HPLC指紋圖譜在中藥制劑質(zhì)量研究中的應(yīng)用＊

葉 婷，梁文儀，梁林金，李 師，吳玲芳，亓 旗，崔雅萍，陳文靜，張?zhí)m珍

（北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院 北京 100102）

中藥制劑是以中藥材為原料制成的適用于應(yīng)用的劑型，因中藥藥性溫和、毒副作用小、不良反應(yīng)輕，逐漸被視為較安全的預(yù)防和治療疾病的藥物。隨著中藥制劑的發(fā)展和市場需求的增加，中藥制劑不良反應(yīng)的報(bào)道也日益增多，質(zhì)量問題越來越明顯，而其質(zhì)量的好壞涉及到原藥材、成品及工藝中的每一個(gè)環(huán)節(jié)，故對中藥制劑實(shí)行科學(xué)規(guī)范的質(zhì)量監(jiān)控不可或缺。

中國現(xiàn)行的中藥質(zhì)控模式從最初觀察藥材外觀、性狀及顯微鑒別，到對藥材進(jìn)行薄層鑒別、內(nèi)在成分的定量檢測來衡量藥材質(zhì)量優(yōu)劣，逐步向中藥物質(zhì)群整體指紋圖譜定性、半定量、多指標(biāo)藥效成分定量及生物測定分析相結(jié)合的思路發(fā)展，其中指紋圖譜整體性的特征促進(jìn)了中藥指紋圖譜的提出和發(fā)展。

1 中藥指紋圖譜的定義及分類

中藥指紋圖譜系指中藥材經(jīng)適當(dāng)處理后，采用一定的分析手法，提取其信息并加以描述，得到能標(biāo)示該中藥材內(nèi)在特征的色譜圖或光譜圖[1]。它是一種綜合可量化的鑒定手段，常用于評價(jià)中藥材、半成品、成品質(zhì)量的真實(shí)、優(yōu)劣及穩(wěn)定性?！罢w性”和“模糊性”是其主要特點(diǎn)，這和中醫(yī)理論基礎(chǔ)的整體性方面以及中藥作用機(jī)制的模糊性是相互對應(yīng)的[2]。

中藥指紋圖譜按測定手段分類可分為：中藥化學(xué)指紋圖譜和中藥生物指紋圖譜，化學(xué)指紋圖譜在中藥制劑分析方面應(yīng)用廣泛，對控制中藥材質(zhì)量具重要意義，主有光譜法和色譜法：如紫外光譜（UV）、紅外光譜（IR）、質(zhì)譜（MS）、核磁共振譜（NMR），薄層色譜（TLC）、氣相色譜（GC）、高效液相色譜（HPLC）及聯(lián)用技術(shù)如HPLC/MS，HPLC/NMR，HPLC/MS/MS等。其中HPLC指紋圖譜具高效、快速、樣品適用性廣等優(yōu)點(diǎn)，已成為檢測中藥化學(xué)成分的普遍分析法，可有效體現(xiàn)中藥成分的復(fù)雜性，而更好的評價(jià)中藥制劑的內(nèi)在質(zhì)量。

2 HPLC指紋圖譜在中藥制劑中的應(yīng)用

任何藥物供臨床使用前都必須制成適合于醫(yī)療或預(yù)防應(yīng)用的形式，稱為劑型，包括固體、半固體、液體及其他制劑等。在2000年由中國國家食品藥品監(jiān)督管理局提出，首先建立中藥注射劑指紋圖譜及相關(guān)質(zhì)控要求，在注射劑指紋圖譜基礎(chǔ)上，逐步開展對中藥材、半成品、成品制劑的指紋圖譜研究。目前，指紋圖譜在中藥材方面，已建立了大部分藥材的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，中藥制劑是由多味藥以君臣佐使的原則配伍而成，化學(xué)成分復(fù)雜，其療效并非任何一個(gè)活性成分可代表，亦不是多個(gè)化學(xué)成分藥用作用的簡單相加，而是經(jīng)多成分、多靶點(diǎn)的協(xié)同作用，故采用指紋圖譜技術(shù)對中藥制劑進(jìn)行質(zhì)量控制具針對性和合理性[3]。

2.1 指紋圖譜在固體制劑中的應(yīng)用

固體劑型包括片劑、膠囊劑、散劑、顆粒劑、丸劑等，應(yīng)用最為廣泛。其溶解速度慢、溶解度小、有效成分含量不均一等在固體劑型中較常見，不同廠家、不同批次的中藥制劑有效成分含量存在較大差異性。指紋圖譜應(yīng)用于固體制劑中不僅可以可測出其有效成分含量多少，還可衡量其整體質(zhì)量。

2.1.1 在片劑中的應(yīng)用

目前，2015版《中國藥典》[4]中片劑的質(zhì)量控制主要采用HPLC法對其指標(biāo)成分定量測定，用指標(biāo)成分含量高低來評價(jià)其質(zhì)量優(yōu)劣。中醫(yī)理論表明藥材所有成分均對藥效起一定作用，而對指標(biāo)成分的控制難以全面反映其內(nèi)在質(zhì)量，故有學(xué)者建立HPLC指紋圖譜來為其整體質(zhì)量評價(jià)提供依據(jù)。分散片、咀嚼片及泡騰片等均由普通片劑發(fā)展而來，具崩解迅速，吸收快，生物利用度高等優(yōu)點(diǎn)，其研制過程中應(yīng)最大程度除雜來保留有效成分。分散片遇水可迅速崩解形成均勻的混懸液，而崩解不代表溶出，低溶出度會(huì)影響其質(zhì)量，楊芳等[5]采用Aichrom Bond-AQC18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流動(dòng)相為甲醇-乙腈-水-冰醋酸，流速為1.0 mL·min-1，檢測波長360 nm。以崩解時(shí)限、硬度為考察指標(biāo)，優(yōu)化楓蓼腸胃康分散片的制備工藝，測定楓蓼腸胃康分散片中蘆丁含量及其溶出度，可更好地控制其質(zhì)量。

口感不好是咀嚼片與泡騰片目前面臨的主要問題，王雪[6]建立五味子咀嚼片的指紋圖譜，采用Luna C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），在220 nm下用乙腈-0.05%磷酸梯度洗脫，柱溫35℃，檢測波長220 nm，流速1 mL·min-1，進(jìn)樣量20 μL。篩選填充劑、矯味劑、潤濕劑及潤滑劑，改善咀嚼片的制備工藝，對比原藥材與制劑的圖譜，為其口感及多指標(biāo)成分全面控制其質(zhì)量提供依據(jù)。另?xiàng)钪緷峓7]等采用TLC與HPLC法鑒別制劑中各中藥及制劑中鹽酸小檗堿的含量，得所建立的標(biāo)準(zhǔn)可用于潔陰泡騰片的質(zhì)量控制。另有刺五加腦靈泡騰片、復(fù)方草決明泡騰片、血塞通泡騰片等應(yīng)用TLC法結(jié)合HPLC法為其質(zhì)量控制及臨床應(yīng)用提供研究基礎(chǔ)。除對制劑及其藥材進(jìn)行指紋圖譜，曹藝[8]建立了歸苓片血清藥物化學(xué)指紋圖譜，對給藥后大鼠血中成分、來源生藥及其代謝產(chǎn)物分析，得藥物入血后成分不是單味藥部位的血中移行成分簡單加和，而是經(jīng)配伍后的相互作用。

另有學(xué)者對益心舒片、丹參片等建立其指紋圖譜[9,10]，指定參照峰，分析共有峰，從少數(shù)指標(biāo)成分到多個(gè)指標(biāo)成分含量測定，為其批次間差異性及其質(zhì)量控制提供了參考依據(jù)。

2.1.2 在膠囊劑中的應(yīng)用

對含光敏感、遇熱不穩(wěn)定等成分與含油量高而不易制成片劑的藥材可制成膠囊。中藥軟膠囊生產(chǎn)中易出現(xiàn)成型不好如偏丸、漏油、粘連等現(xiàn)象，2015版《中國藥典》主要求其溶出度、釋放度、含量均勻度、水分等應(yīng)符合要求，膠囊內(nèi)容物質(zhì)量優(yōu)劣直接影響膠囊劑的質(zhì)量。

最初藥典中對強(qiáng)肝膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)只有芍藥苷的含量測定，后有學(xué)者對其主要成分龍膽苦苷、丹參酮ⅡA及甘草酸、再到多指標(biāo)（龍膽苦苷、芍藥苷、丹酚酸B）定量測定來衡量其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)體系[11-13]，均難以全面衡量其質(zhì)量，韋輝等[14]建立強(qiáng)肝膠囊的指紋圖譜，采用Diamonsil C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），在230 nm波長下，以乙腈-0.05%磷酸梯度洗脫，提取工藝為水煎煮，提取物多為水溶性成分，從圖譜得丹參酚酸B的色譜峰降低而丹參素和丹酚酸A的色譜峰在增加，說明可能在提取工藝中成分轉(zhuǎn)化了，應(yīng)從膠囊的原藥材和生產(chǎn)全過程進(jìn)行監(jiān)測，生產(chǎn)出更安全有效的膠囊。

另溶出度一直作為軟膠囊質(zhì)量控制指標(biāo)之一，有學(xué)者用HPLC法測定穿心蓮軟膠囊[15]中指標(biāo)成分脫水穿心蓮內(nèi)酯的量及其溶出特征，采用Kromasil C18柱（150 mm×4.6 mm，5.0 μm），流動(dòng)相為甲醇-水，流速1.0 mL·min-1，檢測波長254 nm。其中不同批次指標(biāo)成分的量及溶出度無明顯差異。有學(xué)者建立疏郁膠囊、血栓通膠囊血清指紋圖譜[16,17]，為研究中藥復(fù)方入血成分，闡明復(fù)方藥效成分及作用機(jī)制提供依據(jù)。

2.1.3 在顆粒劑中的應(yīng)用

中藥配方顆粒劑是飲片及湯劑改革的產(chǎn)物，但中藥飲片原有的性狀及顯微鑒別特征消失后如何進(jìn)行真?zhèn)舞b別、單味中藥配方顆?；旌虾蟮呐浞绞欠衽c飲片混合煎煮后的湯劑等效，因此，建立顆粒劑質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)是目前生產(chǎn)研究中的難點(diǎn)與熱點(diǎn)。

對六味地黃配方顆粒與傳統(tǒng)湯劑中成分進(jìn)行對比，王杰等[18]采用HPLC法在不同色譜條件下測定兩者有效成分（毛蕊花糖苷、馬錢苷、尿囊素、茯苓酸、23-乙酰澤瀉醇B、丹皮酚）的含量，其中毛蕊花糖苷和尿囊素的量基本一致，配方顆粒中除揮發(fā)性成分丹皮酚外，馬錢苷、茯苓酸和23-乙酰澤瀉醇B的量明顯高于傳統(tǒng)飲片。從化學(xué)成分來說配方顆粒的生產(chǎn)參數(shù)基本合理科學(xué)，多可替代湯劑使用。

消渴清顆粒（XG）最初質(zhì)量控制用RP-HPLCELSD法測薯蕷皂苷元的含量，為其提供質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)[19]。后王露黔等[20]首次用UPLC-PDA-ELSD法[21]建立了XG的指紋圖譜，采用Waters Acquity UPLC HSS C18柱（100 mm×2.1 mm，1.8 μm），乙腈－醋酸鹽緩沖液梯度洗脫，柱溫30℃，流速0.2 mL·min-1，進(jìn)樣量3 μL，檢測波長為258 nm；ELSD空氣體積流量為2.5 L·min-1；漂移管溫度為105℃。XG含有皂苷類成分，只用紫外檢測器不能完整地評價(jià)其質(zhì)量，而PDA與ELSD聯(lián)用，對其新芒果苷、芒果苷和知母皂苷BII等多個(gè)成分定量測定，其含量差異顯示了批間差異性，可對XG的質(zhì)量做出整體評價(jià)。

夏桑菊顆粒由制作工藝的不同分有糖和無糖型，夏伯候等[22]分別建立其HPLC指紋圖譜，采用Agilent Eclipse XDB-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）柱，流速1.0 mL·min-1，檢測波長290 nm，用乙腈-1.0%醋酸梯度洗脫，結(jié)合正交最小二乘法判別分析法，得出兩種顆粒間差異最大的組分主要有6個(gè)，可為夏桑菊顆粒整體質(zhì)量控制，質(zhì)量鑒別評價(jià)提供一種有效手段。盧君蓉等[23]建立二母顆粒的HPLC-ELSD指紋圖譜，將藥材、浸膏、顆粒劑的圖譜進(jìn)行對比相似度均大于0.9，可對控制原藥材-中間體-成品全過程質(zhì)量監(jiān)控的其他制劑提供思路與方法。

2.1.4 在散劑中的應(yīng)用

散劑可直接作為劑型，也可為其他制劑如顆粒劑、膠囊劑、片劑、噴霧劑、混懸劑和粉霧劑等制備的中間體。故散劑的制備、質(zhì)量控制技術(shù)與要求在其他劑型中具普遍意義。散劑粒度小且比表面積大，易出現(xiàn)潮解結(jié)塊、變色或霉變等不穩(wěn)定現(xiàn)象。于霞等[24]建立痹可通散的HPLC指紋圖譜，采用Inertsil ODS-3色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），以甲醇－乙腈－0.1%磷酸梯度洗脫，流速 1.0 mL·min-1，檢測波長 300 nm，柱溫30℃。標(biāo)定共有峰15個(gè)，指認(rèn)3個(gè)，10批樣品相似度為0.987-0.991，其專屬性、穩(wěn)定性、重復(fù)性和精密度均良好。該法能為痹可通散的全面質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

李越峰等[25]首次采用HPLC法，色譜柱為Kromasil C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），用乙腈－磷酸梯度洗脫，流速為1.0 mL·min-1，檢測波長為210 nm、240 nm ，得血清中四逆散凍干粉樣品相似度均大于0.99，一次給藥5 h后血中產(chǎn)生8個(gè)移行成分，為其藥效作用機(jī)制提供依據(jù)。

2.1.5 在丸劑中的應(yīng)用

丸劑因攜帶方便，制備簡單，在制劑中占重要地位。古代醫(yī)家對丸劑的規(guī)格沒有明確標(biāo)準(zhǔn)，常以如小豆、桐子等描述。其服用量與刺激性大、溶散和崩解困難等，對患者特別是小兒口服困難，怎么祛除和掩蓋其不良?xì)馕都翱刂破滟|(zhì)量是現(xiàn)代丸劑研究的重要內(nèi)容。

滴丸能提高難溶性藥物的生物利用度，但其載藥量小，需精制富集有效成分或有效部位，丸重與圓整度是其質(zhì)量控制的重要指標(biāo)。大黃硝石湯含酸、堿性藥物成分，煎煮中生成難溶性沉淀使有效成分減少，制成滴丸可提高其生物利用度，藥雅俊等[26]建立了大黃硝石滴丸的多波長指紋圖譜及對其多成分（梔子苷、鹽酸小檗堿、西紅花苷）進(jìn)行含量測定，采用Apollo C18色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），流速1 mL·min-1，用乙腈-0.1%磷酸梯度洗脫，10批樣品在238、345、440 nm下檢測得圖譜相似度均大于0.9，批間差異小，滴丸的制備工藝穩(wěn)定，可有效地對大黃硝石滴丸的質(zhì)量進(jìn)行初步控制。

蜜丸生產(chǎn)周期長，含糖量高，易出現(xiàn)菌檢超限、變硬等問題。蜜丸的軟硬度是檢查其質(zhì)量的重要指標(biāo)之一。李晗[27]通過HPLC-ELSD法測定大蜜丸中蜂蜜所含果糖、葡萄糖、蔗糖的量，果糖、葡萄糖在蜂蜜中含量不得少于60%，有規(guī)定蔗糖含量不得大于5%，果糖與葡萄糖的比例大于1為好，通過控制其糖含量可有效地控制大蜜丸中蜂蜜的質(zhì)量。

Wang等[28]采用HPLC/qTOF-MS法對26批牛黃上清丸進(jìn)行檢測，均得60個(gè)特征成分，與樣品3相比，15個(gè)樣品質(zhì)量較差，為建立復(fù)雜中藥制劑的整體質(zhì)量控制提供思路；Liu等[29]對18批參麥地黃丸建立HPLCELSD法，同時(shí)鑒定七種化合物，其中，5-羥甲基糠醛的含量在不同批次間有顯著差異，為其建立了全面的質(zhì)量評價(jià)體系。

2.1.6 在栓劑中的應(yīng)用

栓劑多應(yīng)用于婦科疾病，如陰道炎等，為使中藥安全高效，保證質(zhì)量，其質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)最初以其性狀、鑒別、檢查、含量測定等項(xiàng)目檢測，用單一指標(biāo)成分難以全面反映藥材的整體特征。

王鵬嬌等[30]建立10批百草婦炎清栓的HPLC指紋圖譜，采用Comatex C18-AA色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），乙腈－0.04%三乙胺緩沖液梯度洗脫，流速1 mL·min-1，檢測波長220 nm，柱溫30℃。以苦參堿為特征峰，得13個(gè)共有峰，批間相似度均大于0.9，表明百草婦炎清栓的質(zhì)量穩(wěn)定，該法操作簡單及特征性、精密度、重復(fù)性均較好，可用于百草婦炎清栓的質(zhì)量控制。目前，栓劑的品種相對幾種常用制劑較少，指紋圖譜在栓劑質(zhì)控方面的研究也相對較少。

2.2 指紋圖譜在半固體制劑中的應(yīng)用

半固體劑型包括煎膏、軟膏、凝膠劑等。指紋圖譜對該類制劑質(zhì)量控制的研究可為制劑鑒別、工藝及質(zhì)量穩(wěn)定性評價(jià)提供參考?！吨袊幍洹分袑ζ滟|(zhì)量評價(jià)相關(guān)參數(shù)較單一，難以評價(jià)其整體質(zhì)量。

2.2.1 在煎膏劑中的應(yīng)用

煎膏濃縮、收膏工藝的質(zhì)量控制指標(biāo)一般為相對密度、含水量、動(dòng)力黏度。2015版《中國藥典》中僅對成品不溶物、相對密度及微生物限度等指標(biāo)作了規(guī)定，很難準(zhǔn)確保證煎膏質(zhì)量，也沒涉及清膏的相關(guān)參數(shù)，無法對其質(zhì)量進(jìn)行全面控制。

沙棘膏為沙棘成熟果實(shí)的水煎膏，去渣濃縮后，為清膏，后加煉蜜或糖制成的半流體制劑，因無相關(guān)參數(shù)，游佳莉等[31]建立沙棘膏HPLC指紋圖譜，色譜柱為Agilent zorbax SB-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm），以乙腈-0.4%磷酸為流動(dòng)相梯度洗脫，流速1.0 mL·min-1，柱溫30℃，檢測波長360 nm。得7個(gè)共有峰，除S14樣品外，相似度都在0.9以上，有良好的一致性，為沙棘膏的鑒定、工藝研究、全面質(zhì)量控制奠定基礎(chǔ)。

2.2.2 在軟膏劑中的應(yīng)用

中藥軟膏劑化學(xué)成分復(fù)雜，一些有效成分尚不明確，及賦形劑的添加，為質(zhì)量控制增加了難度，從常規(guī)標(biāo)準(zhǔn)（外觀性狀、粘度、PH值、刺激性等）、定性鑒別、定量測定到指紋圖譜的發(fā)展應(yīng)用均為其質(zhì)量控制提供一定幫助。

大部分中藥提取有效成分在軟膏劑中僅占2%。王艷坤等[32]為燒傷膏建立HPLC法，采用Diamonsil C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），多次預(yù)實(shí)驗(yàn)確定流動(dòng)相為甲醇－0.1%磷酸梯度洗脫，流速1.0 mL·min-1，檢測波長254 nm。對膏劑指標(biāo)成分（沒食子酸、蘆薈大黃素、大黃素和大黃酸）同時(shí)測定，不同批次間相似度值均＞0.9，其有效成分含量相差不大，該法為燒傷膏的批間穩(wěn)定性及質(zhì)量控制提供可靠依據(jù)；另徐彬等[33]對燒傷愈合膏復(fù)方與藥材均建立指紋圖譜，對比譜圖，歸屬特征峰，為燒傷膏的質(zhì)量控制奠定了基礎(chǔ)。

2.3 指紋圖譜在液體制劑中的應(yīng)用

液體制劑包括湯劑、糖漿劑、注射劑等，具吸收快、作用迅速，給藥途徑廣泛等優(yōu)點(diǎn)，但不易儲存與攜帶，藥物易降解霉變。澄清度、穩(wěn)定性是影響其質(zhì)量的主要因素。

2.3.1 在注射劑中的應(yīng)用

中藥注射劑在對危重急病的治療，具藥效快、生物利用度高等特點(diǎn)。而由其成分過于復(fù)雜、質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)不嚴(yán)、藥物局限性及個(gè)體差異的存在引起的不良反應(yīng)較多，其安全性涉及到研發(fā)、生產(chǎn)、貯運(yùn)、使用等各個(gè)環(huán)節(jié)。通過建立注射液HPLC指紋圖譜可評價(jià)其穩(wěn)定性，對其全面質(zhì)量進(jìn)行有效控制，加強(qiáng)其使用安全性。

汪悅等[34]對丹紅注射液采用HPLC-UV-MS多元指紋圖譜，采用Atiantis T3色譜柱（250 mm×4.6 mm，5μm），0.05%甲酸－50%乙腈梯度洗脫，流速0.9 mL·min-1；柱溫25℃，進(jìn)樣量20 μL，UV檢測波長：0-75 min，280 nm；75-130 min，326 nm。MS檢測采用ESI源，負(fù)離子選擇離子（SIM）模式；丹參中酚酸類化合物有良好的紫外吸收，質(zhì)譜有高靈敏度、選擇性等特點(diǎn)，聯(lián)用可得丹參及紅花各成分信息，進(jìn)一步明確注射劑所含成分，為后期哪些成分導(dǎo)致不良反應(yīng)奠定了基礎(chǔ)，用HPLC定量分析方法[35]得9種成分質(zhì)量濃度有良好線性關(guān)系，該法為丹紅注射液的質(zhì)量控制提供研究基礎(chǔ)；Wang等[36,37]對參芪扶正注射液建立HPLC指紋圖譜及進(jìn)行動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，得主要生物活性成分，黃芩苷與過敏反應(yīng)有關(guān)，漢黃芩苷與毒性有關(guān)，為注射液的質(zhì)量控制及臨床研究提供了依據(jù)。

2.3.2 在湯劑中的應(yīng)用

湯劑是中藥制劑中歷史最悠久、應(yīng)用最廣泛的一種劑型。湯劑的療效與其煎煮質(zhì)量密切相關(guān)，在煎藥過程中應(yīng)確保中藥湯劑的質(zhì)量。

胡建蘭等[38]建立涼膈散湯劑HPLC指紋圖譜，采用Zorbax Eclipse XDB-C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），甲醇－0.1%磷酸梯度洗脫，檢測波長235 nm，柱溫38℃，流速為1 mL·min-1，進(jìn)樣量10 μL。以黃芩苷作為參照峰，共標(biāo)記22個(gè)共有峰，其8個(gè)色譜峰可明確其化學(xué)成分，樣品批間相似度均大于0.9；該法為其質(zhì)量研究奠定了物質(zhì)基礎(chǔ)。有學(xué)者建立其血清指紋圖譜，為中藥作用機(jī)制奠定基礎(chǔ)，黃海艷等[39]建立了補(bǔ)陽還五湯水煎液及血清指紋圖譜，采用Gemini C18色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），優(yōu)選出乙腈－0.05%磷酸作為流動(dòng)相，DAD在9個(gè)波長下全掃描，得檢測波長為230 nm，該波長下基線較平穩(wěn)，峰多，分離度較高，為復(fù)方制劑質(zhì)量控制提供依據(jù)；對SD大鼠灌胃，其血中移行成分發(fā)生量和質(zhì)的變化，得30個(gè)入血成分，19個(gè)為藥源性成分，初步推測其為補(bǔ)陽還五湯的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)成分。

2.4 指紋圖譜在其他制劑劑中的應(yīng)用

指紋圖譜在噴霧、氣霧劑等也有研究，崔清華等[40]建立了10批舒咽噴霧劑的指紋圖譜，采用C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），用甲醇－乙腈－0.05 mol/L磷酸二氫鉀梯度洗脫，流速1.0 mL·min-1，檢測波長280 nm。標(biāo)記11個(gè)共有峰，相似度均大于0.9，但發(fā)現(xiàn)胖大海中有效成分基本沒有保留，為后期優(yōu)化工藝、有效控制舒咽噴霧劑質(zhì)量提供了可靠方法。另HPLC指紋圖譜在貼劑（如雙香貼膏、東樂膏）等其他制劑中也有一些應(yīng)用，只是相對最常用的幾種制劑，其研究較少。

綜上，HPLC指紋圖譜多用甲醇（乙腈）－0.1%甲酸（磷酸）梯度洗脫，流動(dòng)相為乙腈時(shí)，基線更平穩(wěn)，分別對提取溶劑（多為甲醇）、提取方式（多為超聲）、提取時(shí)間、萃取溶劑和萃取次數(shù)進(jìn)行考察，優(yōu)化色譜條件來得更多的特征峰。而對已知藥效的指標(biāo)成分，可將藥效物質(zhì)群的指紋圖譜定性和指標(biāo)成分的定量研究相結(jié)合，加強(qiáng)指紋圖譜的特異性表征，應(yīng)進(jìn)一步深入研究制劑的血清指紋圖譜，建立其譜效關(guān)系，為建立現(xiàn)代中藥制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)體系提供依據(jù)。HPLC指紋圖譜在中藥制劑中的應(yīng)用都是按中藥注射劑的要求來開展的。

近年，許多先進(jìn)設(shè)備與分析手段等應(yīng)用到中藥制劑的生產(chǎn)以及質(zhì)控中，產(chǎn)品的質(zhì)量有了提高。建立指紋圖譜，不僅可以提高原藥材、半成品、成品的標(biāo)準(zhǔn)化程度，控制其質(zhì)量，還可逐漸實(shí)現(xiàn)中藥現(xiàn)代化。

3 指紋圖譜在制劑工藝研究中的應(yīng)用

很多中藥的內(nèi)在成分尚未研究清楚，工藝研究中以某單一活性成分的含量為指標(biāo)是難以評價(jià)其整體質(zhì)量的。而中藥指紋圖譜有多層次、多靶點(diǎn)等特點(diǎn)，可為中藥制劑工藝的優(yōu)化及減少不良反應(yīng)奠定基礎(chǔ)。

王銳等[41]建立指紋圖譜，色譜柱為Agilent HC-C18（250 mm × 4.6 mm，5 μm），用甲醇－0.25%冰醋酸梯度洗脫，流速為1.0 mL·min-1，檢測波長為280 nm，對水提工藝中提取壓力、容量、工序損失等因素進(jìn)行單因素對比研究前列安栓水提粉的譜峰含量，已知峰占26個(gè)共有峰的61%，含量分析得干燥工序，A工藝，3M3罐更好。該方法為中間產(chǎn)品的質(zhì)量控制和工藝優(yōu)化提供了一種新的技術(shù)手段；劉海霞等[42]基于多指標(biāo)分析及HPLC指紋圖譜優(yōu)選了小兒銀馬口服液的最佳澄清工藝。

張慧等[43]通過對黃瑞香注射液建立藥材、半成品以及半成品經(jīng)酸和堿水解后的HPLC指紋圖譜，得工藝中pH的調(diào)節(jié)對注射液穩(wěn)定性影響很大，為進(jìn)一步優(yōu)化工藝提供了依據(jù)；有學(xué)者采用正交試驗(yàn)及HPLC法來確定散瘀鎮(zhèn)痛顆粒[44]最佳提取工藝。

HPLC指紋圖譜為中藥制劑優(yōu)選出最佳提取、干燥、澄清等工藝，為最終制劑的安全、有效奠定基礎(chǔ)。

4 小結(jié)與展望

中藥制劑的質(zhì)量優(yōu)劣直接關(guān)系到臨床上藥物使用的安全性與有效性，也關(guān)系到用藥者的健康與安全，而中藥制劑的質(zhì)量與其原藥材、半成品及成品質(zhì)量密切相關(guān)，而中藥本身成分的復(fù)雜性，找到的特異性指標(biāo)成分越多，其質(zhì)量越易控制，而中藥制劑的質(zhì)量控制的源頭就是中藥材，故必須優(yōu)化與解決影響中藥制劑質(zhì)量的關(guān)鍵因素，為中藥制劑建立嚴(yán)格的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。

HPLC指紋圖譜是目前中藥制劑質(zhì)量控制最常用的技術(shù)，能較全面的反映中藥成分間的復(fù)雜性和相關(guān)性，可監(jiān)測中藥制劑的真?zhèn)巍?yōu)劣、穩(wěn)定并優(yōu)化其生產(chǎn)工藝，從整體和全過程實(shí)現(xiàn)質(zhì)量控制。從最初的建立藥材單一指紋圖譜到從各個(gè)層面構(gòu)建一組指紋圖譜，包括TLC、GC、HPLC和HPCE等技術(shù)及聯(lián)用技術(shù)等，改變以往單一的質(zhì)量評價(jià)模式，向綜合的質(zhì)量評價(jià)模式發(fā)展，從而得到更加全面的化學(xué)信息。但HPLC指紋圖譜也存在缺點(diǎn)，其僅反應(yīng)中藥化學(xué)信息，而不能直接體現(xiàn)中藥藥理活性信息，從而難以評價(jià)中藥的藥效。中藥制劑的藥效通過各中藥中起藥效的化合物群發(fā)揮作用，各種中藥量的多少及比例關(guān)系會(huì)可導(dǎo)致化合物群的種類和數(shù)量發(fā)生變化而影響療效，指紋圖譜反映該變化，來開展與藥效評估相關(guān)的指紋圖譜質(zhì)量控制，將中藥指紋圖譜中的化學(xué)成分變化與藥效聯(lián)系起來建立實(shí)際意義的“譜效學(xué)”，即羅國安[45]提出對多維多息化學(xué)特征譜的研究。但其對中藥制劑內(nèi)在質(zhì)量的綜合療效關(guān)系，即中藥指紋圖譜對中藥制劑藥效信息的描述方面的研究尚淺。關(guān)于中藥制劑完整的“譜”來反映中藥整體的“效”，即譜效關(guān)系的對應(yīng)體系還應(yīng)進(jìn)一步深入研究。

隨著現(xiàn)代技術(shù)的發(fā)展，指紋圖譜及其他分析技術(shù)研究將進(jìn)一步深入，逐步實(shí)現(xiàn)中藥材、中成藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的現(xiàn)代化。大大推進(jìn)了現(xiàn)代中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究，對科學(xué)全面的評價(jià)中藥制劑質(zhì)量具有重要的意義。

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