順鉑致兔急性腎損傷的序貫觀察

喬 實，賈化平，梁會澤，李 華，張明明，宋文靜

(1．安徽醫(yī)科大學解放軍306臨床學院超聲醫(yī)學科，北京 100101；2．中國人民解放軍306醫(yī)院超聲醫(yī)學科，北京 100101)

研究報告

順鉑致兔急性腎損傷的序貫觀察

喬 實1，賈化平2，梁會澤1，李 華2，張明明2，宋文靜2

(1．安徽醫(yī)科大學解放軍306臨床學院超聲醫(yī)學科，北京 100101；2．中國人民解放軍306醫(yī)院超聲醫(yī)學科，北京 100101)

目的 探討單次靜脈注射順鉑致兔急性腎損傷(AKI)的病程進展規(guī)律。方法 雄性新西蘭兔40只，隨機分為5組，每組8只。經(jīng)耳緣靜脈單次注射順鉑(5 mg/kg)制作急性腎損傷模型，按照觀察時間點分為注射順鉑后6 h組(T6)、12 h組(T12)，24 h組(T24)，36 h組(T36)及48 h組(T48)，分別于注射前及注射后相應(yīng)時間點檢測兔靜脈血血尿素氮(BUN)及血肌酐(SCr)值。應(yīng)用SPSS 22.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析，P<0.05為差異具有統(tǒng)計學意義。在各實驗節(jié)點，處死實驗兔，獲取各組兔腎組織標本，常規(guī)石蠟切片，HE染色光鏡下觀察。結(jié)果 與注射前相比，注射順鉑后各組BUN及SCr值均明顯升高，建模24 h以后各組所有實驗兔達到急性腎損傷標準，損傷呈進行性加重。HE染色光鏡下觀察以T48組變化更明顯。結(jié)論 單次靜脈注射順鉑可引起兔急性腎功能損害，48 h內(nèi)呈進行性加重。

兔；腎損傷；順鉑；生化指標

順鉑(CDDP)是目前臨床上常用的腫瘤化療藥物之一，對多種惡性腫瘤具有良好的治療效果，其療效與劑量成正比，但順鉑具有腎毒性、耳毒性，、胃腸道毒性及致吐等副作用，其中以腎毒性最為常見，其損傷程度亦與劑量成正比[1]。順鉑腎毒性機制尚未完全闡明，據(jù)統(tǒng)計，約有3成的患者在使用順鉑后會出現(xiàn)腎功能損傷，其中大部分為急性發(fā)病，具有起病急、發(fā)展快的特點[2]。腎毒性是限制順鉑使用劑量的主要因素，了解順鉑致急性腎損傷的進展規(guī)律，是進行相關(guān)研究的基礎(chǔ)。目前，臨床上仍以血尿素氮(BUN)及血肌酐(SCr)作為順鉑致腎功能損傷監(jiān)測指標[3]，本研究對順鉑致兔急性腎損傷模型BUN及SCr進行序貫檢測，以期了解順鉑致急性腎損傷的病程進展規(guī)律。

1 材料和方法

1.1 動物模型的建立

雄性新西蘭兔40只，由北京海淀區(qū)興隆實驗動物養(yǎng)殖場提供【SCXK(京)2011-0006】，體重2.1～2.4 kg，平均2. 29±0.29 kg，隨機分為5組，每組8只，經(jīng)耳緣靜脈單次注射順鉑(5 mg/kg)建立急性腎損傷模型，按照觀察時間點分為注射后6 h組(T6)、12 h組(T12)，24 h組(T24)，36 h組(T36)及48 h組(T48)，分別于注射順鉑前及注射后相應(yīng)時間點，經(jīng)耳緣靜脈抽取1 mL靜脈血，檢測BUN及SCr值。在各實驗節(jié)點，處死實驗兔，獲取各組兔腎組織標本，10%甲醛溶液固定，常規(guī)石蠟包埋、切片，HE染色光鏡下觀察。

1.2 統(tǒng)計學方法

2 結(jié)果

2.1 各組資料均滿足正態(tài)分布，配對設(shè)計t檢驗

結(jié)果證實：各組實驗兔血BUN及SCr在造模后48 h內(nèi)均較造模前發(fā)生了不同程度的升高(表1，圖1～2)，通過分析各組實驗兔造模前后BUN及SCr值，根據(jù)KDIGO標準[3]，T6組僅有2只實驗兔發(fā)生了AKI，T12組有6只實驗兔發(fā)生了AKI，T24、T36及T48組實驗兔均發(fā)生了AKI。

表1 注射順鉑前后兔靜脈血BUN及SCr值比較

注：*與建模前相較P<0.05

Note.*P<0.05 vs. before injection

(A：正常組；B：T12組；C：T36組；D：T48組)HE染色X100圖3 腎臟病理切片A: Normal control group; B: T12 group; C: T36 group; D: T48 group.HE staining. ×100Fig.3 Pathological changes in the rabbit kidney tissues.

圖1 注射順鉑前后兔靜脈血BUN值比較Fig.1 Comparison of blood BUN before and after the injection of cisplatin

圖2 注射順鉑前后兔靜脈血SCr值比較Fig.2 Comparison of blood SCr before and after the injection of cisplatin

對所有組造模后數(shù)據(jù)采用SNK-q檢驗進行兩兩之間比較，發(fā)現(xiàn)：(1)T6組及T12組BUN之間無明顯差異；(2)T24組BUN相較于T6組及T12組明顯升高,差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；(3)相較于其他組，T36組及T48組BUN升高最為顯著，但兩者間沒有明顯差異(P>0.05)；(4)T6組、T12組及T24組間SCr兩兩比較無明顯差異(P>0.05)；(5)T36組SCr水平高于T6組、T12組及T24組，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；(6)T48組SCr水平顯著高于其他組(P<0.05)。

2.2 病理結(jié)果顯示

T6組及T12組家兔腎小管上皮細胞未發(fā)生明顯的水腫及空泡樣改變，周圍無明顯的炎性細胞，腎小管腔內(nèi)無管型阻塞。T24及T36組切片可見滲出的炎性細胞排列于腎小管上皮細胞周圍，部分腎小管腔內(nèi)有管型阻塞，腎小管上皮局部水腫增厚，發(fā)生空泡樣改變，部分上皮變性壞死。T48組切片炎性細胞滲出明顯，腎小管上皮水腫、空泡樣變、壞死較其余組進一步加重，腎小管管型阻塞普遍，部分腎小管結(jié)構(gòu)崩解，原有結(jié)構(gòu)難以辨識(圖3)。所有組腎小球形態(tài)基本完整，結(jié)構(gòu)未發(fā)生明顯改變。

3 討論

順鉑是目前臨床上用于腫瘤化療的主要藥物之一，對前列腺癌、卵巢癌、乳腺癌等多種實體腫瘤具有良好的療效。但由于其毒性及療效均與使用劑量成正比，致使其在臨床診療工作中的使用劑量受到限制[4]。順鉑最主要的不良反應(yīng)是腎損傷，盡管目前臨床已采用水化等措施預防腎毒性的發(fā)生，但其發(fā)生率仍高達1/3[5]，多療程化療時甚至可達75%[2]。腎毒性是限制順鉑使用劑量的主要因素，了解順鉑致急性腎損傷的進展規(guī)律，是進行相關(guān)研究的基礎(chǔ)。

目前臨床使用最廣泛、接受度最高的AKI診斷標準由KDIGO(Kidney Disease：Improving Global Outcomes，改善全球腎臟病預后組織)制定，認為符合以下情況之一者即可診斷為AKI：(1)48 h內(nèi)血清肌酐值增加≥0.3 mg/dL(26.5 μmol/L)；(2)在發(fā)病前7 d血清肌酐值較基線增高≥1.5倍；(3)尿量<0.5 mL/kg/h，持續(xù)6 h以上。由于既往文獻報道中，未制定兔急性腎損傷的診斷標準，因物種不同，靠觀測血肌酐升高值及尿量減少值，并不能診斷兔的急性腎損傷，因此本研究采用KDIGO標準第二條即在發(fā)病前7 d血清肌酐值較基線增高≥1.5倍為標準診斷兔急性腎損傷。

通過對所有實驗兔造模前、后BUN及SCr的觀察比對，根據(jù)KDIGO標準，造模后24 h AKI已發(fā)生，說明順鉑致AKI起病早，發(fā)展快。有學者經(jīng)腹腔灌注順鉑造成兔的急性腎損傷，并將造模后24 h、48 h BUN及SCr與造模前進行比較，發(fā)現(xiàn)兩者在造模后24 h升高明顯，在48 h升高更加顯著[6]，腹腔灌注順鉑的小型豬急性腎損傷的實驗中，造模后3 h尿液BUN及SCr就出現(xiàn)顯著改變[7]，另有學者制作順鉑所致大鼠急性腎損傷模型，亦于早期發(fā)現(xiàn)BUN及SCr的顯著改變[8]，這些研究與本實驗結(jié)果一致。在經(jīng)腹腔注射順鉑制作大鼠急性腎損傷模型的實驗研究中，發(fā)現(xiàn)在造模后6 h BUN與SCr較造模前無明顯變化[9]，推測可能是由于實驗動物的不同，使得結(jié)果與本實驗不同，提示不同物種對順鉑腎毒性耐受性的差異。另有多個實驗使用甘油肌注法制作兔腎損傷模型，發(fā)現(xiàn)在造模后6 h及24 h BUN及SCr測值未均發(fā)生明顯變化[10-12]，推測可能是由于模型制作途徑的不同，致使結(jié)果與本實驗不同。

造模后12 h內(nèi)BUN、SCr測值及病檢結(jié)果之間比較無顯著差異，提示順鉑所致腎損傷在初期較為穩(wěn)定，已有的實驗研究亦證實了這一點[9]。T24BUN較T12顯著升高，T36SCr較T24顯著升高(圖1、2)，說明順鉑所致腎功能障礙惡化加重，鏡下表現(xiàn)亦證實了這一改變趨勢(圖3)。本研究結(jié)果提示在預測順鉑致兔腎損傷病情的加重上，BUN要比SCr敏感，申俊等[13]在動物實驗研究中發(fā)現(xiàn)，在順鉑所致腎損傷成功的基礎(chǔ)上，BUN比SCr升高的時間點早，認為BUN比SCr在預測順鉑所致腎損傷病情加重上更加敏感，該結(jié)論也與本研究的結(jié)果相同。T48組與T36組BUN相比未發(fā)生顯著改變(P>0.05)，可能與這兩組實驗兔在造模后期均發(fā)生了不同程度上的拒食、水現(xiàn)象及順鉑胃腸道毒性有關(guān)。BUN大部分來源于食物中的蛋白質(zhì)代謝，易受到飲食影響，造模后期實驗兔受順鉑致吐及胃腸道毒性影響而拒食，故其BUN短時間內(nèi)不再升高[14]。

順鉑所致腎損傷具有起病急，進展快的特點，早發(fā)現(xiàn)、早處理對提高腫瘤化療效果，指導臨床化療工作意義重大。本研究揭示了單次靜脈注射順鉑致兔早期腎損傷的進展規(guī)律，為該方面的研究提供了實驗依據(jù)。

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Sequential observation of acute kidney injury induced by cisplatin in rabbits

QIAO Shi1，JIA Hua-ping2，LIANG Hui-ze1, LI Hua2, ZHANG Ming-ming2, SONG Wen-jing2

(Department of Ultrasound, the 306th Clinical College of PLA, Anhui Medical University, Beijing 100101, China； 2. Department of Ultrasound, the 306th Hospital of PLA, Beijing 100101)

Objective To evaluate the disease course of acute kidney injury (AKI) induced by single intravenous injection of cisplatin in rabbits. Methods Forty male New Zealand rabbits were divided into 5 groups, 8 rabbits in each group. Acute kidney injury models were made by a single injection of cisplatin in the ear vein of rabbits, and five groups were defined as T6, T12, T24, T36and T48according to the detection time of the blood urea nitrogen (BUN) and serum creatinine (SCr) in the rabbits. Blood BUN and SCr were detected before and immediately after cisplatin injection. The data were analyzed with SPSS 22.0 software, andP<0.05 was considered as statistically significant. The rabbits were sacrificed and kidney samples were taken for routine pathological examination. Results Compared with the data pre-injection, the blood BUN and SCr were increased significantly, and the experimental rabbits were consistent with the criteria of AKI according to the criteria of "Kidney Disease: Improving Global Outcomes Organization (KDIGO standard)" at 24 h after injection of cisplatin. The acute kidney injury of the rabbits was progressively worsening in 48 hours. More severe pathological changes were observed in the 48 hour group than in the other groups. Conclusions Progressive renal injury of rabbit kidney can be induced by single intravenous injection of cisplatin.

Rabbits; Kidney injury; Cisplatin; Bio-marker

喬實(1989-)，男，醫(yī)師，在讀碩士，專業(yè)：超聲診斷。E-mail： 401043236@qq.com。

梁會澤(1957-)，男，碩士生導師，教授。E-mail： lianghuize@126.com；賈化平(1972-)，男，碩士生導師，副教授。E-mail： 283407206@qq.com。

R-33

A

1671-7856(2017) 02-0055-04

10.3969.j.issn.1671-7856. 2017.02.010

2016-07-13