阿奇霉素原料及其分散片含量測定方法之比較研究

徐麗娟

摘 要：本文對阿奇霉素原料及其分散片含量測定方法之比較研究。高效液相色譜法：固定相為安捷倫Cl8（4.6mm×250mm，5μm），0.045mol/L磷酸二氫胺溶液∶乙腈（2∶1）（用三乙胺調(diào)pH至7.35）為流動相，檢測波長為210nm，流速1.0mL·min-1，柱溫：30℃；分光光度法：采用pH6.0的磷酸鹽緩沖液作為溶劑，加入75%硫酸溶液混合，放冷至室溫后測量；檢測波長為482nm。兩種方法均可對阿奇霉素原料及其分散片含量進行測定。

關(guān)鍵詞：阿奇霉素；方法；比較

阿奇霉素為半合成的十五元環(huán)大環(huán)內(nèi)酯類抗生素。阿奇霉素化學名稱為：（2R，3S，4R，5R，8R，10R，11R，12S，13S，14R）-13-[（2，6-二脫氧-3-C-甲基-3-O-甲基-α-L-核-已吡喃糖基）氧]-2-乙基-3，4，10-三羥基-3，5，6，8，10，12，14-七甲基-11-[[3，4，6-三脫氧-3-（二甲氨基）-β-D-木-已吡喃糖基]氧]-1-氧雜-6-氮雜環(huán)十五烷-15-酮。阿奇霉素適應敏感細菌引起的鼻竇炎、中耳炎、急性支氣管炎、慢性支氣管炎急性發(fā)作；沙眼衣原體及非多種耐藥淋病奈瑟菌所致的尿道炎和宮頸炎；化膿性鏈球菌引起的急性咽炎、急性扁桃體炎；肺炎鏈球菌、流感嗜血桿菌以及肺炎支原體所致的肺炎等。本文對阿奇霉素原料及其分散片含量測定方法之比較研究。

1 儀器與試藥

美國必能信超聲波清洗機（北京星越天成科技有限公司）；CF-B數(shù)顯電熱恒溫水?。ㄉ虾＠醉嵲囼瀮x器制造有限公司）；1810-B石英自動雙重蒸餾水器（上?？德穬x器設(shè)備有限公司）；X1600四元低壓梯度液相色譜儀（南京皓而普分析設(shè)備有限公司）；Aurora-F1實驗室自動洗瓶機（杭州喜瓶者生物技術(shù)有限公司）；HWY-501A型恒溫水浴（上海昌吉地質(zhì)儀器有限公司）；FA1204CFAC型全自動內(nèi)校電子分析天平（北京同德創(chuàng)業(yè)科技有限公司）；DR5000臺式紫外可見分光光度計（廣州市怡華新電子儀器有限公司）。阿奇霉素對照品由中國藥品生物制品檢定所提供。乙腈（北京亞太龍興化工有限公司）、磷酸（南京大唐化工有限公司）、磷酸二氫鉀（北京亞太龍興化工有限公司）、冰醋酸（北京亞太龍興化工有限公司）、三乙胺（北京邁瑞達科技有限公司）、甲醇（青島市金宏鑫化工有限公司）、磷酸二氫銨（南京大唐化工有限公司）。

2 高效液相色譜法測定

2.1 色譜條件：依據(jù)查閱文獻及考查的結(jié)果，確定色譜條件如下[1-5]。色譜柱為安捷倫Cl8規(guī)格為（4.6mm×250mm，5μm）；0.045mol/L磷酸二氫胺溶液∶乙腈（2∶1）（用三乙胺調(diào)pH至7.35）為流動相；檢測波長為210nm。理論板數(shù)按阿奇霉素峰計算應不得低于2000。

2.2 供試品溶液的制備

取阿奇霉素原料及其分散片，分別精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入流動相10ml，稱定重量，超聲處理（功率250W，頻率40kHz）5分鐘，放冷，再稱定重量，用流動相補足減失的重量，搖勻，取續(xù)濾液，即得。

2.3 對照品溶液的制備

精密稱取阿奇霉素對照品約20mg，用流動相溶解并稀釋成每1ml中含1mg的溶液，作為對照溶液。

2.4 準曲線的制備

制備濃度為0.5、1、2、4、6、8、10mg·mL-1的對照品溶液，分別精密吸取10μL注入HPLC，記錄色譜圖。以峰面積積分值A(chǔ)（μg）為橫坐標，進樣量為縱坐標，繪制標準曲線，計算回歸方程。試驗表明，阿奇霉素對照品在0.5～10mg·mL-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.5 重現(xiàn)性試驗

分別稱取同批阿奇霉素原料及其分散片樣品6份，分別依照2.3項下供試品制0.79%，結(jié)果表明，此含量測定方法的重現(xiàn)性良好。

2.6 回收率試驗

采用加樣回收試驗，取已知含量的同一批供試品各6份，精密稱定，分精密添加一定量的阿奇霉素對照品，按供試品制備所述方法制備供試品溶液，測定含量（同時測定樣品含量），計算回收率。6次測定的平均回收率為99.5%，RSD為0.72%。

3 分光光度法測定

3.1 供試品溶液的制備

取阿奇霉素原料及其分散片，分別精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入乙醇10ml，稱定重量，超聲處理5分鐘，放冷，再稱定重量，用乙醇補足減失的重量，搖勻，取續(xù)濾液，即得。

3.2 對照品溶液的制備

精密稱取阿奇霉素對照品約20mg，用乙醇溶解并稀釋成每1ml中含2mg的溶液，作為對照溶液。

3.3 檢測波長的選擇

取對照品溶液，加pH6.0的磷酸鹽緩沖液稀釋50倍，精密量取5mL，精密加入75%的硫酸溶液5mL，振搖混勻，放置30min，冷卻至室溫。以溶出介質(zhì)為空白，在190nm～700nm范圍內(nèi)進行掃描，結(jié)果阿奇霉素在482nm處有最大吸收，且輔料在此波長處無吸收，故選擇482nm作為測定波長。

3.4 線性關(guān)系試驗

取對照品溶液，加pH6.0的磷酸鹽緩沖液分別稀釋成阿奇霉素濃度分別為5μg·mL-1、10μg·mL-1、20μg·mL-1、40μg·mL-1、60μg·mL-1、80μg·mL-1，精密量取5mL，精密加入75%的硫酸溶液5mL，振搖混勻，放置30min，冷卻至室溫。以溶出介質(zhì)為空白，分別在482nm處測定其吸收度，以濃度（C）對吸收度（A）進行線性回歸，計算回歸方程。結(jié)果表明阿奇霉素的濃度在5～80μg·mL-1范圍內(nèi)與吸收度呈良好線性關(guān)系。

3.5 樣品含量測定

取供試品溶液，用pH6.0的磷酸鹽緩沖液稀釋50倍，搖勻，濾過，精密量取5ml，精密加入75%的硫酸溶液5mL，振搖混勻，放置30分鐘，冷卻至室溫。以溶出介質(zhì)為空白，分別在482nm處測定其吸收度，計算含量。

3.6 重現(xiàn)性試驗

取同批樣品5份，按樣品含量測定項下方法測定，結(jié)果含量的RSD為0.86%，表明方法重現(xiàn)性較好。

3.7 回收率的測定

精密稱取阿奇霉素標準品適量，按阿奇霉素分散片處方比例加入其他輔料，照“樣品含量測定”項下測定阿奇霉素含量，計算回收率。6次測定的平均回收率為99.3%，RSD為0.93%。

4 結(jié)果

兩種方法均可對阿奇霉素原料及其分散片含量進行測定。

參考文獻

[1]王明娟，許明哲，胡昌勤，王立新，王晨.HPLC法分析阿奇霉素及各類注射劑中有關(guān)物質(zhì)的含量[J].中國抗生素雜志，2008（12）.

[2]姜建國，張西茹，楊梁，吳如金.高效液相色譜法分離測定阿奇霉素及其相關(guān)物質(zhì)[J].中國現(xiàn)代應用藥學，2003（05）.

[3]紀標，王東凱，薛梅妍，李志強，徐颯.HPLC法測定注射用門冬氨酸阿奇霉素的含量和有關(guān)物質(zhì)[J].中國抗生素雜志，2005（06）.

[4]耿新輝，陳方劍，陳建國，于晶晶，馬濤，李見春.阿奇霉素分散片人體生物等效性評價[J].蚌埠醫(yī)學院學報，2008（01）.

[5]李海英，陳悅.高效液相色譜電化學檢測法在硫酸阿奇霉素含量測定和有關(guān)物質(zhì)概況分析上的應用[J].西北藥學雜志，2003（04）.