不同氮能比飼糧對妊娠環(huán)江香豬臍帶血管發(fā)育相關(guān)基因表達的影響

祝 倩馬思聰姬玉嬌印遇龍孔祥峰，2?

（1.中國科學(xué)院亞熱帶農(nóng)業(yè)生態(tài)研究所，亞熱帶農(nóng)業(yè)生態(tài)過程重點實驗室，湖南省畜禽健康養(yǎng)殖工程技術(shù)研究中心，農(nóng)業(yè)部中南動物營養(yǎng)與飼料科學(xué)觀測實驗站，長沙 410125；2.中國科學(xué)院環(huán)江喀斯特農(nóng)業(yè)生態(tài)實驗站，香豬研究中心，環(huán)江 547100）

不同氮能比飼糧對妊娠環(huán)江香豬臍帶血管發(fā)育相關(guān)基因表達的影響

祝 倩1馬思聰1姬玉嬌1印遇龍1孔祥峰1，2?

（1.中國科學(xué)院亞熱帶農(nóng)業(yè)生態(tài)研究所，亞熱帶農(nóng)業(yè)生態(tài)過程重點實驗室，湖南省畜禽健康養(yǎng)殖工程技術(shù)研究中心，農(nóng)業(yè)部中南動物營養(yǎng)與飼料科學(xué)觀測實驗站，長沙 410125；2.中國科學(xué)院環(huán)江喀斯特農(nóng)業(yè)生態(tài)實驗站，香豬研究中心，環(huán)江 547100）

本試驗旨在研究不同氮能比飼糧對妊娠環(huán)江香豬臍帶血管發(fā)育相關(guān)基因表達的影響。選用首次妊娠的環(huán)江香豬48頭，根據(jù)體重隨機分為2組，每組8個重復(fù)（欄），每個重復(fù)3頭豬。配種后分別飼喂高氮能比飼糧［消化能（DE）為14.73 MJ/kg，粗蛋白質(zhì)（CP）含量為13.11%，氮能比為0.89］和低氮能比飼糧（DE為12.24 MJ/kg，CP含量為9.77%，氮能比為0.80）。分別于妊娠第45、75和110天每欄取1頭母豬，處死屠宰，收集每窩中最大體重、平均體重和最小體重胎豬對應(yīng)的臍帶，利用實時熒光定量PCR方法檢測血管發(fā)育相關(guān)基因——成纖維細(xì)胞生長因子（FGF）、血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）、血管內(nèi)皮生長因子受體2（VEGFR2）和內(nèi)皮型一氧化氮合酶（eNOS）的表達量。結(jié)果表明：與低氮能比飼糧組相比，高氮能比飼糧顯著上調(diào)了臍帶血管發(fā)育相關(guān)基因的表達量（P＜0.05），包括妊娠45 d最大體重胎豬的VEGF和VEGFR2表達量，平均體重胎豬的VEGF表達量；妊娠75 d最大體重胎豬的VEGF、VEGFR2和eNOS表達量，平均體重胎豬的VEGF和eNOS表達量，最小體重胎豬的VEGFR2表達量；妊娠110 d最大體重胎豬的FGF、VEGFR2和eNOS表達量，平均體重胎豬的FGF和VEGFR2表達量，最小體重胎豬的VEGF和eNOS表達量。不同妊娠期相同標(biāo)準(zhǔn)體重、同一妊娠期不同標(biāo)準(zhǔn)體重胎豬的臍帶血管發(fā)育相關(guān)基因的表達量均存在差異。由此可見，高氮能比飼糧可能由于其蛋白質(zhì)和氨基酸水平較高而顯著上調(diào)了妊娠環(huán)江香豬臍帶血管發(fā)育相關(guān)基因的表達量，不同妊娠期或同一妊娠期不同標(biāo)準(zhǔn)體重胎豬的臍帶血管發(fā)育相關(guān)基因的表達量也存在差異。

環(huán)江香豬；妊娠；飼糧氮能比；臍帶；血管發(fā)育

在規(guī)?；B(yǎng)豬生產(chǎn)中，遺傳、營養(yǎng)、環(huán)境和疾病等因素均可導(dǎo)致胎兒的死亡，且營養(yǎng)因素是其中非常重要的影響因素之一［1］。母體營養(yǎng)可通過調(diào)控母-胎界面的結(jié)構(gòu)和胎盤的功能，影響胎兒的生長發(fā)育［2］。 胎盤是連接母體和胎兒的器官［3］，母體通過胎盤血管與胎兒進行營養(yǎng)物質(zhì)的交換，胎盤運輸營養(yǎng)物質(zhì)的能力與其血管的密度、通透性及大小密切相關(guān)［4］，充足的營養(yǎng)和豐富的血液循環(huán)是胎兒健康生長發(fā)育的前提。胎盤血管新生受阻與低初生重胎兒的發(fā)生密切相關(guān)［5］。低初生重可降低新生動物成活率，對后代的生長發(fā)育和繁殖性能等存在長期的負(fù)面影響，給畜牧業(yè)帶來巨大損失。所以，研究胎盤血管的發(fā)育機制對提高母豬胎兒存活率、促進胎兒的生長發(fā)育具有重要意義?，F(xiàn)有研究表明，妊娠期母體蛋白質(zhì)和能量攝入不足及蛋白質(zhì)和能量嚴(yán)重不平衡均可阻滯胎兒的生長發(fā)育，導(dǎo)致低初生重胎兒的發(fā)生［6］。營養(yǎng)調(diào)控是改善低初生重新生仔豬器官發(fā)育以及提高其出生后生長速度的重要手段［7］。例如，母豬飼糧中添加精氨酸可刺激胎盤一氧化氮（NO）的生成，有效緩解低初生重胎兒的發(fā)生［8］；飼糧中添加甘油三丁酸酯可改善低初生重仔豬的代謝效率，改善哺乳期低初生重仔豬的生長發(fā)育［9］；飼糧中添加亮氨酸可減少低初生重仔豬的肌肉萎縮［10］。營養(yǎng)素對機體生長發(fā)育的影響歸根結(jié)底是調(diào)控相關(guān)基因表達的結(jié)果［11］。筆者前期研究發(fā)現(xiàn)，不同氮能比飼糧雖然對不同妊娠期環(huán)江香豬的胎兒數(shù)、窩重、胎兒個體重及母體成分無顯著影響，但高氮能比飼糧可在一定程度上改善機體代謝，促進母體的生長發(fā)育［12］。高氮能比飼糧是否影響胎盤及臍帶血管相關(guān)基因的表達尚不清楚。環(huán)江香豬是廣西優(yōu)良的地方豬品種之一，其飼養(yǎng)管理較為粗放，飼糧以青飼料為主，飼糧的營養(yǎng)成分不夠全面，導(dǎo)致豬只生長緩慢［13］。因此，改善飼糧組成、促進母豬胎盤血管發(fā)育，是提高環(huán)江香豬產(chǎn)仔數(shù)和成活率的前提，同時對預(yù)防低初生重胎兒的發(fā)生具有重要參考價值。本試驗以低氮能比飼糧為對照，研究高氮能比飼糧對妊娠環(huán)江香豬臍帶血管發(fā)育相關(guān)基因表達的影響，并比較不同標(biāo)準(zhǔn)體重胎豬臍帶中上述基因表達的差異，為低初生重胎兒的防治提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗動物、分組和飼養(yǎng)管理

試驗選用初次妊娠的環(huán)江香豬48頭，根據(jù)體重隨機分為2組，每組8個重復(fù)（欄），每個重復(fù)3頭豬。配種后稱量每頭母豬的空腹體重，分別飼喂高氮能比飼糧［消化能（DE）為14.73 MJ/kg，粗蛋白質(zhì)（CP）含量為13.11%，氮能比為0.89］和低氮能比飼糧（DE為 12.24 MJ/kg，CP含量為9.77%，氮能比為0.80）。高氮能比飼糧參照NRC（1998）飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)對能量、蛋白質(zhì)和粗纖維的推薦需要量配制，為高能、高蛋白質(zhì)、低纖維飼糧；低氮能比飼糧參照中國地方豬對能量、蛋白質(zhì)和粗纖維需要量的飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)配制，為低能、低蛋白質(zhì)、高纖維飼糧。試驗飼糧組成及營養(yǎng)水平見表1。2種試驗飼糧的氮能比分別為0.89和0.80，其中使用的1%預(yù)混料相同，均參照NRC（1998）飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)的推薦需要量。整個試驗期間，每日每欄母豬的總采食量為 3頭母豬總體重的2.5%。每日08：30和17：00各飼喂1次，自由飲水；所有試驗豬按豬場飼養(yǎng)管理計劃進行常規(guī)免疫和管理。

1.2 樣品采集

根據(jù) Johnston等［14］的報道，妊娠母豬的妊娠期可分為前期（1～30 d）、中期（30～75 d）和后期（75 d～分娩）。但由于環(huán)江香豬為小型豬品種，為了便于分析妊娠早期孕體的生長發(fā)育，本試驗分別于妊娠45（前期）、75（中期）和110 d（后期），每重復(fù)隨機取1頭母豬，每個組共取8頭母豬，心臟放血處死后屠宰，收集每窩胎豬并稱重，選取每窩中最大體重、平均體重和最小體重胎豬（每窩共取3頭）對應(yīng)的臍帶，液氮速凍后-80℃保存，測定血管發(fā)育相關(guān)基因的表達量。

1.3 總RNA提取與反轉(zhuǎn)錄

按試劑盒說明采用 Trizol法提取臍帶總RNA。利用 Nanodrop 2000分光光度計（Nanodrop Technologies，Wilmington，DE）測定 RNA的濃度與純度，吸光度（OD）260/280在1.8～2.2之間較為理想。利用TaKaRa RR036TA反轉(zhuǎn)錄試劑盒進行反轉(zhuǎn)錄，合成第1鏈cDNA，置于-20℃保存。

1.4 基因表達量檢測

采用Premier 5.0軟件設(shè)計目標(biāo)基因引物序列，送上海生工生物工程股份有限公司合成。目標(biāo)基因及其引物序列如下。成纖維細(xì)胞生長因子（FGF）：F：5′-TCAAAGGAGTGTGTGCGAAC-3′，R：5′-CAGGGCCACATACCAACTG-3′；血管內(nèi)皮生長 因 子 （VEGF）：F：5′-CCTGATGCGGTGCGGGGGCT-3′，R：5′-TGGTGGTGGCGGCGGCTATG-3′；血管內(nèi)皮生長因子受體2（VEGFR2）：F：5′-TACGTTGGAGCAATCCCTGT-3′，R：5′-TACACTTTCGATGCCAAG-3′；內(nèi)皮型一氧化氮合酶（eNOS）：F：5′-ATGAAGCACCTGGAGAACGA-3′，F(xiàn)：5′-ATGAAGCACCTGGAGAACGA-3′。按下述反應(yīng)條件在 ABI7 900HT型實時熒光定量（RT）-PCR儀上進行擴增，檢測樣品中目標(biāo)基因的轉(zhuǎn)錄情況。PCR反應(yīng)體系為10 μL，包括：5.0 μL 2×SYBR Green PCR Master Mix，0.4 μL上、下游引物（10 μmol/L），2 μL cDNA模板，dd H2O補齊至10 μL。PCR反應(yīng)程序為：95℃，30 s；95℃，5 s；60℃，30 s；40個循環(huán)。 以 β-肌動蛋白（β-actin）作為內(nèi)參，用Applied Biosystem SDS 2.3軟件進行數(shù)據(jù)分析。采用2-ΔΔCT方法處理數(shù)據(jù)，待測基因的表達量計算公式為：

表1 試驗飼糧組成及營養(yǎng)水平（風(fēng)干基礎(chǔ)）Table 1 Composition and nutrient levels of experimental diets（air-dry basis） %

1.5 數(shù)據(jù)處理與分析

利用SPSS 18.0軟件對同一妊娠期、同一體重、不同飼糧組間的數(shù)據(jù)進行獨立樣本t檢驗；同一飼糧組和標(biāo)準(zhǔn)體重、不同妊娠期，同一飼糧組和妊娠期、不同標(biāo)準(zhǔn)體重的數(shù)據(jù)進行單因素方差分析（one-way ANOVA，LSD）。數(shù)據(jù)以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤”表示。P＜0.05表示差異顯著，0.05≤P＜0.10表示有變化趨勢。

2 結(jié) 果

2.1 不同氮能比飼糧對妊娠環(huán)江香豬臍帶血管FGF基因表達量的影響

由表2可知，與低氮能比飼糧組相比，高氮能比飼糧組妊娠110 d的最大體重、平均體重胎豬的臍帶血管FGF基因表達量均顯著升高（P＜0.05）；高氮能比飼糧組妊娠45 d最大體重胎豬的臍帶血管FGF基因表達量顯著高于其他2個標(biāo)準(zhǔn)體重組（P＜0.05）。

表2 不同氮能比飼糧對妊娠環(huán)江香豬臍帶血管FGF基因表達量的影響Table 2 Effects of different nitrogen/energy diets on umbilical vesselFGFgene expression level of pregnantHuanjiangmini-pigs（n＝8）

2.2 不同氮能比飼糧對妊娠環(huán)江香豬臍帶血管VEGF和VEGFR2基因表達量的影響

由表3可知，與低氮能比飼糧組相比，高氮能比飼糧組妊娠45、75 d的最大體重和平均體重胎豬以及妊娠110 d的平均體重和最小體重胎豬的臍帶血管VEGF基因表達量顯著升高（P＜0.05），妊娠110 d最大體重胎豬的臍帶血管VEGF基因表達量呈升高趨勢（P＝0.087）；高氮能比飼糧組妊娠45、75和110 d最大體重胎豬，妊娠75 d最小體重胎豬和妊娠110 d平均體重胎豬的臍帶血管VEGFR2基因表達量顯著升高（P＜0.05）。隨著妊娠時間的延長，低氮能比飼糧組妊娠45 d最大體重胎豬的臍帶血管VEGF基因表達量顯著高于妊娠110 d（P＜0.05），最小體重胎豬的臍帶血管VEGF基因表達量顯著高于妊娠75和110 d（P＜0.05）；低氮能比飼糧組最小體重胎豬的臍帶血管VEGFR2基因表達量先顯著升高后顯著降低（P＜0.05）。低氮能比飼糧組不同體重間比較，妊娠75 d最大體重胎豬的臍帶血管VEGFR2基因表達量顯著低于平均體重和最小體重胎豬（P＜0.05）。

表3 不同氮能比飼糧對妊娠環(huán)江香豬臍帶血管VEGF和VEGFR2基因表達量的影響Table 3 Effects of different nitrogen/energy diets on umbilical vesselVEGFandVEGFR2 gene expression levels of pregnantHuanjiangmini-pigs（n＝8）

2.3 不同氮能比飼糧對妊娠環(huán)江香豬臍帶血管eNOS基因表達量的影響

由表4可知，與低氮能比飼糧組相比，高氮能比飼糧組妊娠75 d最大體重、平均體重胎豬和妊娠110 d最大體重、最小體重胎豬的臍帶血管eNOS基因表達量均顯著升高（P＜0.05）；妊娠45 d最大體重（P＝0.052）、平均體重（P＝0.065）和最小體重胎豬（P＝0.057）的臍帶血管eNOS基因表達量有升高趨勢。隨妊娠期的延長，高氮能比飼糧組最大體重胎豬的臍帶血管eNOS基因表達量呈先升高后降低的趨勢（P＝0.055）。

表4 不同氮能比飼糧對妊娠環(huán)江香豬臍帶血管eNOS基因表達量的影響Table 4 Effects of different nitrogen/energy diets on umbilical vesseleNOSgene expression level of pregnantHuanjiangmini-pigs（n＝8）

3 討 論

FGF可以刺激子宮動脈和胎兒胎盤動脈內(nèi)皮細(xì)胞的增殖，胚泡中堿性FGF可能對子宮內(nèi)膜的血管生成反應(yīng)有放大作用，可誘導(dǎo)中胚層細(xì)胞分化為成血管細(xì)胞［15］。FGF也可直接作用于血管細(xì)胞，誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞生長，促進血管形成［16］。發(fā)育良好的胎盤血管密度大，運輸氧氣和營養(yǎng)物質(zhì)能力較強，胎兒體重就較大［17］。本試驗結(jié)果表明，高氮能比飼糧可顯著上調(diào)FGF基因的表達量，進而影響血管發(fā)育和妊娠后期胎兒的生長發(fā)育。

VEGF作為主要的促血管生長因子，可促進血管內(nèi)皮細(xì)胞的分裂和遷移，增強毛細(xì)血管的通透性［18］，調(diào)控血管生成和血管新生的進程，在血管的形成中發(fā)揮重要的作用［19］。血管發(fā)育過程中，VEGF主要通過血管內(nèi)皮生長因子受體 1（VEGFR1）和 VEGFR2發(fā)揮其生物學(xué)作用，且VEGFR2是 VEGF的主要受體，可促進血管發(fā)育［20］。 Chen等［21］研究表明，宮內(nèi)生長遲緩（intrauterine growth retardation，IUGR）動物 胎 盤 中VEGF基因的表達量降低。本試驗結(jié)果表明，與低氮能比飼糧組相比，高氮能比飼糧組可顯著上調(diào)VEGF和VEGFR2基因的表達量，從而促進血管的發(fā)育，增加胎盤和臍帶血的血流量；隨著妊娠期的延長，低氮能比飼糧組妊娠45 d體重最大體重和最小體重胎豬的臍帶血管VEGF基因表達量最高，與前人報道的妊娠早期血管就開始發(fā)育一致［22］。一般認(rèn)為，到妊娠中期胎盤血管網(wǎng)的發(fā)育就基本成熟。本研究中，妊娠75 d時，低氮能比飼糧組最小體重胎豬的臍帶血管VEGFR2基因表達量最高，平均體重和最小體重胎豬的臍帶血管VEGFR2基因表達量均顯著高于最大體重胎豬，這可能是由于妊娠中期平均體重和最小體重胎豬為了維持自身的生長發(fā)育，仍需要更多的血管生成。

eNOS對于調(diào)控血管的功能具有重要作用［23］。在生理狀態(tài)下，由 eNOS合成的 NO具有松弛平滑肌細(xì)胞、促進血管生長等作用［24］。本試驗中，高氮能比飼糧可顯著上調(diào)胎豬的臍帶血管eNOS基因的表達量，增加NO生成，進而促進血管發(fā)育。VEGF通過增加NO的量誘導(dǎo)血管的生成，促進血液循環(huán)［25］。NOS是血管系統(tǒng)NO的主要來源，且VEGF可通過激活VEGFR2增加eNOS基因的表達量［5］。本研究中，最大體重胎豬妊娠后期的臍帶血管eNOS與VEGF、VEGFR2基因的表達量變化相一致，說明eNOS產(chǎn)生的NO可能參與了VEGF的促血管生成作用。

本研究采用的高氮能比飼糧中粗蛋白質(zhì)、賴氨酸（Lys）、蛋氨酸+半胱氨酸（Met+Cys）、蘇氨酸（Thr）、色氨酸（Trp）、精氨酸（Arg）、組氨酸（His）、異亮氨酸（Ile）、亮氨酸（Leu）、苯丙氨酸（Phe）、纈氨酸（Val）、天冬氨酸（Asp）、半胱氨酸（Cys）、谷氨酸（Glu）、甘氨酸（Gly）和脯氨酸（Pro）的含量比低氮能比飼糧分別高了34.19%、33.73%、25.00%、30.00%、38.46%、114.81%、80.00%、100.00%、55.36%、87.50%、75.00%、84.62%、37.50%、60.16%、59.26%和68.42%。高氮能比飼糧可顯著上調(diào)胎豬的臍帶血管FGF、VEGF、VEGFR2和eNOS基因的表達量，這與其中含有較高含量的氨基酸有關(guān)。例如，Arg可作為合成血管發(fā)育相關(guān)因子的底物，從而有利于胎兒的血管發(fā)育。Wu等［26］研究表明，在飼糧中添加Arg可上調(diào)胎盤血管VEGF和eNOS基因的表達量，從而改善胎盤血管的功能，促進胎兒的生長發(fā)育；劉俊峰等［8］研究發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加 Arg可顯著促進胎盤中總一氧化氮合酶（TNOS）和原生型一氧化氮合酶（cNOS）的活性。因此，與低氮能比飼糧相比，高氮能比飼糧含有足夠的功能性氨基酸以滿足胎盤血管發(fā)育的需要。

4 結(jié) 論

高氮能比飼糧可顯著上調(diào)妊娠環(huán)江香豬胎豬臍帶血管發(fā)育相關(guān)基因的表達量，有利于胎豬臍帶血管的發(fā)育，這與其中蛋白質(zhì)和氨基酸含量較高有關(guān)；不同妊娠期或同一妊娠期不同標(biāo)準(zhǔn)體重胎豬的臍帶血管發(fā)育相關(guān)基因的表達量存在差異，這可能與低初生重胎兒的發(fā)生有關(guān)。

［1］胡建紅，岳國璋，杜芳，等.營養(yǎng)調(diào)控對母豬繁殖性能的影響［J］.畜牧獸醫(yī)雜志，2011，30（6）：43-44.

［2］SFERRUZZI-PERRI A N，CAMN E J.The programming power of the placenta［J］.Frontiers in Physiology，2016，7：33.

［3］FISHER S J.Why is placentation abnormal in preeclampsia？［J］.American Journal of Obstetrics＆Gynecology，2015，213（Suppl.4）：S115-S122.

［4］WU S P，XU X W，LI C C，et al.Six placenta permeability-related genes：molecular characterization and expression analysis in pigs［J］.Animal，2009，3（3）：408-414.

［5］BOLEHOVSAKá P，SEHNAL B，DRIáK D，et al.Changes in placental angiogenesis and their correlation with foetal intrauterine restriction［J］.Ceska Gynekologie，2015，80（2）：144-150.

［6］孔祥峰，伍國耀，印遇龍.豬宮內(nèi)生長遲緩及其防治研究進展［J］.畜牧與獸醫(yī)，2009，41（10）：96-101.

［7］孔祥峰，印遇龍，伍國耀.豬功能性氨基酸營養(yǎng)研究進展［J］.動物營養(yǎng)學(xué)報，2009，21（1）：1-7.

［8］劉俊鋒，吳琛，孔祥峰，等.精氨酸對妊娠環(huán)江香豬胎兒生長發(fā)育的影響［J］.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)，2011，44（5）：1040-1045.

［9］HE J T，DONG L，XU W，et al.Dietary tributyrin supplementation attenuates insulin resistance and abnormal lipid metabolism in suckling piglets with intrauterine growth retardation［J］.PLoS One，2015，10（8）：e0136848.

［10］XU W，BAI K W，HE J T，et al.Leucine improves growth performance of intrauterine growth retardation piglets by modifying gene and protein expression related to protein synthesis［J］.Nutrition，2016，32（1）：114-121.

［11］石彩霞，王海榮.營養(yǎng)基因組學(xué)在動物營養(yǎng)與飼料科學(xué)研究中的應(yīng)用［J］.飼料研究，2014（1）：13-15，22.

［12］祝倩，姬玉嬌，李華偉，等.高、低營養(yǎng)水平飼糧對妊娠環(huán)江香豬繁殖性能、體成分和血漿生化參數(shù)的影響［J］.動物營養(yǎng)學(xué)報，2016，28（5）：1534-1540.

［13］張蓮英，蘇家聯(lián)，韋朝陽，等.環(huán)江香豬和巴馬香豬生產(chǎn)情況調(diào)查［J］.養(yǎng)殖與飼料，2011（10）：5-7.

［14］JOHNSTON L，TROTTIER N.Nutritional methods to improve sow productivity examined［J］.Feedstuffs，1999，25：12-17.

［15］HALDER J B，ZHAO X，SOKER S，et al.Differential expression of VEGF isoforms and VEGF164-specific receptor neuropilin-1 in the mouse uterus suggests a role for VEGF164 in vascular permeability and angiogenesis during implantation［J］.Genesis，2006，26（3）：213-224.

［16］許英蕾，孫建義.成纖維細(xì)胞生長因子與其受體的研究進展［J］.藥物生物技術(shù)，2004，11（3）：194-198.

［17］嚴(yán)宏祥，黃小燕，徐來仁.妊娠母豬的精氨酸營養(yǎng)與胎兒發(fā)育［J］.飼料廣角，2010（7）：26-27，31.

［18］譚兵兵，王乾興，譚曉珊，等.胎盤絨毛血管生成狀況及VEGF、MMP-2和MMP-9表達與早期自然流產(chǎn)的關(guān)系［J］.生殖與避孕，2006，26（8）：477-482.

［19］SHIBUYA M.Vascular endothelial growth factor and its receptor system：physiological functions in angiogenesis and pathological roles in various diseases［J］.Journal of Biochemistry，2013，153（1）：13-19.

［20］高成，閆小毅，卓巍，等.胚胎發(fā)育中血管新生的研究［J］.中國細(xì)胞生物學(xué)學(xué)報，2015，37（5）：720-727.

［21］CHEN F，WANG T J，F(xiàn)EGN C P，et al.Proteome differences in placenta and endometrium between normal and intrauterine growth restricted pig fetuses［J］.PLoS One，2015，10（11）：e0142396.

［22］DEMIR R，SEVAL Y，HUPPERTZ B.Vasculogenesis and angiogenesis in the early human placenta［J］.Acta Histochemica，2007，109（4）：257-265.

［23］LU Y，XIONG Y，HUO Y Q，et al.Grb-2-associated binder 1（Gab1） regulates postnatal ischemic and VEGF-induced angiogenesis through the protein kinase A-endothelial NOS pathway［J］.Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America，2011，108（7）：2957-2962.

［24］范輝，胡雅兵，王小紅，等.丹紅注射液對重癥急性胰腺炎大鼠胰腺組織ET-1、eNOS和iNOS基因表達的影響［J］.世界華人消化雜志，2009，17（27）：2784-2790.

［25］VALDéS G，CORTHORN J.The angiogenic and vasodilatory utero-placental network［J］.Placenta，2011，32（Suppl.2）：S170-S175.

［26］WU X，YIN Y L，LIU Y Q，et al.Effect of dietary arginine and N-carbamoylglutamate supplementation on reproduction and gene expression ofeNOS，VEGFAandPlGF1 in placenta in late pregnancy of sows［J］.Animal Reproduction Science，2012，132（3/4）：187-192.

Effects of Different Nitrogen/Energy Diets on Expression of Genes Related to Umbilical Vessel Development of PregnantHuanjiangMini-Pigs

ZHU Qian1MA Sicong1JI Yujiao1YIN Yulong1KONG Xiangfeng1，2?
（1.Key Laboratory of Agro-Ecological Processes in Subtropical Region，Hunan Provincial Engineering Research Center of Healthy Livestock，Scientific Observing and Experimental Station of Animal Nutrition and Feed Science in South-Central，Ministry of Agriculture，Institute of Subtropical Agriculture，Chinese Academy of Sciences，Changsha410125，China；2.Research Center of Mini-Pig，Huanjiang Observation and Research Station for Karst Ecosystems，Chinese Academy of Sciences，Huanjiang547100，China）

This study was conducted to investigate the effects of different nitrogen/energy diets on expression of genes related to umbilical vessel development of pregnantHuanjiangmini-pigs.A total of 48 primiparousHuanjiangmini-pigs were randomly assigned into two groups according to the body weight（BW），and reared in eight replicates（pens）with three mini-pigs per replicate.After service，the animals were fed with high nitrogen/energy diet（digestible energy was 14.73 MJ/kg，crude protein content was 13.11%，nitrogen/energy was 0.89）and low nitrogen/energy diet（digestible energy was 12.24 MJ/kg，crude protein content was 9.77%，nitrogen/energy was 0.80），respectively.At 45，75 and 110 d of gestation，one pig was randomly selected and sacrificed from each pen.The umbilical cord tissues were collected from three fetuses with maximal BW，average BW and minimal BW per litter.The expression levels of fibroblast growth factor（FGF），vascular endothelial growth factor（VEGF），vascular endothelial growth factor receptor 2（VEGFR2）and endothelial nitric oxide synthase（eNOS），which related to umbilical vessel development，were detected by RT-qPCR technique.The results showed that compared with the low nitrogen/energy diet group，the high nitrogen/energy diet significantly increased the expression levels of genes related to umbilical vessel development（P＜0.05），includingVEGFandVEGFR2 genes expression levels of fetus at 45 d of gestation with maximal BW；VEGFgene expression level of fetus at 45 d of gestation with average BW；VEGF，VEGFR2 andeNOSgenes expression levels of fetus at 75 d of gestation with maximal BW；VEGFandeNOSgenes expression levels of fetus at 75 d of gestation with average BW，VEGFR2 gene expression level of fetus at 75 d of gestation with minimal BW；FGF，VEGFR2 andeNOSgenes expression levels of fetus at 110 d of gestation with maximal BW，F(xiàn)GFandVEGFR2 genes expression levels of fetus at 110 d of gestation with average BW，andVEGFandeNOSgenes expression levels of fetus at 110 d of gestation with minimal BW.The expression levels of umbilical vessel genes of fetuses in different gestation stages with the same standard BW were different，as well as of fetuses with different standard BW in a same gestation stage.These findings suggest that the high nitrogen/energy diet containing higher levels of protein and amino acids can significantly increase the expression levels of genes related to the umbilical vessel development in pregnantHuanjiangmini-pigs，and the tested gene expression levels are different during different gestation stages，as well as among the fetuses with different standard body weights during a same gestation stage.［Chinese Journal of Animal Nutrition，2017，29（2）：613-619］

Huanjiangmini-pigs；pregnancy；dietary nitrogen/energy ratio；umbilical cord；blood vessel development

S828

A

1006-267X（2017）02-0613-07

10.3969/j.issn.1006-267x.2017.02.030

（責(zé)任編輯 武海龍）

2016-08-01

國家自然科學(xué)基金面上項目（31270044，31572421）；中科院“西部之光”人才培養(yǎng)計劃重點項目

祝 倩（1992—），女，河南周口人，碩士研究生，動物營養(yǎng)與飼料科學(xué)專業(yè)。E-mail：walanzhuqian＠163.com

?通信作者：孔祥峰，研究員，博士生導(dǎo)師，E-mail：nnkxf＠isa.ac.cn

?Corresponding author，professor，E-mail：nnkxf＠isa.ac.cn