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    消糜栓對(duì)非特異性陰道炎的治療機(jī)制研究*

    2017-04-02 05:45:21于艷輝周俊佟許艷茹唐曉桐
    黑龍江中醫(yī)藥 2017年6期
    關(guān)鍵詞:膠漿苯酚細(xì)菌性

    石 菊 于艷輝 徐 建 周俊佟 許艷茹 唐曉桐 白 冰

    (吉林修正藥業(yè)新藥開(kāi)發(fā)有限公司 長(zhǎng)春·130012)

    消糜栓為褐色至棕褐色的栓劑,氣特異。主要成分含人參莖葉皂苷、紫草、黃柏、枯礬、兒茶、苦參、冰片,可以清熱解毒,燥濕殺蟲(chóng)。用于濕熱下注所致的帶下病,癥見(jiàn)帶下量多、色黃、質(zhì)稠,腥臭、陰部瘙癢,滴蟲(chóng)性陰道炎、霉菌性陰道炎、非特異性陰道炎見(jiàn)上述證候者。本文著重研究消糜栓對(duì)非特異性陰道炎的治療作用。

    1 材料

    1.1 試藥與試劑

    消糜栓:消糜栓原藥粉,由通藥制藥集團(tuán)股份有限公司提供,批號(hào):060701;雙唑泰栓:云南白藥集團(tuán)股份有限公司,批號(hào) ZlA1321;復(fù)方甲硝唑陰道栓:河北三石藥業(yè)股份有限公司,批號(hào)150111018;水合氯醛:國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司,批號(hào)T20070725;阿拉伯膠:天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所,批號(hào)20061204;苯酚:北京北化精細(xì)化學(xué)品有限責(zé)任公司,批號(hào)20060306;甲醛:沈陽(yáng)力誠(chéng)試劑廠,批號(hào)20140614;苯甲酸雌二醇:杭州動(dòng)物藥品廠,批號(hào)110202511;氫化可的松注射液:吉林省華牧動(dòng)物保健品有限公司,批號(hào)141120;青霉素注射粉末:華北制藥股份有限公司,批號(hào)F4032305

    1.2 儀器

    CO2培養(yǎng)箱6100型:日本SANYAN公司;離心機(jī)lDZ5-2型:北京醫(yī)用離心機(jī)廠;倒置顯微鏡CDS-1型:重慶光學(xué)儀器廠;潔凈工作臺(tái)SW-CJ-IF型:蘇凈集團(tuán)蘇州安泰空氣技術(shù)有限公司;精密電子天平ESJ60-4:沈陽(yáng)龍騰電子稱(chēng)量?jī)x器有限公司。蒸汽滅菌器(YXQ-lS-50SII型,上海博訊實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療器械廠),熱空氣消毒箱(GR-246型,上海博訊實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療器械廠);酶標(biāo)儀(SMP-500-18272-lSI0型,Manufactured in China Designed in California USA);游標(biāo)卡尺,上海臺(tái)海工量具有限公司。

    1.3 動(dòng)物與菌株

    1.3.1動(dòng)物 清潔級(jí)Wistar大鼠,體重180-220g,購(gòu)自吉林大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)部實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究中心,動(dòng)物合格證號(hào):SCXK( 吉) 2014-0003。

    1.3.2飼料 鼠維持料,購(gòu)自長(zhǎng)春市綠園益生實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼料廠,許可證號(hào): SCXK(吉) 2010-0001。

    1.3.3菌株 加德納桿菌(ATCC14018)購(gòu)于中國(guó)食品藥品檢定研究院。

    2 實(shí)驗(yàn)方法

    2.1 消糜栓對(duì)大鼠細(xì)菌性陰道炎動(dòng)物模型的影響

    2.1.1細(xì)菌性陰道炎模型的復(fù)制[1,2]

    60只大鼠禁食不禁水16h后水合氯醛麻醉,分出10只為假手術(shù)組(只手術(shù)不摘除卵巢),其余大鼠無(wú)菌條件下摘除大鼠雙側(cè)卵巢,術(shù)后第4天開(kāi)始皮下注射苯甲酸雌二醇10mg·kg-1,每天1次,連續(xù)4d,使大鼠進(jìn)入假動(dòng)情期。即日開(kāi)始除皮下注射苯甲酸雌二醇外,再皮下注射氫化可的松注射液60mg·kg-1,隔日1次,連續(xù)3d,復(fù)制大鼠免疫功能低下模型。術(shù)后第9天將0.1ml(0.25×106個(gè)·ml-1)加德納桿菌液注入大鼠陰道內(nèi),原位停留1~2min,防止菌液溢出。24h后相同方法再感染1次。感染后大鼠隔日交替皮下注射苯甲酸雌二醇或者氫化可的松注射液1次。注入加德納桿菌4d后,可見(jiàn)模型大鼠外陰紅腫,伴少量白色分泌物,取分泌物涂于血瓊脂培養(yǎng)基表面,37℃培養(yǎng)72h,肉眼觀察可見(jiàn)大小不等的類(lèi)水泡菌落,即細(xì)菌性陰道炎大鼠模型復(fù)制成功。

    2.1.2分組與給藥

    細(xì)菌性陰道炎模型大鼠隨機(jī)分為模型(等體積生理鹽水)、復(fù)方甲硝唑陰道栓(216 mg·kg-1)和消糜栓高、中、低劑量(540、270、135 mg·kg-1)組,每組10只。陰道給藥,每天1次,連續(xù)7d。假手術(shù)組給予等體積生理鹽水。

    2.1.3指標(biāo)的測(cè)定

    于末次治療后第7天,大鼠麻醉,取1ml大鼠陰道沖洗液顯微計(jì)數(shù)。腹主動(dòng)脈取血,采取的血樣標(biāo)本在4℃條件下離心25min(2500r·min-1)制備血清,對(duì)TNF-α和Il-2含量測(cè)定。

    2.2 消糜栓對(duì)苯酚膠漿所致大鼠陰道炎的影響[3]

    2.2.1分組和給藥

    健康Wistar雌性大鼠60只,隨機(jī)分為:空白組、模型組、雙唑泰栓組(135 mg·kg-1)、消糜栓高、中、低劑量組(540 mg·kg-1、270 mg·kg-1、135 mg·kg-1)。根據(jù)文獻(xiàn)方法[6],取苯酚15ml,阿拉伯膠20g,蒸餾水25ml配成37.5%苯酚膠漿,大鼠陰道注入苯酚膠漿0.2ml,1次/3天,共4次。造模成功后,各組大鼠陰道給藥,1次/天,連續(xù)7天。

    2.2.2指標(biāo) 2.2.2.1 第11天所有大鼠腹主動(dòng)脈取血,4℃條件下離心25min(2500 r·min-1)制備血清,對(duì)TNF-α和IL-1含量測(cè)定。 2.2.2.2 取出陰道,剔除脂肪組織及系膜等,稱(chēng)量陰道的重量,計(jì)算臟器指數(shù)。 2.2.2.3 用10%福爾馬林固定,并進(jìn)行病理組織學(xué)觀察。

    3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

    3.1 消糜栓對(duì)大鼠細(xì)菌性陰道炎動(dòng)物模型的影響

    模型組細(xì)菌數(shù)明顯多于假手術(shù)組,復(fù)方甲硝唑陰道栓組(216 mg·kg-1)和消糜栓高、中劑量組(540、270 、135mg·kg-1)細(xì)菌數(shù)明顯少于模型組(P<0.05),模型組大鼠血清中腫瘤壞死因子TNF-α水平高于假手術(shù)組(P<0.05),與模型組比較,消糜栓高、中、低劑量(540、270、135 mg·kg-1)能明顯降低大鼠血清中腫瘤壞死因子TNF-α水平(P<0.001),詳見(jiàn)表1、表2。

    表1 消糜栓對(duì)大鼠細(xì)菌性陰道炎動(dòng)物模型細(xì)菌數(shù)的影響(±SD;n=100)

    表1 消糜栓對(duì)大鼠細(xì)菌性陰道炎動(dòng)物模型細(xì)菌數(shù)的影響(±SD;n=100)

    與空白組比較##P<0.01;與模型組比較*P<0.05、**P<0.01。

    組別  劑量(mg·kg-1) 細(xì)菌數(shù)(*106) 細(xì)菌數(shù)(酶標(biāo)法)假手術(shù)組  —— 1.32±0.47 0.28±0.10模型組  —— 6.35±1.28## 0.42±0.10##復(fù)方甲硝唑陰道栓組 216 1.45±0.23* 0.32±0.11消糜栓高劑量組 540 1.83±0.44* 0.27±0.06*消糜栓中劑量組 270 1.72±0.04* 0.29±0.09*消糜栓低劑量組 135 2.70±1.27* 0.30±0.16*

    表1 消糜栓對(duì)大鼠細(xì)菌性陰道炎動(dòng)物模型TNF-α和Il-2的影響(±SD;n=100)

    表1 消糜栓對(duì)大鼠細(xì)菌性陰道炎動(dòng)物模型TNF-α和Il-2的影響(±SD;n=100)

    與空白組比較#P<0.05;與模型組比較*P<0.05、***P<0.001。

    組別  劑量(mg·kg-1) TNF-α(U·ml-1)IL-2(U·ml-1)假手術(shù)組  —— 364.39±38.91 678.07±88.87模型組  —— 415.04±40.66#596.76±140.54復(fù)方甲硝唑陰道栓組 216 371.26±57.18518.18±108.67消糜栓高劑量組 540 316.49±53.97***563.71±111.15消糜栓中劑量組 270 327.61±33.15*** 556.68±94.05消糜栓低劑量組 135 334.28±48.85***534.12±103.99

    3.2 消糜栓對(duì)苯酚膠漿所致大鼠陰道炎的影響

    3.2.1模型組大鼠陰道體指數(shù)高于空白組(P<0.01),模型組大鼠血清中白細(xì)胞介素Il-1水平高于空白組(P<0.05),模型組大鼠血清中腫瘤壞死因子TNF-α與空白組無(wú)差異。與模型組比較,消糜栓高、中劑量(540、270、135 mg·kg-1)能明顯降低大鼠血清中白細(xì)胞介素Il-1水平(P<0.001、P<0.01、P<0.05)。,詳見(jiàn)表 3。

    表3 消糜栓對(duì)苯酚膠漿所致大鼠陰道炎的影響(±SD;n=100)

    表3 消糜栓對(duì)苯酚膠漿所致大鼠陰道炎的影響(±SD;n=100)

    與空白組比較 ##P<0.01;與模型組比較 *P<0.05、**P<0.01、***P<0.001。

    (×10-3) IL-1(U·ml-1) TNF-α(U·ml-1)空白組  — 1.55±0.7 1.48±0.09 16.66±1.48模型組  — 2.43±0.37##1.61±0.14#16.74±2.00雙唑泰栓組 135 1.94±0.28 1.57±0.31 17.20±2.34組別  劑量(mg·kg-1)陰道體指數(shù)消糜栓高劑量組 540 1.89±0.42 1.36±0.08***18.32±1.60消糜栓中劑量組 270 1.93±0.38 1.39±0.16**17.57±1.98消糜栓低劑量組 135 2.86±0.24 1.44±0.15*17.42±2.08

    3.2.2實(shí)驗(yàn)各組組織學(xué)觀察結(jié)果顯示,空白組、雙唑泰栓組、消糜栓高、中、低劑量組均表現(xiàn)為上皮組織結(jié)構(gòu)正常,個(gè)別病例偶見(jiàn)少量炎細(xì)胞浸潤(rùn),毛細(xì)血管增生,但均未見(jiàn)明顯異常。模型組均表現(xiàn)出細(xì)胞輕微不典型增生改變。雙唑泰組、消糜栓高、中、低劑量組均對(duì)其有治療作用,見(jiàn)圖1-6。

    4 討論

    女性生殖道感染是婦女的常見(jiàn)病和多發(fā)病,其病原菌既有厭氧菌、需氧菌、霉菌,又有陰道滴蟲(chóng)。致病者往往有兩種以上病原體混合感染。消糜栓主要成分含人參莖葉皂苷、紫草、黃柏、枯礬、兒茶、苦參、冰片。

    本中藥復(fù)方重在于炎性的研究,一般炎性病理檢查可以見(jiàn)到病變處有大量的炎細(xì)胞浸潤(rùn)及炎性充血,水腫,甚至出現(xiàn)粘膜潰瘍[4-5]查閱大量的文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn),用細(xì)菌感染和25%的苯酚膠漿致陰道炎,宮頸炎的模型中陰道,宮頸組織病理檢查都會(huì)出現(xiàn)上述的變化[6]。本文選用簡(jiǎn)單易行,重復(fù)性好,成功率高的陰道常見(jiàn)治病菌加德納桿菌所致的細(xì)菌性陰道炎模型和25%的苯酚膠漿造模進(jìn)行研究。中草藥治療婦科疾病的優(yōu)勢(shì)在于調(diào)整機(jī)體的免疫功能[7-9],調(diào)節(jié)陰道菌群。西藥抗菌效果好,但在殺滅致病菌的同時(shí)也破壞了陰道的正常菌群,因此易復(fù)發(fā)。本研究中,探討了消糜栓治療非特異性陰道炎的機(jī)制,其中體內(nèi)抑菌試驗(yàn)中,消糜栓可顯著降低腫瘤壞死因子TNF-α水平,提示消糜栓可能具有提高機(jī)體免疫功能的作用。在對(duì)苯酚膠漿所致大鼠陰道炎的試驗(yàn)中,消糜栓顯示出對(duì)陰道炎所致陰道不典型增生具有治療作用,可能與可降低炎性因子白細(xì)胞介素Il-2有關(guān)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)了消糜栓對(duì)非特異性陰道炎具有治療作用。這為消糜栓進(jìn)一步的研究提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù),并證明了其具有一定的實(shí)用價(jià)值。

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