分析篩查新生兒干血斑β地中海貧血的方法及效果

賈波

253000德州市婦幼保健院(山東)

分析篩查新生兒干血斑β地中海貧血的方法及效果

賈波

253000德州市婦幼保健院(山東)

目的：探討全自動(dòng)毛細(xì)管微量血紅蛋白電泳技術(shù)在新生兒β地中海貧血篩查中的應(yīng)用價(jià)值。方法：收治新生兒145 902例，采用Sebia全自動(dòng)毛細(xì)管電泳儀進(jìn)行血紅蛋白電泳。對(duì)95 058例標(biāo)本以HbA界值法讀出β地中海貧血篩查結(jié)果，對(duì)50 844例標(biāo)本根據(jù)HbA值結(jié)合HbA2/HbA比值讀出β地中海貧血篩選結(jié)果。隨機(jī)選取598份結(jié)果判讀β地中海貧血篩選結(jié)果，同時(shí)基因檢測(cè)為β地中海貧血金標(biāo)準(zhǔn)。結(jié)果：HbA界值法β地中海貧血符合率45.2%、假陽(yáng)性率54.8%；綜合分析法β地中海貧血符合率73.5%，假陽(yáng)性率26.5%。HbA與綜合分析敏感度與特異度分別54.54%、90.90%和97.57%、99.30%。綜合分析法在陽(yáng)性預(yù)測(cè)值與篩選準(zhǔn)確性等方面高于HbA界值法。結(jié)論：綜合分析法在篩選新生兒β地中海貧血，判斷電泳結(jié)果上靈敏度與精確度等較高。

新生兒；干血斑；β地中海貧血；毛細(xì)血管電泳

β地中海貧血是受β珠蛋白異常引起的，目前國(guó)內(nèi)外已經(jīng)報(bào)道了很多與新生兒β地中海貧血相關(guān)的文章，但是篩選與工作模式不成熟。本次主要了解篩選新生兒干血斑β地中海貧血的方法及結(jié)果，現(xiàn)報(bào)告如下。

資料與方法

2014年4月-2015年4月對(duì)某市醫(yī)療機(jī)構(gòu)收治的145 902例新生兒血斑標(biāo)本進(jìn)行采集，并進(jìn)行電泳篩選，了解陽(yáng)性者基因診斷情況。

分組：將2014年4月-2015年4月采集的95 058例樣本使用HbA界值法篩選β地中海貧血；其余50 844例樣本使用綜合分析法篩選β地中海貧血；并選取2016年4月隨機(jī)采集的598例樣本同時(shí)使用兩種方法篩選β地中海貧血，檢測(cè)血斑標(biāo)本。

儀器與試劑：①分析血紅蛋白：使用Sebia公司的全自動(dòng)毛細(xì)管電泳儀并配有血紅蛋白電泳試劑盒[1]。②檢測(cè)基因：基因擴(kuò)增儀、分子雜交儀與β地中海貧血基因診斷盒由廣東凱普生物技術(shù)有限公司提供。

新生兒干血斑血紅蛋白電泳：①血紅蛋白電泳：從濾紙干血斑下打下直徑為4.83mm2的血斑片，將其放置于50μL的蒸餾水測(cè)試杯中，放置一夜，并將其導(dǎo)入全自動(dòng)毛細(xì)管電泳儀中檢測(cè)，按照規(guī)范要求操作。②結(jié)合全自動(dòng)毛細(xì)管電泳儀報(bào)告結(jié)果對(duì)樣本HbA與HbA2含量進(jìn)行測(cè)定[2]。

判讀β地中海貧血陽(yáng)性：①綜合分析法：參照血紅蛋白中含有的HbA與HbA2含量及HbA2與HbA比值篩選β地中海貧血陽(yáng)性。②HbA界值法：結(jié)合HbA了解β地中海貧血并篩選陽(yáng)性，如果HbA≤9.5%或者出現(xiàn)HbE則判斷為β陽(yáng)性，HbA＜2%時(shí)，為疑似β地中海貧血[3]。

基因檢測(cè)：使用聚合酶鏈反應(yīng)-反向點(diǎn)雜交技術(shù)對(duì)β珠蛋白技術(shù)突變進(jìn)行分析，主要對(duì)突變位點(diǎn)的41-42、IVS-Ⅱ-653、βE、71-72、-28、14-15、CAP、Int、17、IVS1-1、27/28、-30。

統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：借助統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS 19.0分析匯總上述匯數(shù)據(jù)，[n(%)]表示計(jì)數(shù)資料，計(jì)量資料采取(±s)表示，t檢驗(yàn)組間對(duì)比率；P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié)果

綜合分析法與HbA界值法篩選陽(yáng)性基因確診符合率。使用HbA界值法篩選的95 058例中，陽(yáng)性3 940例，陽(yáng)性率4.1%，召回篩選陽(yáng)性1 580例中，β地中海貧血確診715例，符合率45.2%，假陽(yáng)性率54.8%，召回14例HvE為輕型β地中海貧血；召回37例中，中重型β地中海貧血中34例檢測(cè)為雙重雜合子與地中海貧血純合子。

以綜合分析法篩選的50 854例中，陽(yáng)性2 031例，陽(yáng)性率4.0%，召回1 264中診斷出β地中海貧血929例，符合率73.5%，假陽(yáng)性率26.5。14例篩查疑為中重型β地中海貧血的13例診斷為純合子或雙重雜合子。

HbA界值法與綜合分析法的對(duì)比研究。從上述分析可知，兩組在陽(yáng)性率上差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但綜合分析法高于HbA界限法。本次使用兩種方法對(duì)598例標(biāo)本進(jìn)行基因檢測(cè)和篩選，檢測(cè)出陽(yáng)性577例，β地中海貧血21例，見(jiàn)表1。

兩組診斷能力，見(jiàn)表2。

討論

正常新生兒HbF控制在70%左右，HbA占據(jù)30%，HBA2較少，一般＜1%。隨著醫(yī)學(xué)技術(shù)的發(fā)展，分析新生兒干血斑標(biāo)本的全自動(dòng)毛細(xì)管蛋白電泳技術(shù)得到快速發(fā)展，可以借助高壓電分離血紅蛋白組分。該項(xiàng)技術(shù)檢測(cè)血紅蛋白較敏感，而且較安全，可以檢測(cè)出多種血紅蛋白組分，已經(jīng)成為目前臨床上篩選新生兒地中海貧血的有效方式。

目前國(guó)內(nèi)外都已經(jīng)將HbA＜9.5%作為篩選β地中海貧血的初始方案，篩選出的陽(yáng)性率稍高于分子流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果。將HbA＜2.5%作為閥值發(fā)現(xiàn)，篩查的β地中海貧血新生兒符合率較高，可以作為新生兒重型β地中海貧血篩選指標(biāo)。相關(guān)研究使用瓊脂糖電泳對(duì)臍帶血含有的HbA進(jìn)行分析，得到的β地中海貧血確診符合率為84.2%與78.3%，此結(jié)果與使用的電泳法具有很大差異。而且臍血采集時(shí)間也會(huì)對(duì)標(biāo)本造成影響，一般臍血出生時(shí)采集，干血斑標(biāo)本在出生后3～6 d采集。由于HbA界值法采集的陽(yáng)性率較高，所以復(fù)診與召回較多，給檢查者造成了很大的心理負(fù)擔(dān)，必須對(duì)分析方法進(jìn)行改善。

表1 HbA界值法與綜合分析法對(duì)598例標(biāo)本的篩選(n)

表2 HbA界值法與綜合分析法診斷能力比較

綜合分析法是在HbA界值基礎(chǔ)上根據(jù)HbA2含量及兩者比值所形成的，可以對(duì)新生兒β地中海貧血毛細(xì)血紅蛋白電泳結(jié)果進(jìn)行分析。由于珠蛋白一般在妊娠后階段合成，因此新生兒血液中難免會(huì)出現(xiàn)少量的HbA2，β地中海貧血的代償性容易引起HbA2增加或提前出現(xiàn)。本次使用全自動(dòng)毛細(xì)管血紅蛋白電泳對(duì)新生兒干血斑標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)的HbA2較高，給臨床分析創(chuàng)建了條件。試驗(yàn)結(jié)果表明，綜合分析法總確診率高于HbA界值法。

由于本次研究所選擇的綜合分析與HbA界值標(biāo)本來(lái)源不一致，因此為了深入探討兩種方法在篩選β地中海貧血上的效果，本次應(yīng)用兩種方法對(duì)598例樣本進(jìn)行了篩選，并完成了基因檢測(cè)。從檢測(cè)結(jié)果來(lái)看，綜合分析法在敏感度、篩選準(zhǔn)確性及陽(yáng)性預(yù)測(cè)等方面均優(yōu)于HbA界值法，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，而且綜合分析法的陰性預(yù)測(cè)與特異性也高于HbA界值法。

綜上所述，新生兒干血斑采用的全自動(dòng)毛細(xì)管血紅蛋白電泳具有操作簡(jiǎn)單、方便等特點(diǎn)，主要測(cè)定HbA、HbA2與HbA2/HbA比值，均可提高篩查β地中海貧血的精確性，而且實(shí)際操作較敏感，值得臨床推廣。

[1]蔡稔,梁聽(tīng),潘莉珍.血液學(xué)指標(biāo)在育齡人群地中海貧血篩查中的診斷價(jià)值[J].中國(guó)優(yōu)生與遺傳雜志,2014,7(9):67-68.

[2]黃爍丹,張惠琴．廣東省梅州地區(qū)地中海貧血的分子流行病學(xué)調(diào)查[J].熱帶醫(yī)學(xué)雜志,2015,1(6):234-235.

[3]羅秋月.臍血毛細(xì)管電泳法篩查新生兒地中海貧血的應(yīng)用價(jià)值[J].廣州醫(yī)科大學(xué), 2014,5(4):67-69.

Method and effect o f screening for neonatal d ry blood spot beta thalassem ia

Jia Bo
TheMaternaland Child Health HospitalofDezhou City(Shangdong Province)253000

Objective:To explore the the application value of fully automatic capillary trace hemoglobin electrophoresis of screening for neonatal beta thalassemia.Methods:145902 neonates were selected,they were given hemoglobin electrophoresis using Sebia fully automatic capillary electrophoresis apparatus.Beta thalassemia screening results of 95058 caseswere identified by HbA boundary valuemethod,beta thalassemia screening results of 50844 cases were identified by HbA binding HbA2/HbA ratio.598 resultswere randomly selected to interpret the beta screening results,genetic testingwas the gold standard for diagnosis of beta thalassemia.Results:In HbA boundary valuemethod,the consistent rate was 45.2%,the false positive rate was 54.8%.In comprehensive analysismethod,the consistent ratewas 73.5%,the false positive ratewas 26.5%.The sensitivity and specificity of HbA and comprehensive analysis were 54.54%,90.90%and 97.57%,99.30%respectively.In the comprehensive analysis,the positive predictive value and the screening accuracy were higher than the HbA boundary value method.Conclusion:In the screening of neonatal beta thalassemia,determining the electrophoresis results,the sensitivity and accuracy of the comprehensive analysismethodwerehigher.

Newborn;Dry blood spot;Beta thalassemia;Capillary electrophoresis

10.3969/j.issn.1007-614x.2017.7.75