòng)物[7]。因此通過對海百合綱的轉(zhuǎn)錄組、基因組序列數(shù)據(jù)進(jìn)行分析以鑒定其神經(jīng)肽種類， 可進(jìn)一步完善棘皮動(dòng)物中神經(jīng)肽種類鑒定， 為棘皮動(dòng)物神經(jīng)肽進(jìn)化提供新見解[7]。

5.2 神經(jīng)肽結(jié)構(gòu)需進(jìn)一步鑒定

目前， 有些神經(jīng)肽已被鑒定和提純， 如SALMFamide、pedal肽、NG肽、GnRH型神經(jīng)肽、luqin神經(jīng)肽等， 但仍有大量神經(jīng)肽結(jié)構(gòu)需根據(jù)其前體蛋白推定， 限制了神經(jīng)肽的功能研究。因此， 需進(jìn)一步鑒定和提純更多棘皮動(dòng)物成熟神經(jīng)肽， 以及發(fā)現(xiàn)更多棘皮動(dòng)物特異型神經(jīng)肽， 為神經(jīng)肽的功能研究提供基礎(chǔ)。

5.3 神經(jīng)肽信號系統(tǒng)及其功能研究仍需完善

神經(jīng)肽功能研究是神經(jīng)肽研究的重點(diǎn)， 信號系統(tǒng)可從一定程度上為功能研究提供思路。用神經(jīng)肽處理離體組織或者向棘皮動(dòng)物體內(nèi)注射等藥理學(xué)方法， 均可進(jìn)行功能研究。目前， 已鑒定出的棘皮動(dòng)物神經(jīng)肽已有不少， 但深入研究組織表達(dá)和生理作用的神經(jīng)肽相對較少。除SALMFamide、GnRH型肽、NG肽等少數(shù)神經(jīng)肽外， 神經(jīng)肽信號系統(tǒng)及功能研究主要集中在海星綱， 其他幾類棘皮動(dòng)物相關(guān)研究仍較少見。棘皮動(dòng)物神經(jīng)肽研究不僅需擴(kuò)大研究廣度，涉及不同神經(jīng)肽、不同棘皮動(dòng)物及其不同生長階段，還需加大研究深度， 對每種神經(jīng)肽的信號系統(tǒng)特征及功能進(jìn)行深入研究。

5.4 神經(jīng)肽的產(chǎn)業(yè)應(yīng)用及其前景

隨著全球氣候變化和人類活動(dòng)， 棘皮動(dòng)物資源過度開發(fā)， 海水養(yǎng)殖成為緩解和保障優(yōu)質(zhì)水產(chǎn)品供給的重要途徑。仿刺參等是我國重要的海水養(yǎng)殖對象， 其種苗生產(chǎn)是實(shí)現(xiàn)產(chǎn)業(yè)健康持續(xù)發(fā)展的保障，其育苗過程中， 多采用陰干、流水、溫度等刺激產(chǎn)卵進(jìn)而培育健康種苗。在明確神經(jīng)肽功能的基礎(chǔ)上， 通過發(fā)揮神經(jīng)肽對棘皮動(dòng)物的攝食、生長、繁殖等的調(diào)控作用， 可為棘皮動(dòng)物采捕設(shè)施的研發(fā)和增殖放流策略的制定提供參考， 為刺參工廠化養(yǎng)殖、池塘養(yǎng)殖等增養(yǎng)殖模式創(chuàng)新提供支撐， 為將來解決棘皮動(dòng)物種苗生產(chǎn)和養(yǎng)殖問題提供新的思路和方法[55]。