土鱉蟲的活性成分及藥理研究進(jìn)展

王立娜 王 穎 朱明珠 桑 曉 邢佰穎 毛會(huì)秀 王集會(huì)

(山東中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，山東 濟(jì)南 250355;*山東中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)中心，山東 濟(jì)南 250355)

土鱉蟲又名土元，地鱉，為鱉蠊科昆蟲地鱉(Eupolyphaga sinesis Walker)或冀地鱉(Eupolyphaga sinesis(Boleny))的雌蟲干燥體，性寒，味咸，微毒，能入肝心脾三經(jīng)，土鱉蟲不僅能作為食物增強(qiáng)機(jī)體免疫力，而且是調(diào)節(jié)血液流變學(xué)的首選藥物，具有活血散瘀，消腫止痛等功效［1］。現(xiàn)代研究表明，土鱉蟲體內(nèi)含有豐富的蛋白質(zhì)和氨基酸、不飽和脂肪酸、生物堿、脂溶性維生素和無(wú)機(jī)元素［2］等，具有潛在的生物活性，包括抗凝血，抗血栓［3］形成，保護(hù)肝臟以及具有良好的抗腫瘤［4］效果。但是目前對(duì)其所含的各活性成分作用機(jī)制還不是很明確，還需要更加深入的研究其生物活性，成分及藥理藥效的作用機(jī)制。

1 活性成分

對(duì)土鱉蟲活性成分已經(jīng)有較多的研究報(bào)道，主要成分包括多種活性蛋白、氨基酸和不飽和脂肪酸、生物堿、脂溶性元素和無(wú)機(jī)元素。

李永超等［5］對(duì)金邊地鱉蟲成分進(jìn)行分析，并與中華真地鱉進(jìn)行比較，和中華真地鱉一樣，金邊地鱉蟲所含的氨基酸成分種類齊全，幾乎包含了構(gòu)成蛋白質(zhì)的所有氨基酸，共檢測(cè)出18種氨基酸，其中包含人體必需的8種氨基酸、2種半必需氨基酸和兒童必需的組氨酸，并且發(fā)現(xiàn)金邊地鱉蟲含量更高一些，氨基酸成分在活血化瘀方面起到一定的作用，氨基酸的高含量增加脾臟和胸腺免疫器官的重量的作用。地鱉蟲脂肪油含量較高，主要由油酸、亞油酸等不飽和脂肪酸組成，不飽和脂肪酸占總量的75%，其中人體唯一的也是最重要的必需脂肪酸亞油酸含量占不飽和脂肪酸的28.5%。飽和脂肪酸主要是軟脂酸，而易使膽固醇含量升高的肉豆蔻酸含量卻極低，其中亞油酸是人體無(wú)法自身合成的，具有降低血脂、抗血小板聚集、調(diào)節(jié)免疫力等作用，并且是前列腺合成的必須前體。

土鱉蟲總生物堿可延長(zhǎng)小鼠心電消失時(shí)間，可使小鼠增加耗氧致缺氧的存活時(shí)間延長(zhǎng)，對(duì)抗大鼠急性心肌缺血引起的ST－T的改變。盧穎等［6］從土鱉蟲正己烷和正丁醇萃取物中分離到尿素囊和尿嘧啶，尿囊素具有鎮(zhèn)痛作用，促進(jìn)皮膚潰瘍面和傷口愈合及生肌作用，而尿嘧啶則參與多種核苷的代謝，與土鱉蟲的抗癌、鎮(zhèn)痛作用和治療外傷有著密切的關(guān)系。微量元素參與人體各種生理生化過(guò)程，具有防病治病的作用，對(duì)生長(zhǎng)發(fā)育、造血功能和免疫機(jī)能有著重要的作用，陳金鳳等［7］采用HNO3∶ HClO4的混合酸消解土鱉蟲樣品，用火焰原子吸收光譜法測(cè)定其中Ca、Mg、Zn、Mn含量，發(fā)現(xiàn)土鱉蟲體中含有較高含量的Ca、Mg，以及少量的 Zn、Mn。

2土鱉蟲的藥理作用

2.1 抗腫瘤活性及抑制血管生成

土鱉蟲在臨床上被廣泛應(yīng)用于腫瘤的治療，王鳳霞等［8］通過(guò)分離純化中華真地鱉中抗腫瘤活性成分，得到了一分子質(zhì)量約為72kD的抗腫瘤蛋白(EPS72)，并采用MTT法考察其抗腫瘤活性，發(fā)現(xiàn)該蛋白對(duì)肝癌Bel－7402細(xì)胞、肺癌A549細(xì)胞等多種人癌細(xì)胞株具有較強(qiáng)的增殖抑制作用，而且呈濃度依賴性，證明了純化的蛋白具有潛在的抗腫瘤活性。葛鋼鋒等［9］采用MTT比色法及流式細(xì)胞術(shù)，研究土鱉蟲醇提物(ESE)對(duì)體外培養(yǎng)人肝癌細(xì)胞株(HepG－2)和人胃癌細(xì)胞株(SGC－7901)增殖的影響及其作用機(jī)制，結(jié)果表明土鱉蟲醇提物(ESE)對(duì)HepG－2和SGC－7901細(xì)胞的增殖具有明顯的抑制作用，并可誘導(dǎo)HepG－2腫瘤細(xì)胞的凋亡，表現(xiàn)出較強(qiáng)的體外抗腫瘤活性。

新血管的生成是惡性腫瘤發(fā)展轉(zhuǎn)移的重要生理過(guò)程，抑制這一過(guò)程能明顯阻止腫瘤組織的發(fā)展和擴(kuò)散轉(zhuǎn)移。曹付春等［10］采用含藥血清體外培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞、肺癌、乳腺癌細(xì)胞，觀察地鱉纖溶蛋白對(duì)細(xì)胞的體外增殖和分泌VEGF和bFGF的影響，發(fā)現(xiàn)EFP含藥血清對(duì)促進(jìn)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞、肺癌、乳腺癌細(xì)胞血管生長(zhǎng)因子VEGF和bFGF蛋白的分泌與表達(dá)具有顯著的抑制作用，且具有劑量依賴性，表明了EFP含藥血清能有效抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖，具有良好的抗腫瘤活性。

2.2 抗凝血和抗血栓

黃鎮(zhèn)林等［11］以凝血酶原時(shí)間(PT)、活化部分凝血酶原時(shí)間(APTT)、凝血酶時(shí)間(TT)、纖維蛋白原含量(FIB)、血小板聚集率及纖溶圖參數(shù)為指標(biāo)，評(píng)價(jià)土鱉蟲抗凝組分F2－2的體內(nèi)抗凝藥效，結(jié)果表明，F(xiàn)2－2可以顯著地抑制降低模型大鼠體內(nèi)凝血酶原激活物的生成、降低纖維蛋白原含量、抑制血小板聚集并降低血液凝固程度，具有良好的體內(nèi)抗凝藥效。柴連琴等［12］通過(guò)克隆土元類胰蛋白酶樣絲氨酸蛋白酶分子，構(gòu)建原核重組表達(dá)載體，獲得了具有溶栓活性的蛋白，并檢測(cè)其體外溶栓活性，結(jié)果顯示該活性蛋白前1h內(nèi)活性最強(qiáng)，溶栓效率達(dá)到28.13%，并推測(cè)由于反應(yīng)產(chǎn)物的增加，會(huì)在一定程度上抑制蛋白酶的活力，使溶栓效率下降。

2.3 調(diào)節(jié)血脂

高脂血癥主要是指血清總膽固醇(TC)或甘油三酯(TG)過(guò)高和血清高密度脂蛋白－膽固醇(HDLC)水平過(guò)低，而膽固醇水平異常是心腦血管疾病發(fā)病以及死亡的主要原因。多項(xiàng)研究表明土鱉蟲粉具有調(diào)節(jié)血脂的作用。趙志壯等［13］通過(guò)建立高脂血癥家兔模型，研究土鱉蟲凍干粉的降脂作用，結(jié)果表明土鱉蟲凍干粉能夠不同程度地降低高血脂家兔血清中CHO、TG、LDL－C水平，并使HDL－C水平升高，證實(shí)了土鱉蟲凍干粉能有效地調(diào)節(jié)血脂并推測(cè)其作用機(jī)制可能是由于土鱉蟲凍干粉中的某些有效成分促進(jìn)了載脂蛋白ApoaⅠ和ApoaⅡ的合成和表達(dá)，為土鱉蟲防治動(dòng)脈粥樣硬化和冠心病提供了實(shí)驗(yàn)和理論依據(jù)。

2.4 抗氧化、增強(qiáng)免疫、抗菌

谷崇高等［14］對(duì)小鼠腹腔注射D－半乳糖，建立衰老模型，灌服不同劑量的地鱉多肽提取物，探討抗氧化衰老機(jī)制，結(jié)果顯示多肽組小鼠耐缺氧、耐高溫的時(shí)間明顯延長(zhǎng)，增加了Caco－2細(xì)胞核內(nèi) Nrf2表達(dá)量，血液和不同組織中的SOD、CAT、GSH－PX活力及GSH含量顯著提高，而MDA含量降低，并推測(cè)地鱉多肽可能是通過(guò)啟動(dòng)Nrf2－ARE抗氧化信號(hào)通路，提高衰老小鼠抗應(yīng)激和抗氧化能力，達(dá)到了延緩小鼠氧化衰老的目的。劉丹［15］等利用木瓜蛋白酶水解土鱉蟲制備土鱉蟲多肽，研究其體內(nèi)免疫調(diào)節(jié)作用，結(jié)果與對(duì)照組相比，土鱉蟲多肽可提高小鼠胸腺和脾臟指數(shù)及血清白介素－2的水平，增強(qiáng)小鼠碳粒廓清能力，表明了土鱉蟲多肽具有良好的免疫調(diào)節(jié)作用。李坤等［16］提取了金邊地鱉、中華真地鱉中的生物堿類物質(zhì)，研究?jī)煞N地鱉蟲中各生物的抗菌活性，結(jié)果表明兩種地鱉蟲中各生物堿對(duì)金黃色葡萄球菌、大腸桿菌及枯草芽孢桿菌均有抑制作用，且呈現(xiàn)明顯的量效關(guān)系，并發(fā)現(xiàn)金邊地鱉抗菌活性成分高于中華真地鱉。

3 結(jié) 語(yǔ)

地鱉蟲雖然具有廣泛的藥理作用，但是目前對(duì)其所含的各成分作用機(jī)制還不是很明確，

還需要更加深入的研究其生物活性成分及藥理藥效的作用機(jī)制，這樣才能指導(dǎo)科學(xué)用藥，預(yù)防疾病，促進(jìn)康復(fù)。

［1］宋永剛.神農(nóng)本草經(jīng)選讀［M］.北京:中國(guó)中醫(yī)出版社，2012.

［2］周彥鋼，任玉翠，江月仙.地鱉蟲的營(yíng)養(yǎng)成分分析［J］.食品研究與開發(fā)，1998，19(2):51 ～53.

［3］徐莉，竇家聰，尹雷等.不同大孔樹脂處理土鱉蟲酶解液抗血栓作用研究［J］.遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2016，18(3):3133.DOI:10.13194j/.issn.1673842x.

［4］Zhang Y，Zhan Y，Zhang D.，et al.Eupolyphaga sinensis walker displays inhibition on hepatocellular carcinoma through regulating cell growth and metastasis signaling［J］.Sci Rep2014 Jul 1;4:5 518.

［5］李永超，李坤，戴仁懷.金邊地鱉營(yíng)養(yǎng)成分分析與評(píng)價(jià)［J］.環(huán)境昆蟲學(xué)報(bào)，2013，35(4):466 ～472.

［6］盧穎，江佩芬.土鱉蟲化學(xué)成分的研究［J］.中國(guó)中藥雜志，1992，17(8):487 ～489，512.

［7］陳金鳳，楊成，張勇.中藥土鱉蟲中Ca、Mg、Zn和Mn 4種微量元素的含量測(cè)定［J］.光譜實(shí)驗(yàn)室，2010，27(5):2009～2011.

［8］王鳳霞.中華真地鱉(Eupolyphaga sinensis)抗腫瘤蛋白分離純化及其體外抗轉(zhuǎn)移活性研究［D］.山東大學(xué)，2013.

［9］葛鋼鋒，余陳歡，吳巧鳳.土鱉蟲醇提物對(duì)體外腫瘤細(xì)胞增殖的抑制作用及其機(jī)制研究［J］.中華中醫(yī)藥雜志，2013，28(3):826 ～828.

［10］曹付春，韓雅莉，陳冰，等.地鱉纖溶活性蛋白對(duì)荷瘤小鼠腫瘤微血管密度及血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子表達(dá)的影響［J］.中藥材，2011，(05):676～679.

［11］黃鎮(zhèn)林，杜清華，王宏濤，等.土鱉蟲多肽F2－2的體外藥效研究［J］.中醫(yī)藥信息，2014，32(2):4 ～6.

［12］柴連琴，王樂(lè)，苗迎春，曹陽(yáng)陽(yáng)，孟景會(huì)，于威.土元溶栓蛋白的原核表達(dá)和活性檢測(cè)［J］.河南大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)，2015，45(2):187 ～191.

［13］趙志壯，任慧君，任傳帥，等.土鱉蟲凍干粉對(duì)高脂血癥家兔模型的降脂作用［J］.黑龍江畜牧獸醫(yī)，2015，3(5):165～167.

［14］谷崇高，張永紅，白若雨，等.地鱉多肽提取物的抗氧化衰老機(jī)制［J］.中國(guó)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)報(bào)，2014，22(6):66～74，14.

［15］劉丹，李興暖，秦仲君，何巍，趙勇.土鱉蟲多肽的制備及免疫調(diào)節(jié)作用研究［J］.中藥材，2012，35(9):1 382～1 385.

［16］李坤，戴仁懷.兩種地鱉蟲總生物堿的提取及其抗菌活性研究［J］.時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2015，26(6):1 353～1 354.