特定蛋白分析儀測(cè)定尿微量蛋白的性能分析

朱懿

摘要：目的 微量白蛋白尿是指在尿中出現(xiàn)微量白蛋白。白蛋白是一種血液中的正常蛋白質(zhì)，但在生理?xiàng)l件下尿液中僅出現(xiàn)極少量白蛋白。微量白蛋白尿反映腎臟異常滲漏蛋白質(zhì)。尿微量白蛋白排出量的增加是疾病早期的改變，對(duì)疾病的早期診斷，早期治療有重要的參考價(jià)值和臨床意義[1]。大量的臨床研究表明，尿微量白蛋白是預(yù)測(cè)糖尿病、高血壓、心血管疾病、血管損傷的敏感指標(biāo)[2]。目前國際上十分重視尿微量白蛋白的測(cè)定，認(rèn)為這項(xiàng)指標(biāo)對(duì)早期治療原發(fā)病、分析病程進(jìn)展、評(píng)價(jià)相關(guān)危險(xiǎn)因素具有重要意義。我院原先使用日立7060生化儀測(cè)定尿微量蛋白，現(xiàn)為了節(jié)約成本引進(jìn)NEPHSTAR特定蛋白分析儀，對(duì)此在重復(fù)性、精密度、污染評(píng)估等方面的性能進(jìn)行分析 ，研究其對(duì)臨床的參考價(jià)值。方法 采用隨機(jī)抽樣的方法，取中、高水平兩組，各獲得20例數(shù)據(jù)，對(duì)其日間、批內(nèi)的均值、標(biāo)準(zhǔn)差、變異系數(shù)進(jìn)行計(jì)算，從而對(duì)得到的數(shù)據(jù)進(jìn)行性能分析。1/4允許誤差范圍為批內(nèi)不精密度判斷限，1/3允許誤差為天間不精密度判斷限。小于或等于判斷限的，檢測(cè)系統(tǒng)的不精密度屬可接受；大于判斷限的表示不精密度不符合要求。并與日立7060生化儀進(jìn)行對(duì)比，通過進(jìn)行t檢驗(yàn)，了解其可比性。設(shè)計(jì)干擾試驗(yàn)、線性試驗(yàn)，測(cè)定檢出限。結(jié)果 通過對(duì)抽樣的兩組中水平和高水平的尿微量蛋白的20組數(shù)據(jù)進(jìn)行計(jì)算，求得中、高水平批內(nèi)、天間的均數(shù)、標(biāo)準(zhǔn)差、變異系數(shù)。允許誤差EA為10%，通過統(tǒng)計(jì)學(xué)公式求得中水平：批內(nèi)1.48%<2.5%；天間2.46%<3.3%；高水平：批內(nèi)2.17%<2.5%；天間2.5%<3.3%。數(shù)據(jù)都小于判斷限，即檢測(cè)系統(tǒng)的不精密度屬于可接受范圍。而于日立7060生化儀的對(duì)比，通過計(jì)算t檢驗(yàn)可知，兩者間數(shù)值的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。在10～2000 mg/L范圍內(nèi)的線性良好。檢出限1.48 mg/L。甲苯濃度在10 mg/L以下對(duì)該法測(cè)量無顯著干擾。結(jié)論 通過對(duì)NEPHSTAR特定蛋白分析儀的性能評(píng)估。從重復(fù)性、精密度、線性評(píng)估、干擾實(shí)驗(yàn)等各方面及與日立7060生化儀的對(duì)比等方面進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)學(xué)的比較，得知其性能的穩(wěn)定結(jié)果的可靠，因此對(duì)測(cè)得的尿微量蛋白數(shù)據(jù)質(zhì)量有所保證。

關(guān)鍵詞：尿微量白蛋白；特定蛋白分析儀；散射比濁

尿蛋白測(cè)定的方法眾多，如化學(xué)法、染料結(jié)合法和比濁法等。雙縮脲法靈敏度低；染料結(jié)合法對(duì)各種蛋白結(jié)合率不同，結(jié)果差異大；而比濁法操作簡(jiǎn)單[4]，應(yīng)用散射比濁法在NEPHSTAR特定蛋白分析儀上測(cè)定尿微量白蛋白，并分析其性能。

1 資料與方法

1.1儀器 NEPHSTAR 特定蛋白分析儀。

1.2試劑及其他材料 mALB抗血清，mALB緩沖液，移液器，攪拌子等。

1.3標(biāo)本 選擇本院內(nèi)、外科送檢患者新鮮尿液標(biāo)本。如見明顯渾濁必須離心后才可測(cè)定。隨機(jī)抽取40例標(biāo)本分別用特定蛋白分析儀及日立7060在同一天測(cè)定所有結(jié)果總和的均數(shù)。并從中選擇中、高水平的數(shù)據(jù)做精密度試驗(yàn)。另取一批做干擾試驗(yàn)及求檢出限。

1.4方法 用散射比濁法，嚴(yán)格按照說明書，嚴(yán)謹(jǐn)規(guī)范操作。

2 結(jié)果

2.1線性試驗(yàn) 用尿蛋白含量為10 mg/L的患者低值尿液對(duì)尿蛋白含量為2000mg/L的高值尿液分別進(jìn)行1，1.5，2，2.5，3倍比例稀釋，然后用散射比濁法進(jìn)行測(cè)定，重復(fù)測(cè)定4次取均值，結(jié)果線性方程為Y=0.957X+5.59，相關(guān)系數(shù)（r）=0.999，在此范圍內(nèi)線性良好。

2.2精密度評(píng)價(jià) 選取送檢患者中、高水平的新鮮尿液，分別做批內(nèi)、天間測(cè)定，測(cè)定所獲得20組數(shù)據(jù)，見表1。

通過統(tǒng)計(jì)學(xué)公式分別計(jì)算其均值、標(biāo)準(zhǔn)差、變異系數(shù)，并通過10%的允許誤差，判斷其指標(biāo)，見表2。

2.3極限評(píng)估 NEPHSTAR 特定蛋白分析儀 的生物檢測(cè)限為4.9 mg/L，并對(duì)20份試劑空白進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算出其最低檢出限1.48 mg/L。

2.4與日立7060生化儀的比較 本法同日立7060生化儀同時(shí)測(cè)定40份尿液標(biāo)本，χ2分別為109.3和102.6，通過配對(duì)t檢驗(yàn)，t=1.5，P>0.05，兩者無顯著差異。

2.5干擾試驗(yàn) 在一系列不同濃度的甲苯溶液中以1/10體積摻入蛋白含量為150 mg/L和750 mg/L的尿液標(biāo)本中，用散射比濁法測(cè)定摻入前后的尿蛋白量，甲苯在10 ml/l以下對(duì)該試驗(yàn)無顯著干擾。

濁度對(duì)該法的干擾，如呈明顯渾濁狀態(tài)，則數(shù)據(jù)無法獲得，機(jī)器顯示空白太高，必須離心后重新測(cè)定才能獲得數(shù)據(jù)。

3 討論

3.1尿微量蛋白與疾病，見表3。

3.2尿微量蛋白測(cè)定的注意事項(xiàng) 試劑盒在未開啟前應(yīng)存于2℃～8℃，在試劑盒標(biāo)出的有效期前使用。不要冷凍。緩沖液在使用前應(yīng)平衡至室溫（18℃～26℃）。開啟后，應(yīng)擰緊瓶蓋，抗血清和質(zhì)控存于2℃～8℃，緩沖液存于室溫。

使用新鮮尿液，尿液在2℃～8℃儲(chǔ)存最長(zhǎng)不超過72 h，冷凍在-20℃或更低溫度則可儲(chǔ)存更長(zhǎng)時(shí)間。凍融尿液不超過1次。

微生物污染、渾濁的樣品都不適合用散射比濁檢測(cè)[5]，除非經(jīng)過離心或其他方法處理過。

樣品的濃度>1900 mg/L會(huì)出現(xiàn)抗原過剩的情況，此時(shí)測(cè)量值可能會(huì)意想不到的低，從而會(huì)給出誤導(dǎo)的結(jié)果。如果懷疑有這種情況則要進(jìn)一步稀釋樣品至1/11后重新測(cè)量（400 μl樣品稀釋液+40 μl樣品）。

4 結(jié)論

通過對(duì)NEPHSTAR特定蛋白分析儀測(cè)定尿微量蛋白獲得的數(shù)據(jù)，從其各方面對(duì)其性能進(jìn)行分析。了解到中、高水平的批內(nèi)、天間的不精密度均在允許范圍，符合要求。線性實(shí)驗(yàn)、干擾實(shí)驗(yàn)、及與日立7060生化儀的對(duì)比實(shí)驗(yàn)均有價(jià)值。所以國塞特定蛋白分析儀在測(cè)定尿微量蛋白方面具有較好的重復(fù)性、精密度、穩(wěn)定性，并且價(jià)格低廉。

參考文獻(xiàn)：

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編輯/肖慧