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    針刺內(nèi)關(guān)穴對慢性心衰小鼠心臟血流動(dòng)力學(xué)及心衰標(biāo)志物的影響*

    2017-04-07 03:26:22孫興華武文鵬指導(dǎo)孫遠(yuǎn)征
    中國中醫(yī)急癥 2017年3期
    關(guān)鍵詞:關(guān)穴左室心衰

    郭 穎 孫興華 蘇 蘇 武文鵬 武 丹 指導(dǎo) 孫遠(yuǎn)征

    (黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第二醫(yī)院,黑龍江 哈爾濱 150001)

    ·研究報(bào)告·

    針刺內(nèi)關(guān)穴對慢性心衰小鼠心臟血流動(dòng)力學(xué)及心衰標(biāo)志物的影響*

    郭 穎 孫興華 蘇 蘇 武文鵬 武 丹 指導(dǎo) 孫遠(yuǎn)征

    (黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第二醫(yī)院,黑龍江 哈爾濱 150001)

    目的觀察針刺內(nèi)關(guān)穴對慢性心力衰竭小鼠心臟血流動(dòng)力學(xué)及心衰標(biāo)志物的影響。方法動(dòng)物分為正常組、模型組、針刺組,各組均為15只。腹腔注射鹽酸異丙腎上腺素注射液制備慢性心力衰竭模型。針刺組每日上午行針刺干預(yù)。針刺干預(yù)結(jié)束后,間隔30 min予以腹腔注射鹽酸異丙腎上腺素注射液。連續(xù)針刺干預(yù)4周。正常組和模型組只予捆綁固定,不進(jìn)行任何治療。MP-150型16道生理記錄儀測量左心室收縮壓(LVSP)、左室舒張末期壓(LVEDP)、左室最大上升速率(dp/dtmax)、左室最大下降速率(dp/dtmax)。采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)進(jìn)行測定血清心力衰竭標(biāo)志物腦鈉肽(BNP)和肽素(CCP)水平。結(jié)果與模型組比較,針刺組小鼠LVSP、+dp/dtmax明顯上升,LVEDP、-dp/dtmax顯著降低(P<0.01)。與模型組比較,針刺組小鼠血清BNP、CCP水平均明顯降低(P<0.01)。結(jié)論針刺內(nèi)關(guān)穴能夠降低慢性心力衰竭小鼠增加LVSP和+dp/dtmax,降低LVEDP和-dp/dtmax,改善心肌收縮和心肌舒張功能,且能夠改善心力衰竭標(biāo)志物腦鈉肽和肽素水平,改善心衰程度。

    慢性心力衰竭 血流動(dòng)力學(xué) 腦鈉肽 肽素 針刺 內(nèi)關(guān)

    慢性心力衰竭(CHF)是一組復(fù)雜的臨床綜合征,以外周血流分布異常和神經(jīng)內(nèi)分泌激活為特征。過去我國以心臟瓣膜病為主,近年則以冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病、高血壓病居多[1]。慢性心力衰竭的發(fā)病率和病死率都很高,已成為世界范圍內(nèi)突出的公共衛(wèi)生問題[2]。針刺療法在提高運(yùn)動(dòng)耐量、改善生活質(zhì)量、減輕心肌損害、延緩心肌肥厚、改善細(xì)胞內(nèi)外炎性狀態(tài)方面有明顯的作用[3-5]。黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)孫遠(yuǎn)征教授依據(jù)《四總穴歌》所載“心胸內(nèi)關(guān)應(yīng)”的理論結(jié)合多年臨床經(jīng)驗(yàn)應(yīng)用內(nèi)關(guān)穴治療心悸、怔忡取得了較好的臨床療效。本組研究正是在孫遠(yuǎn)征教授應(yīng)用內(nèi)關(guān)穴防治心胸疾病的學(xué)術(shù)思想指導(dǎo)下,進(jìn)一步探討針刺內(nèi)關(guān)穴對慢性心衰小鼠心臟血流動(dòng)力學(xué)及心衰標(biāo)志物的影響?,F(xiàn)報(bào)告如下。

    1 材料與方法

    1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 45只4周齡健康雄性小鼠,動(dòng)物均為清潔級,體質(zhì)量(22.56±1.83)g,由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)藥物安全性評價(jià)中心提供,動(dòng)物許可證號(hào):SCXK(黑)2013004。所有動(dòng)物均飼養(yǎng)于清潔級動(dòng)物房。分籠喂養(yǎng),自由進(jìn)食、飲水,符合《中華人民共和國衛(wèi)生部實(shí)驗(yàn)動(dòng)物環(huán)境設(shè)施標(biāo)準(zhǔn)》,適應(yīng)性飼養(yǎng)1周。

    1.2 試藥與儀器 鹽酸異丙腎上腺素注射液(上海禾豐制藥有限公司),腦鈉肽(BNP)酶聯(lián)免疫試劑盒(天津易生源生物技術(shù)有限公司),肽素(CCP)酶聯(lián)免疫試劑盒(天津易生源生物技術(shù)有限公司),電子秤(湖南儀器儀表總廠天平廠),低溫高速離心機(jī)(美國Biorad公司),0.25 mm×13 mm華佗牌一次性針灸針 (蘇州醫(yī)療用品廠有限公司)、VEvo2100彩色多普勒超聲儀(Visual Sonics Inc公司)。

    1.3 分組與造模 45只小鼠隨機(jī)分為正常組、模型組、針刺組,各組15只。模型組和針刺組參照文獻(xiàn)[6]制備小鼠慢性心衰模型。連續(xù)腹腔注射鹽酸異丙腎上腺素注射液,每次注射3 mg/kg,每日注射2次,連續(xù)4周。

    1.4 干預(yù)方法 正常組每日腹腔注射等劑量的生理鹽水,每日注射2次,連續(xù)4周。針刺組每日上午行針刺干預(yù)。小鼠內(nèi)關(guān)穴參照中國針灸學(xué)會(huì)實(shí)驗(yàn)針灸研究會(huì)研究制訂的《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物穴位定位標(biāo)準(zhǔn)》[7]。選用華佗牌一次性針灸針直刺小鼠雙側(cè)內(nèi)關(guān)穴,進(jìn)針約3 mm,留針30 min。留針期間每間隔10 min行小幅度捻轉(zhuǎn)行針。針刺干預(yù)結(jié)束后,再間隔30 min予以腹腔注射鹽酸異丙腎上腺素注射液制備慢性心力衰竭小鼠模型。針刺干預(yù)為4周。正常組和模型組只予捆綁固定,不進(jìn)行任何治療。

    1.5 檢測指標(biāo) 1)血流動(dòng)力學(xué)測定。動(dòng)物造模、干預(yù)結(jié)束后,各組小鼠禁食12 h,不禁水,稱體質(zhì)量。采用戊巴比妥鈉50 mg/kg腹腔注射麻醉小鼠,仰臥固定小鼠,常規(guī)消毒,將左頸總動(dòng)脈鈍性分離約1 cm,用動(dòng)脈夾在近心端處將其夾緊,于動(dòng)脈管壁上剪一小斜口,將內(nèi)充滿肝素的導(dǎo)管向心臟方向插入,用手術(shù)線將導(dǎo)管與動(dòng)脈壁扎進(jìn)固定。打開動(dòng)脈夾,將導(dǎo)管繼續(xù)緩慢插入。待顯示屏呈現(xiàn)的波形由動(dòng)脈壓波形變?yōu)樽笫覊毫Σㄐ螘r(shí)停止插管,連接呼吸機(jī)。MP-150型16道生理記錄儀測量左心室收縮壓 (LVSP)、左室舒張末期壓(LVEDP)、左室最大上升速率(dp/dtmax)、左室最大下降速率(dp/dtmax)。2)心力衰竭標(biāo)志物測定。小鼠腹主動(dòng)脈取血5 mL,注入試管中,搖勻,室溫自然凝固15 min,3000 r/min離心20 min,收集上清液,均分2份。采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)進(jìn)行測定血清心力衰竭標(biāo)志物腦鈉肽(BNP)和肽素(CCP)水平,具體操作嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行。

    1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)軟件分析。計(jì)量資料以(s)表示。多個(gè)樣本均數(shù)比較采用單因素方差分析,方差齊時(shí)用LSD法;方差不齊時(shí)用Tamhane′s T2檢驗(yàn)。

    2 結(jié) 果

    2.1 針刺內(nèi)關(guān)穴對慢性心力衰竭小鼠血流動(dòng)力學(xué)的影響 見表1。與正常組比較,模型組小鼠LVSP、+dp/dtmax明顯降低,LVEDP、-dp/dtmax顯著升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01),提示造模成功。與模型組比較,針刺組小鼠LVSP、+dp/dtmax明顯上升,LVEDP、-dp/dtmax顯著降低(P<0.01)。

    表1 針刺內(nèi)關(guān)穴對慢性心力衰竭小鼠血流動(dòng)力學(xué)的影響(s)

    表1 針刺內(nèi)關(guān)穴對慢性心力衰竭小鼠血流動(dòng)力學(xué)的影響(s)

    與正常組比較,*P<0.01;與模型組比較,△P<0.01。下同。

    ?

    2.2 針刺內(nèi)關(guān)穴對慢性心力衰竭小鼠BNP和CCP水平的影響 見表2。與正常組比較,模型組小鼠血清BNP、CCP水平均顯著升高(P<0.01)。與模型組比較,針刺組小鼠血清BNP、CCP水平均明顯降低(P<0.01)。

    表2 針刺內(nèi)關(guān)穴對慢性心力衰竭小鼠BNP和CCP水平的影響(μg/L,s)

    表2 針刺內(nèi)關(guān)穴對慢性心力衰竭小鼠BNP和CCP水平的影響(μg/L,s)

    組別 n BNP CCP正常組 15模型組 15 29.84±4.45 15.29±0.63 53.47±6.23*63.42±0.96*針刺組 1540.08±3.46△36.50±0.74△

    3 討 論

    CHF的治療目標(biāo)已由單純改善臨床癥狀轉(zhuǎn)變?yōu)榉乐剐氖抑貥?gòu)、恢復(fù)心室收縮、改善遠(yuǎn)期預(yù)后。但現(xiàn)有的諸多干預(yù)方法和手段仍未能從根本上降低心力衰竭的高發(fā)病率、高復(fù)發(fā)率、高死亡率的現(xiàn)狀。CHF是中醫(yī)藥治療具有優(yōu)勢的病種,中醫(yī)藥在改善CHF患者臨床癥狀,調(diào)節(jié)免疫功能,改善預(yù)后,提高生活質(zhì)量方面具有明顯的臨床療效[8]。CHF尚屬于中醫(yī)學(xué)的“心悸”“怔忡”“胸痹”“心痛”“痰飲”“水腫”等范疇[9-10]。與本病有關(guān)的癥狀認(rèn)識(shí)散見于歷代醫(yī)籍中,早在《黃帝內(nèi)經(jīng)》中就有相關(guān)臨床表現(xiàn)的描述。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為本病證的病位雖然在心,與其他臟腑經(jīng)絡(luò)關(guān)系密切,其病理特點(diǎn)多為本虛邪實(shí),其中本虛主要是指氣血陰陽不足,尤其以陽虛為多,心脈失養(yǎng),是本病發(fā)病基礎(chǔ);邪實(shí)主要是指寒凝、痰濁、瘀血等邪氣痹阻心脈,是本病發(fā)生的重要病理因素。內(nèi)關(guān)穴是治療心胸疾病的經(jīng)典穴和首選穴[11]。孫遠(yuǎn)征教授認(rèn)為,內(nèi)關(guān)穴為治療內(nèi)臟病的要穴,屬八脈交會(huì)穴之一,通于陰維脈,陰維脈維系聯(lián)絡(luò)全身諸陰經(jīng),陰維為病在臟,故內(nèi)關(guān)穴能寬胸理氣,寧心安神。正如《四總穴歌》所言“心胸內(nèi)關(guān)應(yīng)”。

    本組研究通過腹腔注射鹽酸異丙腎上腺素注射液建立慢性心力衰竭小鼠模型。該模型能夠直接降低心肌收縮力,是臨床研究CHF較為理想的模型。血流動(dòng)力學(xué)結(jié)果顯示,與正常組比較,模型組小鼠LVSP、+dp/dtmax明顯降低,LVEDP、-dp/dtmax顯著升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01),說明CHF模型復(fù)制成功。而與模型組比較,針刺組小鼠LVSP、+dp/dtmax明顯上升,LVEDP、-dp/dtmax顯著降低,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。提示針刺內(nèi)關(guān)穴能夠顯著改善慢性心力衰竭小鼠的血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo),說明針刺內(nèi)關(guān)穴能夠改善心肌收縮和心肌舒張功能,能夠使CHF小鼠的心肌收縮力增強(qiáng)。

    心力衰竭標(biāo)志物在判斷心力衰竭的嚴(yán)重程度以及預(yù)后方面具有重要的價(jià)值。腦鈉肽是近年來臨床研究較多的生長因子,是由心室肌細(xì)胞分泌的一種多肽類技術(shù),具有與RAAS系統(tǒng)激活呈拮抗的作用[12-13]。當(dāng)發(fā)生心力衰竭時(shí),腦鈉肽主要由左室壁張力進(jìn)行調(diào)節(jié)。有研究表明,血漿腦鈉肽和肽素的濃度增高與心力衰竭的嚴(yán)重程度呈正相關(guān)[14]。外周血腦鈉肽水平能夠反映心室負(fù)荷增加程度和左室功能障礙程度,可用于評價(jià)心功能損害或心力衰竭的狀態(tài)。肽素與通常用來作為心力衰竭預(yù)測指標(biāo)的精氨酸加壓素的多種活性有關(guān)[15]。精氨酸加壓素的增高能夠促進(jìn)外周血管收縮而使心臟后負(fù)荷增加;精氨酸加壓素的增高還可以引起心肌細(xì)胞蛋白含量增加而造成心室重構(gòu),同時(shí)還能通過對心臟成纖維細(xì)胞的刺激而加速心肌纖維化[16]。本研究結(jié)果顯示,針刺內(nèi)關(guān)穴能夠緩解小鼠心力衰竭的程度,顯著降低慢性心力衰竭小鼠血清BNP、CCP水平,與模型組比較,具有顯著性差異(P<0.01)。

    綜上所述,針刺內(nèi)關(guān)穴能夠降低CHF小鼠增加LVSP和+dp/dtmax,降低LVEDP和-dp/dtmax,改善心肌收縮和心肌舒張功能。通過對心力衰竭標(biāo)志物腦鈉肽和肽素的檢測,能夠更好的評價(jià)針刺內(nèi)關(guān)穴對CHF模型小鼠心衰程度的改善以及預(yù)后的影響。但上述研究的機(jī)制有待今后進(jìn)一步深入的實(shí)驗(yàn)研究和臨床探討。

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    Study on the Effect of Acupuncture on the Point of Neiguan on Heart Hemodynamics and Heart Failure Markers of Chronic Heart Failure Rats

    GUO Ying,SUN Xinghua,SU Su,et al. The 2nd Affiliated Hospital of Heilongjiang TCM University,Heilongjiang,Harbin 150001,China.

    Objective:To study on the effect of acupuncture on the point of Neiguan on heart hemodynamics and heart failure markers of chronic heart failure rats.Methods:45 rats were randomly divided into a normal group,model group and treatment group with 15 in each group.All rats were given isoproterenol hydrochloride with intraperitoneal injection to make chronic heart failure model.Acupuncture group were given injection 30min after acupuncture for 4 weeks.Normal group and model group were seized without any treatment.LVSP,LVEDP,+dp/dtmax,-dp/dtmax were determined by MP-150 physiological grapher.BNP and CCP level were determined by ELISA.Results:Compared with model group,LVSP and+dp/dtmaxwere significantly increased while LVEDP,-dp/dtmaxwere decreased in acupuncture group(P<0.01).BNP and CCP level were also decreased(P<0.01).Conclusion:Acupuncture on the point of Neiguan can increase the LVSP and+dp/dtmaxof chronic heart failure rats,and decrease LVEDP and-dp/dtmax,improve myocardiac contraction and relaxation.It can also improve heart failure by regulating the level of BNP and CCP.

    Chronic heart failure;Hemodynamics;BNP;CCP;Acupuncture;Neiguan

    R246

    A

    1004-745X(2017)03-0387-03

    10.3969/j.issn.1004-745X.2017.03.004

    2016-11-15)

    國家中醫(yī)藥管理局全國名老中醫(yī)藥專家傳承工作室建設(shè)項(xiàng)目(孫遠(yuǎn)征名老中醫(yī)工作室;國中醫(yī)藥人教發(fā)[2014]20號(hào));黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)科研基金面上項(xiàng)目(201406)

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