消糜栓對(duì)非特異性陰道炎的治療機(jī)制研究*

石 菊 于艷輝 徐 建 周俊佟 許艷茹 唐曉桐 白 冰

（吉林修正藥業(yè)新藥開(kāi)發(fā)有限公司 長(zhǎng)春·130012）

消糜栓為褐色至棕褐色的栓劑，氣特異。主要成分含人參莖葉皂苷、紫草、黃柏、枯礬、兒茶、苦參、冰片，可以清熱解毒，燥濕殺蟲(chóng)。用于濕熱下注所致的帶下病，癥見(jiàn)帶下量多、色黃、質(zhì)稠，腥臭、陰部瘙癢，滴蟲(chóng)性陰道炎、霉菌性陰道炎、非特異性陰道炎見(jiàn)上述證候者。本文著重研究消糜栓對(duì)非特異性陰道炎的治療作用。

1　材料

1.1　試藥與試劑

消糜栓：消糜栓原藥粉，由通藥制藥集團(tuán)股份有限公司提供，批號(hào)：060701；雙唑泰栓：云南白藥集團(tuán)股份有限公司，批號(hào) ZlA1321；復(fù)方甲硝唑陰道栓：河北三石藥業(yè)股份有限公司，批號(hào)150111018；水合氯醛：國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)T20070725；阿拉伯膠：天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所，批號(hào)20061204；苯酚：北京北化精細(xì)化學(xué)品有限責(zé)任公司，批號(hào)20060306；甲醛：沈陽(yáng)力誠(chéng)試劑廠，批號(hào)20140614；苯甲酸雌二醇：杭州動(dòng)物藥品廠，批號(hào)110202511；氫化可的松注射液：吉林省華牧動(dòng)物保健品有限公司，批號(hào)141120；青霉素注射粉末：華北制藥股份有限公司，批號(hào)F4032305

1.2　儀器

CO2培養(yǎng)箱6100型：日本SANYAN公司；離心機(jī)lDZ5-2型：北京醫(yī)用離心機(jī)廠；倒置顯微鏡CDS-1型：重慶光學(xué)儀器廠；潔凈工作臺(tái)SW-CJ-IF型：蘇凈集團(tuán)蘇州安泰空氣技術(shù)有限公司；精密電子天平ESJ60-4：沈陽(yáng)龍騰電子稱(chēng)量?jī)x器有限公司。蒸汽滅菌器（YXQ-lS-50SII型，上海博訊實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療器械廠），熱空氣消毒箱（GR-246型，上海博訊實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療器械廠）；酶標(biāo)儀（SMP-500-18272-lSI0型，Manufactured in China Designed in California USA）；游標(biāo)卡尺，上海臺(tái)海工量具有限公司。

1.3　動(dòng)物與菌株

1.3.1動(dòng)物 清潔級(jí)Wistar大鼠，體重180-220g，購(gòu)自吉林大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)部實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究中心，動(dòng)物合格證號(hào)：SCXK( 吉) 2014-0003。

1.3.2飼料 鼠維持料，購(gòu)自長(zhǎng)春市綠園益生實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼料廠，許可證號(hào): SCXK(吉) 2010-0001。

1.3.3菌株 加德納桿菌（ATCC14018）購(gòu)于中國(guó)食品藥品檢定研究院。

2　實(shí)驗(yàn)方法

2.1　消糜栓對(duì)大鼠細(xì)菌性陰道炎動(dòng)物模型的影響

2.1.1細(xì)菌性陰道炎模型的復(fù)制[1,2]

60只大鼠禁食不禁水16h后水合氯醛麻醉，分出10只為假手術(shù)組（只手術(shù)不摘除卵巢），其余大鼠無(wú)菌條件下摘除大鼠雙側(cè)卵巢，術(shù)后第4天開(kāi)始皮下注射苯甲酸雌二醇10mg·kg-1，每天1次，連續(xù)4d，使大鼠進(jìn)入假動(dòng)情期。即日開(kāi)始除皮下注射苯甲酸雌二醇外，再皮下注射氫化可的松注射液60mg·kg-1，隔日1次，連續(xù)3d，復(fù)制大鼠免疫功能低下模型。術(shù)后第9天將0.1ml（0.25×106個(gè)·ml-1）加德納桿菌液注入大鼠陰道內(nèi)，原位停留1～2min，防止菌液溢出。24h后相同方法再感染1次。感染后大鼠隔日交替皮下注射苯甲酸雌二醇或者氫化可的松注射液1次。注入加德納桿菌4d后，可見(jiàn)模型大鼠外陰紅腫，伴少量白色分泌物，取分泌物涂于血瓊脂培養(yǎng)基表面，37℃培養(yǎng)72h，肉眼觀察可見(jiàn)大小不等的類(lèi)水泡菌落，即細(xì)菌性陰道炎大鼠模型復(fù)制成功。

2.1.2分組與給藥

細(xì)菌性陰道炎模型大鼠隨機(jī)分為模型（等體積生理鹽水）、復(fù)方甲硝唑陰道栓（216 mg·kg-1）和消糜栓高、中、低劑量（540、270、135 mg·kg-1）組，每組10只。陰道給藥，每天1次，連續(xù)7d。假手術(shù)組給予等體積生理鹽水。

2.1.3指標(biāo)的測(cè)定

于末次治療后第7天，大鼠麻醉，取1ml大鼠陰道沖洗液顯微計(jì)數(shù)。腹主動(dòng)脈取血，采取的血樣標(biāo)本在4℃條件下離心25min（2500r·min-1）制備血清，對(duì)TNF-α和Il-2含量測(cè)定。

2.2　消糜栓對(duì)苯酚膠漿所致大鼠陰道炎的影響[3]

2.2.1分組和給藥

健康Wistar雌性大鼠60只，隨機(jī)分為：空白組、模型組、雙唑泰栓組(135 mg·kg-1)、消糜栓高、中、低劑量組（540 mg·kg-1、270 mg·kg-1、135 mg·kg-1）。根據(jù)文獻(xiàn)方法[6]，取苯酚15ml，阿拉伯膠20g，蒸餾水25ml配成37.5%苯酚膠漿，大鼠陰道注入苯酚膠漿0.2ml，1次/3天，共4次。造模成功后，各組大鼠陰道給藥，1次/天，連續(xù)7天。

2.2.2指標(biāo) 2.2.2.1 第11天所有大鼠腹主動(dòng)脈取血，4℃條件下離心25min（2500 r·min-1）制備血清，對(duì)TNF-α和IL-1含量測(cè)定。 2.2.2.2 取出陰道,剔除脂肪組織及系膜等，稱(chēng)量陰道的重量，計(jì)算臟器指數(shù)。 2.2.2.3 用10%福爾馬林固定，并進(jìn)行病理組織學(xué)觀察。

3　實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1　消糜栓對(duì)大鼠細(xì)菌性陰道炎動(dòng)物模型的影響

模型組細(xì)菌數(shù)明顯多于假手術(shù)組，復(fù)方甲硝唑陰道栓組（216 mg·kg-1）和消糜栓高、中劑量組（540、270 、135mg·kg-1）細(xì)菌數(shù)明顯少于模型組（P＜0.05），模型組大鼠血清中腫瘤壞死因子TNF-α水平高于假手術(shù)組(P＜0.05)，與模型組比較，消糜栓高、中、低劑量（540、270、135 mg·kg-1）能明顯降低大鼠血清中腫瘤壞死因子TNF-α水平（P＜0.001），詳見(jiàn)表1、表2。

表1　消糜栓對(duì)大鼠細(xì)菌性陰道炎動(dòng)物模型細(xì)菌數(shù)的影響（±SD；n=100）

表1　消糜栓對(duì)大鼠細(xì)菌性陰道炎動(dòng)物模型細(xì)菌數(shù)的影響（±SD；n=100）

與空白組比較##P＜0.01；與模型組比較*P＜0.05、**P＜0.01。

組別　　劑量（mg·kg-1） 細(xì)菌數(shù)（*106） 細(xì)菌數(shù)(酶標(biāo)法)假手術(shù)組　　——　1.32±0.47　0.28±0.10模型組　　——　6.35±1.28##　0.42±0.10##復(fù)方甲硝唑陰道栓組　216　1.45±0.23*　0.32±0.11消糜栓高劑量組　540　1.83±0.44*　0.27±0.06*消糜栓中劑量組　270　1.72±0.04*　0.29±0.09*消糜栓低劑量組　135　2.70±1.27*　0.30±0.16*

表1　消糜栓對(duì)大鼠細(xì)菌性陰道炎動(dòng)物模型TNF-α和Il-2的影響（±SD；n=100）

表1　消糜栓對(duì)大鼠細(xì)菌性陰道炎動(dòng)物模型TNF-α和Il-2的影響（±SD；n=100）

與空白組比較#P＜0.05；與模型組比較*P＜0.05、***P＜0.001。

組別　　劑量（mg·kg-1） TNF-α（U·ml-1）IL-2（U·ml-1）假手術(shù)組　　——　364.39±38.91　678.07±88.87模型組　　——　415.04±40.66#596.76±140.54復(fù)方甲硝唑陰道栓組　216　371.26±57.18518.18±108.67消糜栓高劑量組　540　316.49±53.97***563.71±111.15消糜栓中劑量組　270　327.61±33.15***　556.68±94.05消糜栓低劑量組　135　334.28±48.85***534.12±103.99

3.2　消糜栓對(duì)苯酚膠漿所致大鼠陰道炎的影響

3.2.1模型組大鼠陰道體指數(shù)高于空白組(P＜0.01)，模型組大鼠血清中白細(xì)胞介素Il-1水平高于空白組(P＜0.05)，模型組大鼠血清中腫瘤壞死因子TNF-α與空白組無(wú)差異。與模型組比較，消糜栓高、中劑量（540、270、135 mg·kg-1）能明顯降低大鼠血清中白細(xì)胞介素Il-1水平（P＜0.001、P＜0.01、P＜0.05）。，詳見(jiàn)表 3。

表3　消糜栓對(duì)苯酚膠漿所致大鼠陰道炎的影響（±SD；n=100）

表3　消糜栓對(duì)苯酚膠漿所致大鼠陰道炎的影響（±SD；n=100）

與空白組比較 ##P＜0.01；與模型組比較 *P＜0.05、**P＜0.01、***P＜0.001。

（×10-3）　IL-1（U·ml-1）　TNF-α（U·ml-1）空白組　　—　1.55±0.7　1.48±0.09　16.66±1.48模型組　　—　2.43±0.37##1.61±0.14#16.74±2.00雙唑泰栓組　135　1.94±0.28　1.57±0.31　17.20±2.34組別　　劑量（mg·kg-1）陰道體指數(shù)消糜栓高劑量組　540　1.89±0.42　1.36±0.08***18.32±1.60消糜栓中劑量組　270　1.93±0.38　1.39±0.16**17.57±1.98消糜栓低劑量組　135　2.86±0.24　1.44±0.15*17.42±2.08

3.2.2實(shí)驗(yàn)各組組織學(xué)觀察結(jié)果顯示，空白組、雙唑泰栓組、消糜栓高、中、低劑量組均表現(xiàn)為上皮組織結(jié)構(gòu)正常，個(gè)別病例偶見(jiàn)少量炎細(xì)胞浸潤(rùn)，毛細(xì)血管增生，但均未見(jiàn)明顯異常。模型組均表現(xiàn)出細(xì)胞輕微不典型增生改變。雙唑泰組、消糜栓高、中、低劑量組均對(duì)其有治療作用，見(jiàn)圖1-6。

4　討論

女性生殖道感染是婦女的常見(jiàn)病和多發(fā)病，其病原菌既有厭氧菌、需氧菌、霉菌，又有陰道滴蟲(chóng)。致病者往往有兩種以上病原體混合感染。消糜栓主要成分含人參莖葉皂苷、紫草、黃柏、枯礬、兒茶、苦參、冰片。

本中藥復(fù)方重在于炎性的研究，一般炎性病理檢查可以見(jiàn)到病變處有大量的炎細(xì)胞浸潤(rùn)及炎性充血，水腫，甚至出現(xiàn)粘膜潰瘍[4-5]查閱大量的文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)，用細(xì)菌感染和25%的苯酚膠漿致陰道炎，宮頸炎的模型中陰道，宮頸組織病理檢查都會(huì)出現(xiàn)上述的變化[6]。本文選用簡(jiǎn)單易行，重復(fù)性好，成功率高的陰道常見(jiàn)治病菌加德納桿菌所致的細(xì)菌性陰道炎模型和25%的苯酚膠漿造模進(jìn)行研究。中草藥治療婦科疾病的優(yōu)勢(shì)在于調(diào)整機(jī)體的免疫功能[7-9]，調(diào)節(jié)陰道菌群。西藥抗菌效果好，但在殺滅致病菌的同時(shí)也破壞了陰道的正常菌群，因此易復(fù)發(fā)。本研究中，探討了消糜栓治療非特異性陰道炎的機(jī)制，其中體內(nèi)抑菌試驗(yàn)中，消糜栓可顯著降低腫瘤壞死因子TNF-α水平，提示消糜栓可能具有提高機(jī)體免疫功能的作用。在對(duì)苯酚膠漿所致大鼠陰道炎的試驗(yàn)中，消糜栓顯示出對(duì)陰道炎所致陰道不典型增生具有治療作用，可能與可降低炎性因子白細(xì)胞介素Il-2有關(guān)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)了消糜栓對(duì)非特異性陰道炎具有治療作用。這為消糜栓進(jìn)一步的研究提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)，并證明了其具有一定的實(shí)用價(jià)值。

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