飼料中添加活性酵母制劑對(duì)刺參生長、免疫力和抗病力的影響

嚴(yán) 芳胡 煒李成林?張艷萍趙 斌韓 莎

（1.山東省海洋生物研究院，青島 266104；2.青島農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，青島 266109）

飼料中添加活性酵母制劑對(duì)刺參生長、免疫力和抗病力的影響

嚴(yán) 芳1胡 煒1李成林1?張艷萍2趙 斌1韓 莎1

（1.山東省海洋生物研究院，青島 266104；2.青島農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，青島 266109）

本試驗(yàn)旨在研究飼料中添加活性酵母制劑對(duì)刺參生長、免疫力和抗病力的影響。采用單因素試驗(yàn)設(shè)計(jì)，通過在商品配合飼料中分別添加0（對(duì)照）、0.025%、0.050%、0.100%、0.200%和0.400%的活性酵母制劑，配制6種試驗(yàn)飼料，飼喂平均初始體重為（4.0±0.1）g的刺參6周。每種飼料設(shè)3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)放養(yǎng)15頭刺參。6周的養(yǎng)殖試驗(yàn)結(jié)束后，每個(gè)重復(fù)選取10頭刺參，每頭刺參通過體壁注射燦爛弧菌（Vibrio splendidus）菌懸液0.1 mL（菌懸液濃度為1.5× 109CFU/mL），觀察記錄燦爛弧菌攻毒14 d內(nèi)的累計(jì)死亡率。結(jié)果表明：飼料中添加活性酵母制劑能顯著提高刺參的特定生長率（P＜0.05），刺參特定生長率在添加量為0.200%時(shí)最高。飼料中添加活性酵母制劑后，刺參體腔液中過氧化氫酶（CAT）活性顯著增加（P＜0.05）；活性酵母制劑添加量為0.050%～0.400%時(shí)，刺參體腔液中溶菌酶（LZM）活性顯著高于對(duì)照組（P＜0.05）；活性酵母制劑添加量為0.200%～0.400%時(shí)，刺參體腔液中酸性磷酸酶（ACP）活性顯著高于對(duì)照組（P＜0.05）；活性酵母制劑添加量為 0.400%時(shí)，刺參體腔液中超氧化物歧化酶（SOD）活性顯著高于對(duì)照組（P＜0.05）。飼料中添加活性酵母制劑可降低攻毒14 d后刺參的累計(jì)死亡率，活性酵母制劑添加量為0.200%時(shí)，累計(jì)死亡率最低。由此可知，在本試驗(yàn)條件下，飼料中添加活性酵母制劑可促進(jìn)刺參生長，提高免疫力和抗病力。綜合分析刺參的生長、免疫力和抗病力以及實(shí)際生產(chǎn)情況，刺參飼料中活性酵母制劑的適宜添加量為0.200%～0.400%。

活性酵母制劑；刺參；生長；免疫力；抗病力

刺參（Apostichopus japonicus）隸屬于棘皮動(dòng)物門（Echinodermata），海參綱（Holothuroidea），仿刺參屬（Apostichopus），廣泛分布在北緯35°～44°的亞洲沿岸，是典型的溫帶物種。刺參富含大量黏多糖、膠原蛋白，還有各種人體所需微量元素及維生素等，具有益智明目、補(bǔ)腎益精、延緩衰老、防止動(dòng)脈硬化、抗腫瘤以及提高人體免疫力等作用，被列為海產(chǎn)品八珍之首。由于具有極高的營養(yǎng)保健、藥用功能和經(jīng)濟(jì)價(jià)值，刺參需求量不斷增加，使得刺參的養(yǎng)殖業(yè)迅速發(fā)展［1-2］。

隨著刺參高密度養(yǎng)殖的快速發(fā)展及養(yǎng)殖水環(huán)境的不斷惡化，養(yǎng)殖病害也頻繁發(fā)生，病害已成為當(dāng)前制約刺參養(yǎng)殖業(yè)健康持續(xù)發(fā)展的重要因素之一。刺參病害種類多、危害大、突發(fā)性強(qiáng)，以抗生素為主的防治措施又將引起細(xì)菌抗藥性及藥物殘留等問題，對(duì)產(chǎn)品質(zhì)量安全構(gòu)成極大的隱患［3-4］。為了解決養(yǎng)殖病害和產(chǎn)品質(zhì)量安全等諸多問題，研發(fā)綠色環(huán)保的抗生素替代品以及用于提高免疫力和抗病力的免疫增強(qiáng)劑等已成為刺參養(yǎng)殖病害防控的重點(diǎn)，也是目前研究的熱點(diǎn)。

活性酵母制劑作為一種常用的益生素飼料添加劑，在反芻、畜禽和水產(chǎn)動(dòng)物養(yǎng)殖中廣泛應(yīng)用。酵母菌含有極豐富的蛋白質(zhì)，其發(fā)酵產(chǎn)品富含維生素、礦物質(zhì)、消化酶、促生長因子以及肽、多種必需氨基酸和脂肪酸，是繼動(dòng)物蛋白質(zhì)和植物蛋白質(zhì)后的另一類重要蛋白質(zhì)來源。這些特殊營養(yǎng)成分可刺激免疫系統(tǒng)的防御能力，減少腸內(nèi)有毒物質(zhì)的產(chǎn)生，對(duì)機(jī)體免疫功能具有促進(jìn)作用［5-6］。目前有關(guān)活性酵母制劑對(duì)刺參生長、免疫力與抗病力影響的研究尚未見報(bào)道。鑒于此，本試驗(yàn)旨在探討基于刺參飼料中添加不同水平的活性酵母制劑對(duì)刺參生長、免疫力和抗病力的影響，以期為活性酵母制劑在棘皮動(dòng)物配合飼料中的應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

試驗(yàn)在山東省海洋生物研究院種質(zhì)資源研究中心鰲山衛(wèi)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行，試驗(yàn)時(shí)間為2015年10—11月。試驗(yàn)用刺參為山東省海洋生物研究院種質(zhì)資源研究中心培育的健康苗種，初始體重為（4.0± 0.1）g；商品配合飼料購自青島朗格生物技術(shù)有限公司，其基本營養(yǎng)成分含量見表1；活性酵母制劑（粉狀）由廣東溢多利生物科技股份有限公司提供，主要成分為活性酵母菌及其發(fā)酵產(chǎn)品，其活菌數(shù)為1.0×1010CFU/g；攻毒試驗(yàn)所用燦爛弧菌（Vibrio splendidus）由山東省海水養(yǎng)殖病害防治重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室提供。

表1 商品配合飼料基本營養(yǎng)成分含量（干物質(zhì)基礎(chǔ)）Table 1 Basic nutritional component contents of the commercial formula feed（DM basis） %

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)用刺參隨機(jī)分為6組，每組設(shè)3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)15頭刺參，以重復(fù)為單位飼養(yǎng)于45 cm× 35 cm×30 cm的塑料整理箱中，養(yǎng)殖試驗(yàn)持續(xù)6周。以投喂商品配合飼料刺參組為對(duì)照組，在商品配合飼料中分別添加0.025%、0.050%、0.100%、0.200%、0.400%的活性酵母制劑，充分混勻后配制成5種試驗(yàn)飼料，分別投喂5組刺參作為試驗(yàn)組。每天16：00投喂飼料l次。試驗(yàn)期間，水體鹽度30.2～31.4，pH 8.1±0.2，水溫17～20℃，連續(xù)微量充氣，每天全量換水1次，換水前后水溫差小于0.5℃、鹽度差小于0.5。

1.3 樣品采集及分析測試方法

試驗(yàn)開始前，停止投喂1 d，將每個(gè)整理箱內(nèi)刺參取出稱其濕體重，為初始體重，稱重時(shí)用吸水紙吸干刺參體表水分，避免體表水分所引起的稱量誤差。6周的養(yǎng)殖試驗(yàn)結(jié)束后，停食1 d，然后對(duì)每個(gè)重復(fù)進(jìn)行計(jì)數(shù)，稱重（終末體重），以計(jì)算特定生長率（specific growth rate，SGR）。分別從每個(gè)整理箱中隨機(jī)抽取5頭刺參，取體腔液測定其免疫指標(biāo)。體腔液超氧化物歧化酶（SOD）、過氧化氫酶（CAT）、堿性磷酸酶（ACP）和溶菌酶（LZM）活性均采用南京建成生物工程研究所生產(chǎn)的試劑盒，利用分光光度計(jì)測定，其原理、測定方法及酶活性單位定義均參照試劑盒說明書。取樣后的各組剩余刺參用于攻毒試驗(yàn)。

1.4 攻毒試驗(yàn)

6周的養(yǎng)殖試驗(yàn)結(jié)束后進(jìn)行攻毒試驗(yàn)。將燦爛弧菌用胰蛋白胨大豆肉湯（TSB）培養(yǎng)基28℃培養(yǎng) 24 h，用無菌 生 理鹽水稀 釋 至 1.5× 109CFU/mL（通過預(yù)試驗(yàn)得到半數(shù)致病量為1× 108CFU/mL），每頭刺參通過體壁注射菌懸液0.1 mL。攻毒后各組刺參繼續(xù)投喂養(yǎng)殖試驗(yàn)時(shí)對(duì)應(yīng)的飼料。觀察記錄攻毒后14 d內(nèi)刺參的發(fā)病情況，統(tǒng)計(jì)其累計(jì)死亡率。

1.5 計(jì)算公式

刺參存活率（survival rate，SR）、特定生長率和累計(jì)死亡率計(jì)算公式如下：

式中：N0和Nt分別為刺參初始頭數(shù)和終末頭數(shù)；W0和Wt分別為刺參初始體重和終末體重；t為試驗(yàn)天數(shù)；D0和Dt分別為攻毒過程中刺參初始頭數(shù)和累積死亡頭數(shù)。

1.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

試驗(yàn)所得數(shù)據(jù)表示為平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤（n≥3），用單因素方差分析（one-way ANOVA）和Tukey’s檢驗(yàn)進(jìn)行差異顯著性統(tǒng)計(jì)分析，以P＜0.05作為差異的顯著性水平。

2 結(jié)果與分析

2.1 飼料中添加活性酵母制劑對(duì)刺參生長的影響

從表2可以看出，經(jīng)過6周的養(yǎng)殖試驗(yàn)，與對(duì)照組相比，5個(gè)試驗(yàn)組刺參特定生長率均顯著高于對(duì)照組（P＜0.05）。當(dāng)飼料中活性酵母制劑添加量在0.025%～0.200%時(shí)，刺參特定生長率隨著活性酵母制劑添加量的增加而升高，在添加量為0.200%時(shí)達(dá)到最高，為對(duì)照組的3.06倍；當(dāng)活性酵母制劑添加量繼續(xù)增加至0.400%時(shí)，刺參特定生長率稍有下降，為對(duì)照組的2.50倍。試驗(yàn)期間，試驗(yàn)組和對(duì)照組刺參的存活率均為100%。結(jié)果表明，飼料中添加活性酵母制劑能顯著提高刺參特定生長率，有效促進(jìn)刺參生長。

表2 飼料中添加活性酵母制劑對(duì)刺參存活率及特定生長率的影響Table 2 Effects of dietary active yeast products on survival rate and specific growth rate of sea cucumber（Apostichopus japonicasSelenka）（n＝3）

2.2 飼料中添加活性酵母制劑對(duì)刺參體腔液免疫指標(biāo)的影響

飼料中添加不同水平的活性酵母制劑，經(jīng)6周飼養(yǎng)后，隨機(jī)取樣進(jìn)行了刺參體腔液免疫指標(biāo)的測定，結(jié)果見表3。飼料中活性酵母制劑添加量為0.025%～0.200%時(shí)，刺參體腔液中SOD活性均有升高，但與對(duì)照組相比沒有顯著差異（P＞0.05），當(dāng)添加量為0.400%時(shí)，刺參體腔液中SOD活性最高，顯著高于對(duì)照組（P＜0.05）；飼料中添加不同水平活性酵母制劑后，刺參體腔液中CAT活性均顯著高于對(duì)照組（P＜0.05），其中以0.400%活性酵母制劑組的CAT活性最高，達(dá)到3.67 U/mL，為對(duì)照組的1.96倍；當(dāng)飼料中活性酵母制劑添加量為0.025%～0.100%時(shí)，刺參體腔液中ACP的活性呈現(xiàn)不同程度的升高，但與對(duì)照組相比沒有顯著差異（P＞0.05），而當(dāng)添加量為0.200%～0.400%時(shí)，刺參體腔液中 ACP活性顯著高于對(duì)照組（P＜ 0.05），其中以0.400%活性酵母制劑組的ACP活性最高，為1.04 U/dL；飼料中活性酵母制劑添加量為0.025%時(shí)，刺參體腔液中LZM活性與對(duì)照組相比沒有顯著差異（P＞0.05），當(dāng)添加量為0.050%～0.400%時(shí)，刺參體腔液中LZM活性顯著高于對(duì)照組（P＜0.05），其中以0.400%活性酵母制劑組的LZM活性最高，達(dá)到0.50 μg/mL。結(jié)果表明，飼料中添加0.025%～0.400%活性酵母制劑能不同程度地提高刺參體腔液中SOD、CAT、ACP和LZM活性。

2.3 飼料中添加活性酵母制劑對(duì)刺參抗病力的影響

刺參經(jīng)燦爛弧菌人工攻毒4 d后，對(duì)照組刺參開始出現(xiàn)不同程度的發(fā)病癥狀，從表觀癥狀觀察發(fā)現(xiàn)，刺參活力呈現(xiàn)明顯下降，身體萎縮，口圍腫脹，且有個(gè)別刺參出現(xiàn)了排臟現(xiàn)象；攻毒5 d后，發(fā)病刺參腹部出現(xiàn)小面積潰瘍，至第7天時(shí)，發(fā)病刺參潰瘍處增多，表皮大面積腐爛，并伴有大量黏液，最后死亡。各試驗(yàn)組刺參均比對(duì)照組刺參出現(xiàn)病癥時(shí)間晚，且發(fā)病的個(gè)體數(shù)量少。經(jīng)燦爛弧菌人工攻毒8 d后，0.025%活性酵母制劑組才開始出現(xiàn)刺參死亡。隨后，各組死亡刺參數(shù)逐日增加。攻毒14 d后，對(duì)照組刺參累計(jì)死亡率高達(dá)56.67%，明顯高于各試驗(yàn)組；5個(gè)試驗(yàn)組中，以活性酵母制劑添加量為0.025%時(shí)刺參累計(jì)死亡率最高，為 30.00%；以活性酵母制劑添加量為0.200%時(shí)刺參累計(jì)死亡率最低，為6.67%（圖1）。由此可知，飼料中添加活性酵母制劑能有效增強(qiáng)刺參抗?fàn)N爛弧菌感染能力，降低發(fā)病率，減少死亡率。

表3 飼料中添加活性酵母制劑對(duì)刺參體腔液免疫指標(biāo)的影響Table 3 Effects of dietary active yeast products on immune indices in coelomic fluid of sea cucumber（Apostichopus japonicasSelenka）（n＝3）

圖1 燦爛弧菌人工攻毒14 d后刺參的累計(jì)死亡率Fig.1 Cumulative mortality of sea cucumber（Apostichopus japonicasSelenka）challenged withVibrio splendidusafter 14 days（n＝3）

3 討 論

3.1 飼料中添加活性酵母制劑對(duì)刺參生長的影響

酵母細(xì)胞中含有豐富的蛋白質(zhì)、有機(jī)物和礦物質(zhì)等，其中含有16種氨基酸、14種礦物質(zhì)、17種維生素（不包括維生素A、維生素C、維生素E）以及硒、鐵、鋅、鉻等其他微量元素。酵母細(xì)胞壁的主要組成成分是糖類，其含量為35%～60%，其中最主要的是酵母多糖，即甘露寡聚糖和葡聚糖；同時(shí)，酵母細(xì)胞中還包含有多種色素和未知的生長活性因子，是養(yǎng)殖動(dòng)物的一種很好的營養(yǎng)源［7］。眾多研究表明，酵母生物飼料能有效促進(jìn)水產(chǎn)動(dòng)物生長，在飼料中添加酵母培養(yǎng)物能夠顯著提高草魚［8］、牙鲆［9］、魚［10］、異育銀鯽［11］、凡納濱對(duì)蝦［12］等水產(chǎn)動(dòng)物的特定生長率，并顯著降低飼料系數(shù)。張琴等［13］研究發(fā)現(xiàn)，飼料中添加酵母硒可顯著提高刺參的特定生長率；陳昌福等［14］用添加不同水平活性干酵母的飼料飼喂中華絨螯蟹，結(jié)果發(fā)現(xiàn)添加活性干酵母對(duì)中華絨螯蟹的生長有明顯促進(jìn)作用。本試驗(yàn)結(jié)果表明，飼料中添加0.025%～0.400%活性酵母制劑能顯著提高刺參的特定生長率，有效促進(jìn)刺參生長，其原因可能為：活性酵母制劑富含各種營養(yǎng)物質(zhì)以及多種未知的生長活性因子，為刺參的生長發(fā)育提供了較為全面的營養(yǎng)物質(zhì)；同時(shí)，活性酵母菌制劑具有較強(qiáng)的淀粉酶、蛋白酶和脂肪酶活性，可促進(jìn)機(jī)體對(duì)營養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收［15］；此外，酵母作為活菌前體進(jìn)入胃腸道后，與腸道內(nèi)有益菌群共生，并與病原微生物競爭氧氣、營養(yǎng)等物質(zhì)，排斥病原菌在腸道黏膜表面的附著，抑制病原微生物的吸附作用，降低病原菌對(duì)腸道的損害，維持腸道健康，更有利于生長，并有效抵御了病原微生物，減少病害發(fā)生［16］。

3.2 飼料中添加活性酵母制劑對(duì)刺參免疫力的影響

刺參除了細(xì)胞免疫外還有著多種對(duì)抗外界病原及異物的體液免疫，由于刺參只具有非特異性免疫，因此這些免疫指標(biāo)在刺參體液免疫中起著不可替代的重要作用。CAT和SOD都是生物體清除活性氧、免受細(xì)胞氧化傷害的主要抗氧化酶類，在防御機(jī)體衰老和生物分子損傷等方面有著極為重要的作用［17］。本試驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，飼料中添加0.025%～0.400%活性酵母制劑后，刺參體腔液中CAT活性顯著高于對(duì)照組，SOD活性在添加量為0.400%時(shí)與對(duì)照組有顯著差異，說明飼料中添加活性酵母制劑能提高刺參機(jī)體的抗氧化能力。ACP是動(dòng)物體內(nèi)巨噬細(xì)胞溶酶體的標(biāo)志酶，在酸性條件下，ACP可通過水解作用來破壞掉表面帶有磷酸酯的異物，并能修飾或改變細(xì)菌等外來異物的表面分子結(jié)構(gòu)組成等，從而加快對(duì)異物的吞噬和清除速度，在刺參抵抗疾病、免疫應(yīng)答及細(xì)胞損傷與修復(fù)過程中具有一定的生物學(xué)意義［18］。本研究中，試驗(yàn)組體腔液中ACP活性均高于對(duì)照組，在添加量為0.200%～0.400%時(shí)與對(duì)照組有顯著差異，表明飼料中添加適量的活性酵母制劑能促進(jìn)刺參對(duì)生物磷的代謝能力，從而影響并促進(jìn)刺參的生長，這與活性酵母制劑能提高刺參特定生長率的結(jié)果呈正相關(guān)；同時(shí)，體腔液中ACP活性的升高也代表了刺參吞噬細(xì)胞清除異物能力的提高，即刺參免疫力的提高和抗病力的增強(qiáng)。LZM是一種堿性蛋白酶，廣泛存在于生物體各組織和體液中，它通過溶解細(xì)菌或作為一種調(diào)理素而起到抗菌效果，是無脊椎動(dòng)物非特異性免疫的主要成分之一［19］。 劉宗英［20］研究發(fā)現(xiàn)，在中華鱉幼鱉飼料中添加高活性干酵母能提高其血清中LZM的活性；溫?。?］研究表明，飼料中添加復(fù)合益生菌與酵母培養(yǎng)物能提高牙鲆血清中LZM的活性。本試驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，飼料中添加0.025%～0.400%活性酵母制劑亦能提高刺參體腔液中LZM的活性，當(dāng)添加量在0.050%～0.400%時(shí)，體腔液中LZM活性均顯著高于對(duì)照組，這與上述學(xué)者的研究結(jié)果相一致。

由此可知，飼料中添加活性酵母制劑能有效提高刺參的非特異性免疫力，這可能與活性酵母制劑中含有的β-葡聚糖、甘露寡聚糖等有關(guān)。β-葡聚糖能夠直接結(jié)合并激活巨噬細(xì)胞，提高巨噬細(xì)胞的吞噬作用，增加細(xì)胞因子的釋放等。甘露寡聚糖能對(duì)病原微生物進(jìn)行識(shí)別、黏附和排除，干擾有害細(xì)菌在腸道內(nèi)定植，減少腸道細(xì)菌病，還可有效增加細(xì)胞因子的釋放，并對(duì)毒素具有明顯的吸附作用［21］。飼料中添加β-葡聚糖和甘露寡聚糖能有效提高水產(chǎn)動(dòng)物機(jī)體免疫力，從而提高水產(chǎn)動(dòng)物的抗病力［22-26］。

3.3 飼料中添加活性酵母制劑對(duì)刺參抗病力的影響

研究表明，酵母源生物飼料對(duì)提高水產(chǎn)動(dòng)物抗病力有十分積極的意義［21，27］。 劉宗英［20］研究發(fā)現(xiàn)，飼料中添加高活性干酵母能有效提高中華鱉和中華絨螯蟹的抗病力；陳昌福等［14］亦發(fā)現(xiàn)，活性干酵母對(duì)中華絨螯蟹的抗病力有增強(qiáng)作用；溫?。?］研究表明，飼料中添加復(fù)合益生菌與酵母培養(yǎng)物能提高牙鲆抗病力。通過人工感染病原體的方式檢測供試動(dòng)物對(duì)疾病的抵抗力是常用方法，燦爛弧菌是刺參腐皮綜合征的致病菌，對(duì)刺參養(yǎng)殖危害嚴(yán)重［3］。燦爛弧菌攻毒試驗(yàn)結(jié)果表明，飼料中添加活性酵母制劑能明顯降低刺參的累計(jì)死亡率，表明活性酵母制劑能有效提高刺參抗?fàn)N爛弧菌感染能力，這與刺參的非特異性免疫指標(biāo)有著相似的規(guī)律。因此，可以認(rèn)為刺參攝食活性酵母制劑后通過提高機(jī)體的非特異性免疫力，從而增強(qiáng)抵抗病原菌感染的能力。本試驗(yàn)中，以活性酵母制劑添加量為0.200%時(shí)刺參累計(jì)死亡率最低，僅為6.67%。

4 結(jié) 論

綜上所述，飼料中添加活性酵母制劑可提高刺參的特定生長率，提高刺參體腔液中 LZM、SOD、CAT和ACP活性，有效提高刺參的免疫力和抗病力，這說明活性酵母制劑可以作為一種安全高效的飼料添加劑應(yīng)用于刺參養(yǎng)殖。綜合分析刺參的生長、免疫力和抗病力等情況，在刺參養(yǎng)殖過程中，飼料中活性酵母制劑的適宜添加量為0.200%～0.400%。

［1］李成林，宋愛環(huán)，胡煒，等.山東省刺參養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)現(xiàn)狀分析與可持續(xù)發(fā)展對(duì)策［J］.漁業(yè)科學(xué)進(jìn)展，2010，31（4）：126-133.

［2］王吉橋，田相利.刺參養(yǎng)殖生物學(xué)新進(jìn)展［M］.北京：海洋出版社，2012：3-13.

［3］王印庚，榮小軍，廖梅杰，等.刺參健康養(yǎng)殖與病害防控技術(shù)叢解［M］.北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2014：1-2.

［4］楊紅生，周毅，張濤.刺參生物學(xué)——理論與實(shí)踐［M］.北京：科學(xué)出版社，2014：8-9.

［5］胡友軍，林映才，鄭黎，等.活性酵母對(duì)早期斷奶仔豬生產(chǎn)性能和免疫機(jī)能的影響［J］.動(dòng)物營養(yǎng)學(xué)報(bào)，2003，15（4）：49-53.

［6］王玲，蒲萬霞，扎西英派，等.活性酵母制劑對(duì)早期斷乳仔豬腹瀉率、生產(chǎn)性能和腸道pH值的研究［J］.中國獸藥雜志，2008，42（9）：1-5.

［7］南瑞青.活性酵母與支鏈淀粉對(duì)犢牛生長發(fā)育及血液生理生化指標(biāo)影響的研究［D］.碩士學(xué)位論文.太谷：山西農(nóng)業(yè)大學(xué)，2013.

［8］邱燕.三種微生態(tài)制劑對(duì)草魚（Ctenopharyngodon idellus）生長性能、生理機(jī)能及腸道黏膜的影響［D］.碩士學(xué)位論文.蘇州：蘇州大學(xué)，2010.

［9］溫俊.復(fù)合益生菌與酵母培養(yǎng)物對(duì)牙鲆（Paralichthys olivaceus）生長、免疫及抗病力的影響［D］.碩士學(xué)位論文.青島：中國海洋大學(xué)，2007.

［10］ROBINETTE H R，YOUNG C，孟繁伊.酵母培養(yǎng)物對(duì)斑點(diǎn)叉尾幼魚生長性能的影響［J］.飼料工業(yè)，2011，32（6）：25-27.

［11］徐磊，劉波，謝駿，等.酵母培養(yǎng)物對(duì)異育銀鯽生長、血液生化及免疫的影響［J］.江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2010（6）：371-374.

［12］粟雄高，李小勤，冷向軍，等.酵母培養(yǎng)物和芽孢桿菌對(duì)凡納濱對(duì)蝦生長、蛋白酶活性和免疫性能的影響［J］.海洋漁業(yè)，2012，34（2）：168-176.

［13］張琴，麥康森，張文兵，等.飼料中添加硒酵母和維生素E對(duì)刺參生長、免疫力及抗病力的影響［J］.動(dòng)物營養(yǎng)學(xué)報(bào)，2011，23（10）：1745-1755.

［14］陳昌福，姚鵑，肖志猛，等.高活性干酵母對(duì)中華絨螯蟹生長和抗病力的影響［J］.長江大學(xué)學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版，2005，2（5）：24-26.

［15］廖燦青，陳中平，王健林，等.活性酵母及其培養(yǎng)物對(duì)仔豬生產(chǎn)性能和免疫功能的影響［J］.中國飼料，2015（13）：42-43.

［16］白曉婷.酵母類產(chǎn)品在飼料中的研究與應(yīng)用［J］.中國飼料，2005（2）：8-10.

［17］王吉橋，王志香，張凱，等.飼料中添加蛋氨酸硒對(duì)仿刺參幼參存活、生長及免疫指標(biāo)的影響［J］.大連海洋大學(xué)學(xué)報(bào)，2012，27（2）：110-115.

［18］秦搏，陳四清，常青，等.飼料中添加纖維素酶對(duì)幼刺參生長性能、消化能力和非特異性免疫力的影響［J］.動(dòng)物營養(yǎng)學(xué)報(bào)，2014，26（9）：2698-2705.

［19］宋堅(jiān)，何舟，程龍，等.飼料添加苜蓿草粉對(duì)刺參幼參生長、體成分及免疫酶的影響［J］.草業(yè)學(xué)報(bào)，2015，24（2）：208-214.

［20］劉宗英.高活性干酵母對(duì)水產(chǎn)動(dòng)物非特異性免疫功能和抗病力的影響［D］.碩士學(xué)位論文.武漢：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)，2005.

［21］許合金，馮幼，劉定，等.β-葡聚糖及其在對(duì)蝦生產(chǎn)中的應(yīng)用［J］.飼料博覽，2013（3）：28-31.

［22］馮幼，鐘文彪，許合金，等.甘露寡糖在水產(chǎn)動(dòng)物生產(chǎn)中的應(yīng)用［J］.飼料博覽，2013（5）：51-54.

［23］YU H H，HAN F，XUE M，et al.Efficacy and tolerance of yeast cell wall as an immunostimulant in the diet of Japanese seabass（Lateolabrax japonicus）［J］.Aquaculture，2014，432：217-224.

［24］MESHRAM S J，MURTHY H S，ALI H，et al.Effect of dietary β-glucan on immune response and disease resistance againstAeromonashydrophilain giant freshwater prawn，Macrobrachium rosenbergii（de Man.1879）［J］.Aquaculture International，2015，23（2）：439-447.

［25］TORRECILLAS S，MAKOL A，CABALLERO M J，et al.Effects on mortality and stress response in European sea bass，Dicentrarchus labrax（L.），fed mannan oligosaccharides（MOS）afterVibrio anguillarumexposure［J］.Journal of Fish Diseases，2012，35（8）：591-602.

［26］聶琴，楊凡，易建華，等.酵母源生物飼料在水產(chǎn)養(yǎng)殖中的應(yīng)用［J］.中國飼料，2015（15）：35-40.

［27］郁歡歡，周文豪，曾虹，等.酵母培養(yǎng)物在水產(chǎn)動(dòng)物中的應(yīng)用及作用機(jī)理研究進(jìn)展［J］.飼料工業(yè)，2015，36（18）：25-29.

Effects of Dietary Active Yeast Products on Growth，Immunity and Disease Resistance of Sea Cucumber（Apostichopus japonicasSelenka）

YAN Fang1HU Wei1LI Chenglin1?ZHANG Yanping2ZHAO Bin1HAN Sha1
（1.Marine Biology Institute of Shandong Province，Qingdao266104，China；2.College of Life Science，Qingdao Agricultural University，Qingdao266109，China）

This experiment was conducted to investigate the effects of dietary active yeast products on growth，immunity and disease resistance of sea cucumber（Apostichopus japonicasSelenka）.Sea cucumbers with an average initial body weight of（4.0±0.1）g were fed with 6 experimental diets according to a single factor experimental design：a commercial formula feed supplemented with 0（control），0.025%，0.050%，0.100%，0.200%and 0.400%active yeast products for 6 weeks.There were 3 replicates per diet with 15 sea cucumbers per replicate.After 6 weeks of feeding trial，a total of 10 sea cucumbers of each replicate were selected and injected into the body wall with the 1.5×109CFU/mLVibrio splendidusbacterial stock solution at a dose of 0.1 mL per sea cucumber，and to observe and record the 14-day accumulative morbidity after challenged withVibrio splendidus.The results showed as follows：supplementation of active yeast products could significantly enhance the specific growth rate（SGR）（P＜0.05），and the highest SGR of sea cucumbers were found in 0.200%active yeast products group.Sea cucumbers fed diet with active yeast products could significantly increase the activity of catalase（CAT）in coelomic fluid（P＜0.05）.Compared with the control group，active yeast products supplemented at 0.050%to 0.400%significantly enhanced the activity of lysozyme（LZM）（P＜0.05）in coelomic fluid，supplemented at 0.200%to 0.400%significantly enhanced the activity of acid phosphatase（ACP）（P＜0.05）in coelomic fluid，and supplemented at 0.400%significantly enhanced the activity of superoxide dismutase（SOD）in coelomic fluid（P＜0.05）.Supplementation of active yeast products could decrease the cumulative mortality of sea cucumbers challenged withVibrio splendidusafter 14 days，and the lowest cumulative mortality of sea cucumbers was found in 0.200%active yeast products group.It can be concluded that the supplementation of active yeast products in diets can enhance the growth，immunity and disease resistance of sea cucumbers in the condition of this experiment.Comprehensive analysis of growth，immunity and disease resistance of sea cucumbers and according to the production practice，the optimal supplemental level of active yeast products in the diet of sea cucumbers is 0.200%to 0.400%.［Chinese Journal of Animal Nutrition，2017，29（2）：583-589］

active yeast products；sea cucumber；growth；immunity；disease resistance

S963

A

1006-267X（2017）02-0583-07

10.3969/j.issn.1006-267x.2017.02.026

（責(zé)任編輯 菅景穎）

2016-08-19

山東省現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)體系刺參產(chǎn)業(yè)創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)建設(shè)（SDAIT-22-01，SDAIT-22-05）；山東省科技發(fā)展計(jì)劃（2014GNC111022）；山東省農(nóng)業(yè)良種工程（2014-2016）；國家海洋局海洋公益性行業(yè)科研專項(xiàng)經(jīng)費(fèi)（201305001-4）；山東省農(nóng)業(yè)科技成果轉(zhuǎn)化資金項(xiàng)目（2014-2016）

嚴(yán) 芳（1983—），女，湖南長沙人，助理研究員，博士，從事水產(chǎn)動(dòng)物免疫與病害和水產(chǎn)動(dòng)物營養(yǎng)與飼料研究。E-mail：yf_dolphin＠163.com

?通信作者：李成林，研究員，碩士生導(dǎo)師，E-mail：lcl_xh＠hotmail.com

?Corresponding author，professor，E-mail：lcl_xh＠hotmail.com