耐藥結(jié)核病實(shí)驗(yàn)室診斷方法的研究進(jìn)展

李瑜琴，陳 玲

結(jié)核病是由結(jié)核分枝桿菌(mycobacterium tuberculosis，MTB)感染引起的慢性傳染病。《2017全球結(jié)核病報(bào)告》指出，2016年，結(jié)核病仍是頭號(hào)傳染病，是全球范圍內(nèi)第九大致死性疾病。近年來，結(jié)核病患者由于診斷延遲、化療不當(dāng)或管理不善等原因而導(dǎo)致越來越多的MTB對(duì)主流抗結(jié)核藥物產(chǎn)生了耐藥性，給結(jié)核病防控工作帶來嚴(yán)峻挑戰(zhàn)[1-4]。耐多藥結(jié)核病(multidrug-resistant tuberculosis，MDR-TB)是指MTB至少同時(shí)對(duì)利福平和異煙肼耐藥，其治療難度增加，需聯(lián)合二線抗結(jié)核藥物，但目前臨床上所用二線抗結(jié)核藥物不僅毒副作用較大、費(fèi)用較昂貴，且整體控制效果較差；更為嚴(yán)峻的是，隨著二線抗結(jié)核藥物使用，廣泛耐藥結(jié)核病(extensively drug resistant tuberculosis，XDR-TB)已悄然出現(xiàn)并持續(xù)增加及擴(kuò)散[3，5-6]，目前幾乎無特效藥物，且許多涂陽的耐藥患者至死仍具有傳染性，耐藥結(jié)核病已成為全球結(jié)核病防治的難題。近年來，隨著分子生物學(xué)技術(shù)發(fā)展，結(jié)核病尤其是耐藥結(jié)核病的診斷技術(shù)突飛猛進(jìn)。本文通過檢索相關(guān)文獻(xiàn)，旨在對(duì)耐藥結(jié)核病實(shí)驗(yàn)室診斷方法的研究進(jìn)展進(jìn)行綜述。

1 耐藥結(jié)核病流行現(xiàn)狀

世界衛(wèi)生組織(WHO)與國際防癆和肺病聯(lián)合會(huì)(International Union Against Tuberculosis and Lung Disease，IUATLD)于1994年建立了全球性抗結(jié)核藥物耐藥監(jiān)測(cè)計(jì)劃，2008—2013年第5輪監(jiān)測(cè)計(jì)劃中提到，XDR-TB已在全球100個(gè)國家報(bào)道，其中約9.0%的MDR-TB為XDR-TB[7]；截至2016年，抗結(jié)核藥物耐藥監(jiān)測(cè)計(jì)劃已覆蓋155個(gè)國家及地區(qū)，2015年全球新發(fā)結(jié)核病患者約1 040萬，其中約3.9%初治和21.0%復(fù)治結(jié)核病患者為MDR-TB，耐利福平或耐多藥結(jié)核病(MDR/RR-TB)患者約為58萬，其中約9.5%的MDR-TB為XDR-TB。我國一直是全球結(jié)核病高負(fù)擔(dān)國家，結(jié)核病新發(fā)人數(shù)位居全球第三，MDR-TB新發(fā)人數(shù)位居全球第二，僅次于印度[8]。2007—2008年全國結(jié)核病耐藥基線調(diào)查報(bào)告顯示，肺結(jié)核患者耐多藥(MDR)率為8.32%，廣泛耐藥(XDR)率為0.68%，估算每年新發(fā)MDR肺結(jié)核患者為12萬，每年新發(fā)XDR肺結(jié)核患者為1萬。全國第五次結(jié)核病流行病學(xué)抽樣調(diào)查報(bào)告顯示，分離的MTB對(duì)二線抗結(jié)核藥物耐藥率為24.6%，MDR率為6.8%，XDR率為2.1%[9-11]。大多數(shù)結(jié)核病患者可通過早期診斷而得到合理治療，病死率較低，但估計(jì)新發(fā)結(jié)核病患者人數(shù)與報(bào)告登記患者人數(shù)缺口高達(dá)40%。因此，加強(qiáng)結(jié)核病尤其是耐藥結(jié)核病的早期診斷刻不容緩。

2 常規(guī)細(xì)菌學(xué)檢測(cè)方法

目前，耐藥結(jié)核病常規(guī)細(xì)菌學(xué)檢測(cè)方法主要是建立在MTB培養(yǎng)陽性基礎(chǔ)上，并根據(jù)MTB生長及代謝狀態(tài)進(jìn)行判定。

2.1 傳統(tǒng)藥敏試驗(yàn) 目前，耐藥結(jié)核病的診斷仍主要依靠傳統(tǒng)藥敏試驗(yàn)，主要分為直接法和間接法。直接法是指涂片鏡檢確認(rèn)陽性的臨床標(biāo)本，經(jīng)處理后直接接種于含藥培養(yǎng)基；間接法是建立在MTB培養(yǎng)陽性基礎(chǔ)上，將培養(yǎng)出的MTB接種于含藥培養(yǎng)基。直接法雖然較間接法報(bào)告結(jié)果快，但由于其接種量不易液化、污染不易控制及可能存在涂陽培陰等情況而導(dǎo)致臨床應(yīng)用受限。目前，臨床常用的藥敏試驗(yàn)方法是瓊脂比例法[12]，其能準(zhǔn)確計(jì)算對(duì)某種藥物耐藥的MTB比例，且成本較低，適合在基層醫(yī)院應(yīng)用；但由于MTB生長速度緩慢，傳統(tǒng)固體藥敏試驗(yàn)通常需3個(gè)月才能獲得結(jié)果，易延誤耐藥結(jié)核病患者開展有效治療；再者，抗結(jié)核藥物濃度與耐藥結(jié)果關(guān)系密切，目前二線抗結(jié)核藥物的藥敏試驗(yàn)均存在可靠性及可重復(fù)性不足等問題[13]。

2.2 BacT/ALert 3D全自動(dòng)細(xì)菌/分枝桿菌培養(yǎng)監(jiān)測(cè)系統(tǒng) BacT/ALert 3D全自動(dòng)細(xì)菌/分枝桿菌培養(yǎng)監(jiān)測(cè)系統(tǒng)由法國梅里埃公司研發(fā)，是一種集MTB快速生長培養(yǎng)及藥敏試驗(yàn)為一體的全自動(dòng)培養(yǎng)儀，其原理是利用微生物生長代謝過程中產(chǎn)生的二氧化碳(CO2)，通過培養(yǎng)瓶底部特殊的激光器及固定的傳感器連續(xù)檢測(cè)接種標(biāo)本的培養(yǎng)瓶中的CO2及其變化，從而判斷有無MTB生長；藥敏試驗(yàn)是將原始管分離的菌液倒入配置含藥的藥敏培養(yǎng)基及空白對(duì)照培養(yǎng)基中，然后置于培養(yǎng)儀中，根據(jù)MTB生長情況判斷耐藥性。BacT/ALert 3D全自動(dòng)細(xì)菌/分枝桿菌培養(yǎng)監(jiān)測(cè)系統(tǒng)安全、環(huán)保、無放射性污染，且可自動(dòng)監(jiān)測(cè)，與傳統(tǒng)改良酸性羅氏培養(yǎng)法相比具有安全、快速、能減少工作量等優(yōu)點(diǎn)[14]，但該系統(tǒng)投入成本較高，很難在基層醫(yī)院開展。

2.3 BACTEC-460TB檢測(cè)系統(tǒng) BACTEC-460TB檢測(cè)系統(tǒng)由美國BD公司生產(chǎn)，其工作原理與BacT/ALert 3D全自動(dòng)細(xì)菌/分枝桿菌培養(yǎng)監(jiān)測(cè)系統(tǒng)基本相同，在培養(yǎng)系統(tǒng)中加入放射性同位素14C標(biāo)記的棕櫚酸，MTB生長代謝過程中會(huì)特異性利用被標(biāo)記的棕櫚酸，該檢測(cè)系統(tǒng)可自動(dòng)檢測(cè)代謝產(chǎn)物14C的放射活性，換算成生長指數(shù)值后進(jìn)行分析報(bào)告，一般10～14 d可檢測(cè)出陽性結(jié)果，同時(shí)還可進(jìn)行相應(yīng)的藥敏試驗(yàn)。但BACTEC-460TB檢測(cè)系統(tǒng)采用放射性培養(yǎng)基，存在放射污染，目前已被MTB生長指示管(MGIT)960檢測(cè)系統(tǒng)取代[15]。

2.4 MGIT 960檢測(cè)系統(tǒng) MGIT 960檢測(cè)系統(tǒng)是指不含放射性培養(yǎng)基的BACTEC-460TB檢測(cè)系統(tǒng)，其原理是通過監(jiān)測(cè)培養(yǎng)管底部能被氧分子抑制的熒光指示劑而觀察MTB生長狀態(tài)，當(dāng)培養(yǎng)管中有MTB生長時(shí)大量氧分子被消耗，原先被抑制的熒光指示劑被激活，在365 nm波長紫外光照射下出現(xiàn)熒光，即可判斷陽性結(jié)果。MGIT 960檢測(cè)系統(tǒng)不存在放射性污染，且具有檢出陽性率較高、耗時(shí)較短、特異性較高等優(yōu)點(diǎn)，但因試劑和檢測(cè)儀器昂貴而難以在基層醫(yī)院開展[16-17]。

2.5 Etest法 Etest法實(shí)際是一種改良瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)，其原理是將藥物以log2梯度稀釋成不同濃度，并用特殊技術(shù)固定于特制的塑料條(5 mm×50 mm)上，然后將藥條貼于處理過的含MTB的改良培養(yǎng)板表面并觀察其抑菌圈。Etest法是一種定量檢測(cè)方法，能同時(shí)測(cè)試多種藥物，5～10 d可以報(bào)告其藥敏結(jié)果；但該方法易受到其他因素影響，陰性率與假陽性率較高[18]，目前國內(nèi)尚未有該方法用于診斷MTB的報(bào)道。

2.6 微量快速顯色藥敏檢測(cè)法 微量快速顯色藥敏檢測(cè)法的原理是MTB在變色培養(yǎng)基基礎(chǔ)液中生長，當(dāng)加入一定量結(jié)核藥物作用一定時(shí)間后，對(duì)藥物敏感的MTB減少，故不能使變色劑變色；對(duì)藥物耐藥的MTB活力無明顯降低，仍能增殖，使變色劑變色。微量快速顯色藥敏檢測(cè)法通過觀察培養(yǎng)基顏色及比較對(duì)照孔變化來判斷藥物敏感性，2～6 d可獲得結(jié)果；但該方法對(duì)菌液濃度要求較高，不易操作，精確性易受影響[19]，須專業(yè)人員在無菌條件下進(jìn)行。

3 分子生物學(xué)檢測(cè)方法

分子生物學(xué)檢測(cè)方法主要包括MTB DNA提取、針對(duì)結(jié)核藥物耐藥位點(diǎn)設(shè)計(jì)引物、通過聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)擴(kuò)增與耐藥性有關(guān)的基因片段及分析PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行耐藥性判斷等。

3.1 普通PCR技術(shù) DNA直接測(cè)序是檢測(cè)基因突變的最客觀、最直接的方法，即從MTB中提取DNA，設(shè)計(jì)相應(yīng)藥物所對(duì)應(yīng)基因片段的引物，PCR擴(kuò)增后測(cè)序，與H37RV標(biāo)準(zhǔn)菌株基因組比較并判斷有無基因突變。普通PCR技術(shù)可準(zhǔn)確檢測(cè)突變基因及突變類型，但費(fèi)用較高、操作繁瑣、易出現(xiàn)假陽性，需特定的實(shí)驗(yàn)室設(shè)備及專業(yè)人員進(jìn)行，目前多用于科學(xué)研究。

3.2 Gene Xpert檢測(cè)系統(tǒng) Gene Xpert檢測(cè)系統(tǒng)由美國Cepheid公司研發(fā)，其原理是將樣本加入Gene Xpert反應(yīng)盒后自動(dòng)進(jìn)行樣品純化、核酸擴(kuò)增、目標(biāo)序列測(cè)定。Xpert MTB/RIF檢測(cè)技術(shù)作為WHO推薦的一種耐藥基因突變檢測(cè)方法，采用了Gene Xpert檢測(cè)系統(tǒng)，是針對(duì)MTB利福平耐藥基因rpoB的81bp利福平耐藥決定區(qū)設(shè)計(jì)引物、探針，在檢測(cè)有無MTB的同時(shí)檢測(cè)是否發(fā)生基因突變，從而判斷MTB是否對(duì)利福平耐藥[20]。BOEHME等[21]研究結(jié)果顯示，Xpert MTB/RIF檢測(cè)技術(shù)檢測(cè)利福平耐藥性MTB的靈敏度和特異度分別為97.6%、98.1%。王霄等[22]應(yīng)用Xpert MTB/RIF檢測(cè)技術(shù)診斷肺外結(jié)核(淺表淋巴結(jié)結(jié)核)的陽性率為78.1%。Xpert MTB/RIF檢測(cè)技術(shù)操作簡單，耗時(shí)較短，交叉污染較小，對(duì)環(huán)境和實(shí)驗(yàn)室人員安全；但Gene Xpert檢測(cè)系統(tǒng)僅能檢測(cè)利福平耐藥情況，且該技術(shù)屬于國外進(jìn)口，費(fèi)用較昂貴，缺乏我國自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)。超級(jí)Xpert(Xpert Ultra)作為第二代Xpert MTB/RIF檢測(cè)技術(shù)，與液體培養(yǎng)靈敏度相當(dāng)，檢測(cè)菌量極限可低至10 cfu/ml，能更準(zhǔn)確地檢測(cè)利福平耐藥情況，但目前尚缺乏多中心研究進(jìn)一步證實(shí)[8，23]。

3.3 高分辨熔解曲線技術(shù)(HRM) HRM由美國猶他大學(xué)與美國Idaho公司共同合作開發(fā)，是PCR擴(kuò)增技術(shù)與熔解曲線分析技術(shù)結(jié)合形成的新技術(shù)[24]，其依據(jù)不同核酸分子GC含量、GC分布不同及解鏈時(shí)所形成的熔解曲線不同的原理，在PCR擴(kuò)增完成后通過高分辨率儀器檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物中飽和熒光染料的熒光強(qiáng)度變化而獲得特征性熔解曲線，通過與野生型熔解曲線比較而判斷序列是否突變及區(qū)分單個(gè)堿基的序列差異[25-26]。HRM無需序列特異性探針，已有相關(guān)商品化產(chǎn)品用于檢測(cè)包括異煙肼、利福平、乙胺丁醇、鏈霉素、喹諾酮類藥物在內(nèi)的抗結(jié)核藥物，該技術(shù)屬于我國自主研發(fā)產(chǎn)品，已逐步用于耐藥結(jié)核病分子診斷，但目前仍缺少系統(tǒng)的臨床研究。

3.4 線性探針(LPA) LPA通過設(shè)計(jì)被生物素修飾的特異性引物，經(jīng)過多重PCR擴(kuò)增而使擴(kuò)增產(chǎn)物攜帶生物素，然后將擴(kuò)增產(chǎn)物變性，使擴(kuò)增產(chǎn)物與特異探針進(jìn)行雜交，采用酶免疫顯色法判定結(jié)果。LPA最短6 h可診斷出耐藥結(jié)核病，故被WHO推薦作為診斷耐藥結(jié)核病的主要方法之一[8]，與傳統(tǒng)藥敏試驗(yàn)比較，其可極大地縮短耐藥結(jié)核病報(bào)告時(shí)間，且靈敏度和特異度較高；但受膜上探針限制而不能檢測(cè)所有類型耐藥結(jié)核病，目前已知的有德國HAI公司GenoType MTBDR和GenoType MTBDRsl檢測(cè)試劑盒。商業(yè)化的LPA試劑盒價(jià)格較高，且LPA檢測(cè)對(duì)實(shí)驗(yàn)室條件及實(shí)驗(yàn)室人員要求嚴(yán)格，故該技術(shù)在基層實(shí)驗(yàn)室推廣使用受限[27-29]。

3.5 基因芯片技術(shù) 基因芯片技術(shù)是一種新型核酸檢測(cè)方法，其基本原理是將大量不同的生物信息分子以高密度密集的方式有序地固定在玻璃上形成微陣列，當(dāng)熒光標(biāo)記的靶分子與芯片上的探針結(jié)合后，通過掃描即可進(jìn)行量化分析?；蛐酒夹g(shù)可快速檢測(cè)MTB耐利福平和異煙肼3個(gè)基因(ropB、KatG、inhA)的常見突變位點(diǎn)[30-31]，準(zhǔn)確率高，但只能檢測(cè)常見的突變基因，且費(fèi)用較昂貴，需特定的實(shí)驗(yàn)室設(shè)備及專業(yè)人員進(jìn)行，目前多應(yīng)用于科學(xué)研究。

3.6 全基因組測(cè)序(WGS) WGS是一種高通量測(cè)序技術(shù)，能更全面、精準(zhǔn)地分析MTB全基因組的堿基序列[32]，充分了解其所包含的遺傳信息，如耐藥、分型等，并通過與不同個(gè)體或群體比對(duì)發(fā)現(xiàn)二者之間的遺傳特性及基因突變特點(diǎn)，從而加深對(duì)耐藥結(jié)核病發(fā)生、發(fā)展的認(rèn)識(shí)，并制定相應(yīng)的治療策略，提高其檢出率；WGS已成為藥物敏感性檢測(cè)的另外一個(gè)策略。但WGS目前僅用于培養(yǎng)分離株，并未用于痰標(biāo)本，且工作量較大、費(fèi)用較高，測(cè)序后生物信息學(xué)分析更是錯(cuò)綜復(fù)雜，故尚難以在臨床上推廣，多應(yīng)用于科學(xué)研究[33]。

4 小結(jié)與展望

目前，MTB傳統(tǒng)藥敏試驗(yàn)仍是耐藥結(jié)核病的診斷金標(biāo)準(zhǔn)，但其耗時(shí)較長、成本較高，有待進(jìn)一步改進(jìn)。近年來隨著分子生物學(xué)技術(shù)快速發(fā)展，涌現(xiàn)出大量MTB耐藥基因檢測(cè)技術(shù)，可快速、準(zhǔn)確地檢測(cè)出針對(duì)某種抗結(jié)核藥物的突變基因，但并不是所有突變均提示耐藥，也不是所有耐藥均存在基因突變，目前還有許多抗結(jié)核藥物耐藥相應(yīng)突變基因及其耐藥機(jī)制尚未明確。因此，結(jié)核病的防治工作尤其是耐藥結(jié)核病診治任重道遠(yuǎn)，需全社會(huì)共同努力。

[1]AZIZ M A，WRIGHT A，LASZLO A，et al.Epidemiology of antituberculosis drug resistance(the Global Project on Anti-tuberculosis Drug Resistance Surveillance)：an updated analysis[J].Lancet，2006，368(9553)：2142-2154.

[2]范曉萍，張文宏.廣泛耐藥結(jié)核分枝桿菌耐藥機(jī)制及其疾病診斷的研究進(jìn)展[J].微生物與感染，2011，6(2)：117-121.DOI：10.3969/j.issn.1673-6184.2011.02.010.

[3]World Health Organization.Global Tuberculosis Control：WHO report 2010[R].World Health Organization，2010.

[4]CHANG K C，YEW W W.Management of difficult multidrug-resistant tuberculosis and extensively drug-resistant tuberculosis：update 2012[J].Respirology，2013，18(1)：8-21.DOI：10.1111/j.1440-1843.2012.02257.x.

[5]ZHAO L L，SUN Q，ZENG C Y，et al.Molecular characterisation of extensively drug-resistant Mycobacterium tuberculosisisolates in China[J].Int J Antimicrob Agents，2015，45(2)：137-143.DOI：10.1016/j.ijantimicag.2014.09.018.

[6]ACOSTA C D，DADU A，RAMSAY A，et al.Drug-resistant tuberculosis in Eastern Europe：challenges and ways forward[J].Public Health Action，2014，4(Supp 2)：S3-12.DOI：10.5588/pha.14.0087.

[7]World Health Organization.Global Tuberculosis Report 2014[R].World Health Organization，2014.

[8]World Health Organization.Global Tuberculosis Report 2016[R].World Health Organization，2016.

[9]ZHAO Y，XU S，WANG L，et al.National survey of drug-resistant tuberculosis in China[J].N Engl J Med，2012，366(23)：2161-2170.DOI：10.1056/NEJMoa1108789.

[10]ZHANG J，GOU H，HU X，et al.Status of drug-resistant tuberculosis in China：A systematic review and meta-analysis[J].Am J Infect Control，2016，44(6)：671-676.DOI：10.1016/j.ajic.2015.12.042.

[11]王黎霞，成詩明，陳明亭，等.2010年全國第五次結(jié)核病流行病學(xué)抽樣調(diào)查報(bào)告[J].中國防癆雜志，2012，34(8)：485-508.

[12]KIM S J.Drug-susceptibility testing in tuberculosis：methods and reliabiity of results[J].Eur Respir J，2005，25(3)：564-569 .

[13]李亮，許紹發(fā).中國結(jié)核病診療現(xiàn)狀及展望[J].中國實(shí)用內(nèi)科雜志，2015，35(8)：643-646.

[14]陳軍，王飛，任易，等.BacT/Alert 3D系統(tǒng)與羅氏培養(yǎng)基分離分枝桿菌的比較[J].中國防癆雜志，2007，29(2)：151-153.DOI：10.3969/j.issn.1000-6621.2007.02.011.

[15]RODRIGUES C S，SHENAI S V，ALMEIDA D，et al.Use of bactec 460 TB system in the diagnosis of tuberculosis[J].Indian J Med Microbiol，2007，25(1)：32-36.

[16]張娟，蔣俊，張紅，等.MGIT960與羅氏培養(yǎng)法在結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)及藥敏試驗(yàn)中的比對(duì)分析[J].中國防癆雜志，2011，33(6)：361-365.

[17]陳忠南，趙麗麗，易松林，等.BACTEC MIGT960在結(jié)核分枝桿菌藥物敏感性試驗(yàn)中的臨床研究[J].中國人獸共患病學(xué)報(bào)，2013，29(2)：166-169.DOI：10.3969/cjz.j.issn.1002-2694.2013.02.013.

[18]VERMA J S，RAWAT D，HASAN A，et al.The use of E-test for the drug susceptibility testing of Mycobacterium tuberculosis——A solution or an illusion?[J].Indian J Med Microbiol，2010，28(1)：30-33.DOI：10.4103/0255-0857.58725.

[19]趙錦，徐萍，張濤，等.微量快速顯色藥敏檢測(cè)法臨床應(yīng)用評(píng)價(jià)[J].中國防癆雜志，2007，29(3)：273-274.DOI：10.3969/j.issn.1000-6621.2007.03.022.

[20]張治國，歐喜超，孫倩，等.利福平耐藥實(shí)時(shí)熒光定量核酸擴(kuò)增技術(shù)檢測(cè)痰標(biāo)本中結(jié)核分枝桿菌及其耐藥性的研究[J].中國防癆雜志，2013，35(l)：13-16.

[21]BOEHME C C，NABETA P，HILLEMANN D，et al.Rapid molecular detection of tuberculosis and rifampin resistanc[J].N Engl J Med，363(9)：1005-1015.DOI：10.1056/NEJMoa0907847.

[22]王霄，文強(qiáng)，岳健博，等.GeneXpert Mtb/RIF、抗酸染色及培養(yǎng)在淺表淋巴結(jié)結(jié)核診斷中的比較研究[J].遵義醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2016，39(3)：275-278.

[23]BAHR N C，NUWAGIRA E，EVANS E E，et al.Diagnostic accuracy of Xpert MTB/RIF Ultra for tuberculous meningitis in HIV-infected adults: a prospective cohort study[OL].Lancet Infect Dis，2018，18(1)：68-75. DOI：10.1016/S1473-3099(17)30474-7.[2017-09-14].

[24]WITTER C T，REED G H，GUNDRY C N，et al.High-resolution genotyping by amplicon melting analysis using LCGreen[J].Clin Chem，2003，49(6 Pt 1)：853-860.

[25]王姣，尤崇革.高分辨率熔解曲線技術(shù)及應(yīng)用新進(jìn)展[J].蘭州大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版)，2016，42(5)：55-61.DOI：10.13885/j.issn.1000-2812.2016.05.011.

[26]柳正衛(wèi)，黃玉，趙雁林.結(jié)核分枝桿菌基因突變檢測(cè)方法研究進(jìn)展[J].中國防癆雜志，2013，35(9)：748-751.

[27]王斌，鄧建平，李群，等.線性探針技術(shù)用于臨床結(jié)核分枝桿菌耐藥性的應(yīng)用[J].預(yù)防醫(yī)學(xué)情報(bào)雜志，2016，32(3)：285-288.

[28]雷永良，雷麗倩，王曉光，等.線性探針技術(shù)在麗水地區(qū)結(jié)核菌耐藥檢驗(yàn)中的應(yīng)用[J].中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2016，26(9)：1265-1267.

[29]王小平，陸峰.應(yīng)用線性探針技術(shù)(HAIN)對(duì)臨床結(jié)核菌分離株進(jìn)行快速耐藥性分析[J].江蘇預(yù)防醫(yī)學(xué)，2016，27(3)：265-267.DOI：10.13668/j.issn.1006-9070.2016.03.03.

[30]陳蕾.基因芯片法在肺結(jié)核診斷中的臨床應(yīng)用價(jià)值[J].臨床肺科雜志，2017，22(10)：1879-1883.

[31]高會(huì)霞，馮愛東，柳曉金，等.基因芯片技術(shù)診斷耐多藥結(jié)核病的臨床應(yīng)用研究[J].天津醫(yī)藥，2016，44(9)：1155-1159.DOI：10.11958/20150264.

[32]MAHOMED S，NAIDOOET K，DOOKIE N，et al.Whole genome sequencing for the management of drug-resistant TB in low income high TB burden settings：Challenges and implications[J].Tuberculosis，107：137-143.DOI：10.1016/j.tube.2017.09.005.

[33]姚偉明，陳重，蒲彰，等.全基因測(cè)序分析耐甲氧西林金黃色葡萄球菌利奈唑胺耐藥相關(guān)變異位點(diǎn)[J].中國感染控制雜志，2017，16(1)：1-5.DOI：10.3969/j.issn.1671-9638.2017.01.001.