微柱凝膠法在血型鑒定中的應(yīng)用

李偉敬，夏瑞雪，崔 艷

（1.解放軍第266醫(yī)院檢驗(yàn)科，河北 承德 067000；2.解放軍第266醫(yī)院麻醉科，河北 承德 067000）

微柱凝膠法在血型鑒定中的應(yīng)用

李偉敬1，夏瑞雪1，崔 艷2

（1.解放軍第266醫(yī)院檢驗(yàn)科，河北 承德 067000；2.解放軍第266醫(yī)院麻醉科，河北 承德 067000）

微柱凝膠法；血型鑒定；應(yīng)用

ABO血型系統(tǒng)是被發(fā)現(xiàn)的人類第一個(gè)血型系統(tǒng)，至今，現(xiàn)發(fā)現(xiàn)人類血型系統(tǒng)已有30多種，隨著人類對血型的進(jìn)一步研究，Rh血型系統(tǒng)是紅細(xì)胞血型中最為復(fù)雜的一個(gè)血型系統(tǒng)，因此血型在輸血前的正確鑒定，是確保安全輸血的重要措施，直接關(guān)系到患者的生命安全。目前傳統(tǒng)的ABO血型和Rh血型鑒定主要采用玻片法，其敏感度不能滿足臨床輸血安全需求。因此，我們選擇了微柱凝膠法ABO、Rh（D）血型定型檢測卡在同一卡片上進(jìn)行正反血型鑒定。

1 材料與方法

1.1 一般資料

檢測標(biāo)本為我院2016年8～12月送檢的門診及住院患者2000份EDTA抗凝新鮮血樣。

1.2 試驗(yàn)原理

本檢測卡是利用微柱凝膠過篩檢測原理。若待檢患者紅細(xì)胞與凝膠中的單克隆IgM抗A、抗B、抗D試劑發(fā)生特異性凝集反應(yīng)，或待檢患者血漿與ABO試劑紅細(xì)胞發(fā)生特異凝集反應(yīng)，通過TD-2Y醫(yī)用多功能離心機(jī)離心后，凝集的紅細(xì)胞被排阻在具有三維空間網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的凝膠表層或凝膠顆粒間隙之中，判為陽性結(jié)果，表示待檢患者紅細(xì)胞含相應(yīng)的血型抗原，或待檢患者血漿含相應(yīng)的抗體；如果RBC全部沉積于凝膠孔腔底部，則判為陰性結(jié)果，表示待檢測紅細(xì)胞不含相應(yīng)的抗原，或待檢血漿不含相應(yīng)的抗體。正定型管有4管，其中藍(lán)色A管含35%單克隆IgM抗A（效價(jià)≥128），黃色B管含35%單克隆IgM抗B（效價(jià)≥128），灰色D管含35%單克隆IgM抗D（效價(jià)≥64），白色Control管含生理鹽水35%，各微柱管分別含凝膠65%，在卡片上的排列順序從左至右由第一管起分別為蘭A、黃B、灰D、白Control；反定型管有4管，白色A、B、O、自身管全部為無抗體微柱管，各管分別含生理鹽水35%、凝膠65%，在卡片上排列順序從左至右由第5管起分別為白A、白B、白O、自身。

1.3 試劑與儀器

ABO、Rh（D）血型定型檢測卡（中山市生科試劑儀器有限公司），ABO血型反定型試劑盒（人紅細(xì)胞）（長春博德生物技術(shù)有限責(zé)任公司），TD-2Y醫(yī)用多功能離心機(jī)（中山市生科試劑儀器有限公司）。

1.4 檢測方法

1.4.1 ABO、Rh（D）血型定型檢測卡

觀察外觀，如有干膠、雜質(zhì)、氣泡不可使用，將卡放置平衡至室溫，使用前置離心機(jī)1000 r/min離心2 min，1800r/min離心3 min。將待檢全血標(biāo)本離心分離紅細(xì)胞與血漿（血清），取上清（該上清不得有絮狀物或沉淀）。制備1%待檢紅細(xì)胞懸液（500 ul生理鹽水或血型分析用稀釋液對5 ul壓積紅細(xì)胞）與1%的A1、B、O型試劑紅細(xì)胞懸液（1500 ul血型分析用稀釋液對500 ul的4%A1、B、O紅細(xì)胞或比例3:1稀釋）。撕開卡封膜，于蘭A、黃B、灰D、Control微柱管反應(yīng)腔中加入1%待檢RBC懸液各50 μl；于白色A、B、O、自身管分別各加入待檢血漿50 μl，再分別加入對應(yīng)的1.0%A1、B、O型試劑紅細(xì)胞懸液、待檢紅細(xì)胞懸液50 μl。將檢測卡，置離心機(jī)靜置5 min，1000 r/min，2 min，1800 r/min，3 min離心后取出，判定結(jié)果。

1.4.2 玻片法

按照《全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》進(jìn)行操作并判定結(jié)果[1]。

2 結(jié) 果

在2000例血型鑒定標(biāo)本中RhD陰性5例（用玻片鑒定也為陰性），正反定型不符7例（其中紅細(xì)胞抗原減弱例2例，高效價(jià)冷凝集素2例，拖尾現(xiàn)象3例）。

3 討 論

紅細(xì)胞血型抗原減弱2例均為腫瘤患者，由于凝集反應(yīng)減弱，影響結(jié)果判定。針對此問題，我們根據(jù)凝集反應(yīng)減弱程度，把腫瘤患者紅細(xì)胞懸液濃度相應(yīng)增加，用標(biāo)準(zhǔn)血清再鑒定一次，結(jié)果準(zhǔn)確。血型鑒定中高冷凝集素的影響應(yīng)引起我們的高度重視，高效價(jià)冷凝集素是患者體內(nèi)產(chǎn)生了抗自身紅細(xì)胞的嗜異性冷抗IgM。血型鑒定過程中由于在室溫條件下進(jìn)行，嗜異性冷抗IgM即可與自身紅細(xì)胞發(fā)生非特異性凝集反應(yīng)，出現(xiàn)凝集現(xiàn)象而導(dǎo)致血型判斷錯(cuò)誤。對此我們先把待檢紅細(xì)胞用生理鹽水洗滌三次，在用37℃水浴箱溫育30 min后進(jìn)行檢測并結(jié)合玻片法，做出正確判斷。經(jīng)過檢查發(fā)現(xiàn)拖尾現(xiàn)象是由于實(shí)驗(yàn)人員在撕封條的時(shí)候用力過猛，導(dǎo)致抗A孔里的血清污染到抗B血清孔里，出現(xiàn)結(jié)果拖尾現(xiàn)象，給結(jié)果判讀增加難度。我們的解決辦法是檢測卡在離心機(jī)1000 r/min，2 min；1800 r/min，3 min離心后小心撕開封條，避免用力過猛。通過實(shí)驗(yàn)我們總結(jié)在檢測卡使用過程中，如因運(yùn)輸過程產(chǎn)生氣泡，可將檢測卡放置在漩渦振蕩器上震蕩，使氣泡漂移至膠面為止，3000 r/min離心2 min。延長抗原抗體反應(yīng)時(shí)間，按1000 r/min，2 min；1800 r/min，3 min離心，可提高試驗(yàn)靈敏度。避免因離心速度過快、時(shí)間過長導(dǎo)致結(jié)果假陰性。及時(shí)發(fā)現(xiàn)由于細(xì)菌污染、纖維蛋白析出，抗凝血不佳膠體上清液揮干導(dǎo)致的假陽性。玻片法作為我們常用的血型鑒定方法，其敏感度不能滿足疑難血型的鑒定。微柱凝膠法成為目前血型檢測的主要方法，彌補(bǔ)了玻片法的不足，具有血型鑒定時(shí)間短，結(jié)果準(zhǔn)確、清楚，靈敏度高，易于保存?zhèn)洳榈葍?yōu)點(diǎn)。因此，微柱凝膠法檢測血型為臨床安全輸血提供了有效保障，值得推廣使用。

[1] 葉應(yīng)嫵,王毓三,申子瑜.全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程.第三版,南京:東南大學(xué)出版社.

本文編輯：吳 衛(wèi)

R446.62

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ISSN.2095-8242.2017.14.2745.01