HPLC測(cè)定雙黃連口服液中連翹苷的含量

劉愛(ài)華

哈藥集團(tuán)三精制藥有限公司 150000

HPLC測(cè)定雙黃連口服液中連翹苷的含量

劉愛(ài)華

哈藥集團(tuán)三精制藥有限公司 150000

目的：通過(guò) HPLC的方法來(lái)對(duì)雙黃連口服液的連翹苷成分進(jìn)行準(zhǔn)確地測(cè)定。方法：使用 HPLC法進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果：在0.187ˉ0.876μg的范圍內(nèi)，連翹苷的現(xiàn)行關(guān)系比較好，平均回收率能夠達(dá)到97.8%，RSD=1.6%。結(jié)論：HPLC方法用于檢測(cè)雙黃連口服液的連翹苷的成分的數(shù)值比較準(zhǔn)確，操作方法相對(duì)比較簡(jiǎn)單，是一種可行的檢測(cè)方式。

雙黃連口服液；連翹苷；HPLC

雙黃連這種藥品是一種極為常見(jiàn)的藥品，其藥品狀態(tài)類型比較豐富，既有口服液又有膠囊，其中口服液在我國(guó)的藥品市場(chǎng)中存在的時(shí)間比較長(zhǎng)，口服液中含有黃岑、金銀花以及連翹等中藥藥材，能夠有效地清熱解毒，緩解感冒，并且有較為明顯的治療效果，屬于一種我國(guó)的常用中成藥。為了保證雙黃連口服液的藥品質(zhì)量，本文對(duì)其成分中的連翹苷進(jìn)行測(cè)定，現(xiàn)有實(shí)驗(yàn)過(guò)程如下：

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

高速液相色譜儀、紫外線檢測(cè)器、數(shù)據(jù)處理器、色譜柱、雙黃連口服液、連翹苷的對(duì)照藥品，將甲醇作為色譜純，實(shí)驗(yàn)用水均為重度蒸餾水，其他的所有實(shí)驗(yàn)中用到的試劑作為分析純。

1.2 方法

在進(jìn)行色譜系統(tǒng)的條件以及適用性的檢驗(yàn)時(shí)，需要用鍵合性的硅膠作為實(shí)驗(yàn)的填充劑，流動(dòng)相需要乙腈與水，其中乙腈占總體流動(dòng)相的四分之一，水占總體流動(dòng)相的四分之三，流速為每分鐘 1毫升，進(jìn)行檢測(cè)的波長(zhǎng)為276nm，從理論上來(lái)看連翹苷的處于波峰處的數(shù)值應(yīng)當(dāng)高于或等于3000。

進(jìn)行實(shí)驗(yàn)的對(duì)照品的制備時(shí)，需要將已經(jīng)準(zhǔn)備好的連翹苷稱取15毫克，稱取方法要保證準(zhǔn)確性，首先將試樣的連翹苷放置在五氧化二磷的真空環(huán)境下進(jìn)行干燥，干燥的時(shí)間為一天，采取經(jīng)歸法對(duì)其含量進(jìn)行測(cè)定，測(cè)出含量為 97.53%，將這些連翹苷放置在容量為150毫升的棕色容量瓶中，再適當(dāng)?shù)丶尤霛舛葹?0%的甲醇，使用超聲波的方式對(duì)其進(jìn)行溶解，溶解后再放入到較冷的環(huán)境中，不斷地對(duì)其進(jìn)行加水稀釋，直到達(dá)到刻度，再將棕色容量瓶搖晃均勻，將這個(gè)藥品作為對(duì)照性的藥品。

進(jìn)行實(shí)驗(yàn)的供試品制備時(shí)，需要通過(guò)精密吸取的方法取得雙黃連口服液 5毫升，通過(guò)實(shí)驗(yàn)室的蒸發(fā)作用，使液體便感，再將其放置在中性的氧化鋁的實(shí)驗(yàn)柱上，使用濃度為 70%的乙醇幫助口服液進(jìn)行洗脫，再對(duì)洗脫后的溶液進(jìn)行收集，使其逐漸濃縮，直到變干。洗脫后得到的殘?jiān)€需加入濃度為 50%的甲醇進(jìn)行溶解，溶解完成后將混合溶液轉(zhuǎn)移到容量為10毫升的實(shí)驗(yàn)量瓶中，不斷對(duì)其進(jìn)行稀釋并搖勻，通過(guò)微孔型的濾膜進(jìn)行過(guò)濾，就得到了可以進(jìn)行測(cè)定成分的供試品。

測(cè)定雙黃連口服液的連翹苷的含量時(shí)，要采取精密吸取的吸取方式吸取10μl供試品溶液以及對(duì)照藥品，將其加入到高速液相色譜儀，通過(guò)峰面積的方法以及外標(biāo)法計(jì)算其含量，進(jìn)行 3批數(shù)據(jù)的測(cè)定，多次試驗(yàn)可以保證其測(cè)量結(jié)果相對(duì)比較穩(wěn)定。

精密吸取“1.2.2”項(xiàng)下對(duì)照品溶液5、10、15、20、25 ml，分別置25 m1量瓶中，加50%甲醇，振搖，用50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜（0.45μm）濾過(guò)，依次吸取10μl進(jìn)樣。每一濃度進(jìn)樣2次，求峰面積平均值，以連翹苷峰面積平均值為縱坐標(biāo)。

取處方中除連翹以外的其他藥材，按本品制法制得連翹陰性樣品，然后按“1.2.3”項(xiàng)下方法制得陰性供試溶液，進(jìn)樣測(cè)定。

精密吸取連翹苷對(duì)照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣6次，每次10μl，測(cè)定峰面積值。

取同一批號(hào)樣品5份，分別按1.2.4”項(xiàng)下方法測(cè)定樣品中連翹苷。加樣回收率試驗(yàn) 分別精密吸取已知含量的樣品5份，每份3 ml，分別加入“1.2.2”項(xiàng)下對(duì)照品溶液5 ml，按“1.2.4”項(xiàng)下方法測(cè)定含量，再計(jì)算加樣回收率。

2 結(jié)果

通過(guò)測(cè)定供試品以及對(duì)照品的連翹苷含量后得到的數(shù)值分別為0.158、0.145/0.157mg。m l-1。

連翹苷進(jìn)樣量（μg）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，線性回歸得回歸方程：Y= 7.370×106X+ 5.259× 105（r= 0.9991）。結(jié)果表明，連翹苷在0.187～ 0.876μg范圍內(nèi)的線性關(guān)系良好。

RSD=1.20%（n= 6）。表明儀器精密度良好。平均含量為 0.155 mg·ml- 1，RSD= 1.77%，表明分析方法精密度良好。

3 討論

HPLC法測(cè)定雙黃連口服液中連翹苷的含量，簡(jiǎn)便、快速、重復(fù)性好，可供修訂雙黃連口服液質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)時(shí)參考。當(dāng)制備供試溶液時(shí)，采用氧化鋁柱進(jìn)行供試品的前處理，能有效地除去干擾雜質(zhì)；氧化鋁柱的凈化回收率均超過(guò) 98.0%。說(shuō)明用氧化鋁進(jìn)行前處理效果較好。

實(shí)驗(yàn)表明待測(cè)成分的飽和流出體積主要受溶液極性的影響，而與其濃度無(wú)明顯相關(guān)性，因?yàn)槲⒅滔噍腿∠喈?dāng)于一個(gè)連續(xù)進(jìn)樣的過(guò)程。曾將雙黃連口服液稀釋為含 30%的甲醇的溶液作流出曲線，結(jié)果連翹苷在近20mL時(shí)才達(dá)到流出平衡，改為含40%的甲醇較為合適，有利于連翹苷的平衡流出和弱極性雜質(zhì)的除去。將供試品濃縮再用甲醇提取或用正丁醇萃取處理制備的色譜圖與本法所得色譜圖比較，雖在前端均較干凈，但在此色譜條件下皆對(duì)連翹苷的分離無(wú)影響，即 RP-SPE法制備供試品溶液較簡(jiǎn)便實(shí)用。3.3 因無(wú)本品陰性對(duì)照樣品，缺其陰性對(duì)照?qǐng)D譜；用 BECKMAN高效液相色譜儀及其 508型二極管陣列檢測(cè)器測(cè)定對(duì)照品溶液和供試品溶液的連翹苷色譜峰，結(jié)果在波長(zhǎng) 200～ 235nm范圍內(nèi)兩者的光譜相似性為0.9967，表明本法所分離的連翹苷色譜峰為單一峰，無(wú)其它雜質(zhì)干擾。3.4 從測(cè)定結(jié)果來(lái)看，在不同品牌樣品之間和同一品牌的不同批號(hào)樣品之間，連翹苷的含量差異較大，這可能與藥材質(zhì)量不穩(wěn)定有關(guān)，但均遠(yuǎn)小于按藥典中規(guī)定連翹含連翹苷的最低含量 0.15%與雙黃連口服液處方含連翹 750（g·（1000mL）- 1）推算的最低含量 11.25（mg·支- 1），因而有必要在質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中增加對(duì)連翹苷含量的控制。

在流動(dòng)相為甲醇-水（40∶60）時(shí)，黃芩苷無(wú)可檢測(cè)的色譜峰，但在多次進(jìn)樣后會(huì)抬高基線，影響連翹苷的測(cè)定，還會(huì)使柱壓不斷增加；將流動(dòng)相改為甲醇-水-冰醋酸（40∶ 60∶ 1）后，連翹苷色譜峰提前，其后出現(xiàn)黃芩苷色譜峰，表明流動(dòng)相中加入冰醋酸可避免黃岑苷等成分在分析柱上填積而使柱壓升高和造成基線不穩(wěn)。

雙黃連口服液是一種能夠有效治療外部感冒傷風(fēng)引起的頭疼、腦熱等癥狀的藥品，口服液比膠囊更加容易進(jìn)行吞咽，因此也受到了我國(guó)患者的廣泛歡迎，一般雙黃連口服液能夠緩解咳嗽、發(fā)熱、咽痛等病癥，并且與其他復(fù)合型的重要相比，效果更快，這要得益于其成分中的各種優(yōu)質(zhì)的中藥材，連翹苷發(fā)揮了重要的作用，連翹苷是木犀科的中藥連翹的提取物，將連翹生長(zhǎng)出的干燥果實(shí)進(jìn)行提取，就可以成功地提取到一定數(shù)量的連翹苷，一公斤的連翹可以提取出3%的連翹苷，連翹苷可以有效地發(fā)揮起解除毒素，緩解發(fā)熱，消除腫痛的藥效，因此可知雙黃連口服液中的連翹苷對(duì)其總體藥效有著較大的影響。連翹苷這種中藥材所具備的功效要遠(yuǎn)遠(yuǎn)超出雙黃連口服液本身，即使發(fā)生丹毒也可通過(guò)連翹苷進(jìn)行治療。另外連翹苷的服用方式也比較多，既可用于藥用，制成如雙黃連口服液這種藥品，也可直接用水來(lái)進(jìn)行煎制，用途十分廣泛。

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1672-5018（2017）02-019-1