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    蔬菜農(nóng)殘快速檢測(cè)工作中的體會(huì)

    2017-03-31 01:12:35李愛國(guó)
    現(xiàn)代農(nóng)村科技 2017年1期
    關(guān)鍵詞:任丘市抑制率光度

    李愛國(guó)

    (河北省任丘市農(nóng)業(yè)局 河北 任丘 062550)

    蔬菜農(nóng)殘快速檢測(cè)工作中的體會(huì)

    李愛國(guó)

    (河北省任丘市農(nóng)業(yè)局 河北 任丘 062550)

    “民以食為天,食以安為先”,隨著人們生活水平的提高,食品安全問題成為人們?nèi)找骊P(guān)注的焦點(diǎn)。發(fā)展無公害蔬菜,加強(qiáng)對(duì)蔬菜農(nóng)藥殘留的快速檢測(cè),已成為十分必要的監(jiān)管措施。近幾年來,基層農(nóng)產(chǎn)品檢測(cè)部門和許多蔬菜產(chǎn)銷企業(yè)都建立了檢測(cè)室,配備了速測(cè)儀。隨著食品安全縣的創(chuàng)建,2016年,任丘市農(nóng)業(yè)局的九個(gè)基層站、任丘市豐麗園蔬菜科技示范園區(qū)都建立了檢測(cè)室,配備了速測(cè)儀。提高蔬菜農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)技術(shù),成為各基層農(nóng)產(chǎn)品檢測(cè)部門和許多蔬菜產(chǎn)銷企業(yè)的重要任務(wù)。

    1 蔬菜農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)技術(shù)

    目前,常用的蔬菜農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)技術(shù)是一種生化檢測(cè)法,生化檢測(cè)法中又以酶抑制率法應(yīng)用最為廣泛。酶抑制率法的原理是在一定條件下,有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥對(duì)乙酰膽堿酯酶正常功能有抑制作用,其抑制率與農(nóng)藥的濃度呈正相關(guān)。正常情況下,酶催化神經(jīng)傳導(dǎo)代謝產(chǎn)物(乙酰膽堿)水解,其水解產(chǎn)物與顯色劑反應(yīng),產(chǎn)生黃色物質(zhì),用分光光度計(jì)在412 nm處測(cè)定吸光度隨時(shí)間的變化值,計(jì)算出抑制率,通過抑制率可以判斷出樣品中是否有高劑量有機(jī)磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥的存在。該方法具有快速、方便、簡(jiǎn)單、成本較低等優(yōu)點(diǎn),適用于現(xiàn)場(chǎng)定性和半定量測(cè)定,特別適合各級(jí)農(nóng)產(chǎn)品檢測(cè)部門及蔬菜產(chǎn)銷部門開展快速檢測(cè)工作。但使用該方法檢測(cè)蔬菜農(nóng)藥殘留時(shí)受環(huán)境、提取條件、反應(yīng)溫度、操作等因素影響嚴(yán)重,存在檢測(cè)結(jié)果誤差大,重現(xiàn)性不好等問題。

    2 近幾年的實(shí)際工作體會(huì)

    2.1 膽堿酯酶的最高活性溫度為37℃,當(dāng)溫度條件低于37℃時(shí),酶的反應(yīng)速度隨之放慢,加入酶和顯色劑后,放置反應(yīng)的時(shí)間應(yīng)相對(duì)延長(zhǎng),延長(zhǎng)時(shí)間的確定,應(yīng)以膽堿酯酶空白對(duì)照測(cè)試,3 min的吸光度變化值ΔA應(yīng)在要求范圍之內(nèi),即可往下操作。注意樣品的放置時(shí)間與空白對(duì)照溶液的放置時(shí)間要一致。對(duì)照3 min吸光度變化小的原因:一是酶的活性不夠,二是溫度太低。根據(jù)經(jīng)驗(yàn),檢測(cè)室溫度在20℃~24℃時(shí),放置反應(yīng)15 min,25℃以上放置反應(yīng)10 min,當(dāng)室溫低于20℃時(shí),要放入37℃~38℃的水浴鍋中預(yù)熱10 min。

    2.2 速測(cè)儀要放在干燥的地方,冬季室溫底,濕度大時(shí),儀器的光路系統(tǒng)易受影響,平時(shí)可在樣品室放一些干燥劑。使用前必須開機(jī)預(yù)熱10 min,尤其寒冷的冬季室溫較低時(shí)要適當(dāng)延長(zhǎng)預(yù)熱時(shí)間,使機(jī)器穩(wěn)定后再進(jìn)行測(cè)量。要經(jīng)常調(diào)零、調(diào)百位進(jìn)行校準(zhǔn)以確保儀器測(cè)試的準(zhǔn)確度。

    2.3 手拿比色杯時(shí),要拿毛面,否則易影響透光度。比色杯一定要潔凈,可定期用乙醇浸泡清洗。

    2.4 移液槍要貼上標(biāo)簽,專槍專用,避免交叉使用造成試劑污染;試劑從試劑瓶吸出后,不能再放回瓶中,堅(jiān)持只出不進(jìn)的原則,防止整瓶試劑污染。使用移液槍吸試劑時(shí)要平穩(wěn),不要過快,否則易導(dǎo)致所加試劑量不準(zhǔn)。

    2.5 要嚴(yán)格按照說明書來保存、配制試劑。膽堿酯酶易失活,對(duì)于酶抑制率法來說,又是最為關(guān)鍵的因素,其質(zhì)量技術(shù)水平?jīng)Q定了檢測(cè)的靈敏度、穩(wěn)定性和可靠性。酶主要有兩種類型:一種是固態(tài)酶,一種是改良的液態(tài)酶。固態(tài)酶更穩(wěn)定,保存性更好,需冷凍保存,使用前需用緩沖液溶解,酶液反復(fù)解凍,酶的活性下降,反復(fù)解凍不超過2次,解凍后的酶液最好在7 d內(nèi)用完,注意用完后應(yīng)及時(shí)放回冰箱。改良的液態(tài)酶可在0℃~5℃下冷藏保存,不需冷凍,從冰箱拿出后,恢復(fù)到室溫?fù)u勻后即可直接使用,相對(duì)來說使用比較方便。

    2.6 蔥、蒜、韭菜、蘿卜、蘑菇、番茄等蔬菜的汁液中含有對(duì)酶有影響的次生物質(zhì),容易產(chǎn)生假陽(yáng)性。處理這類樣品時(shí),可采取整株(大塊蔬菜)浸提,對(duì)于葉綠素含量較高的樣品也可采取類似的方法。若浸提液較混濁時(shí)可進(jìn)行過濾。提取時(shí)振蕩2 min,靜置3 ~5 min,時(shí)間不能過短,也不能過長(zhǎng),過短農(nóng)藥殘毒提取不完全,過長(zhǎng)蔬菜中的汁液被提取的過多,影響吸光度。

    2.7 最后一般操作要快,對(duì)照、待測(cè)樣品加底物后應(yīng)馬上搖勻,倒入比色杯,立即上機(jī)測(cè)試,否則上機(jī)前酶和底物發(fā)生反應(yīng),上機(jī)后不到3 min就反應(yīng)完畢,會(huì)影響數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。

    2.8 在檢測(cè)過程更換試劑或重新設(shè)定測(cè)量時(shí)間,一定要重新做對(duì)照,確保對(duì)照檢測(cè)值正確。

    總之,檢測(cè)人員要熟悉酶抑制率法的原理、操作步驟、速測(cè)儀、移液槍的使用,嚴(yán)格按操作規(guī)程操作,才能減小誤差,提高數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確度。

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