宮頸癌組織中人類黑色素瘤相關(guān)抗原A3表達(dá)變化及其意義

高新萍，何海鵬，梁義娟，張惠，劉桂玲

(1河北大學(xué)附屬醫(yī)院，河北保定0710002；2河北大學(xué))

宮頸癌組織中人類黑色素瘤相關(guān)抗原A3表達(dá)變化及其意義

高新萍1，何海鵬2，梁義娟1，張惠1，劉桂玲1

(1河北大學(xué)附屬醫(yī)院，河北保定0710002；2河北大學(xué))

目的 觀察宮頸癌組織中人類黑色素瘤相關(guān)抗原A3(MAGE-A3)的表達(dá)變化，分析其與腫瘤臨床病理參數(shù)及預(yù)后的關(guān)系。方法 收集宮頸癌組織76例、宮頸上皮內(nèi)瘤變(CIN)組織40例、正常宮頸組織標(biāo)本25例，采用免疫組化SP法檢測(cè)MAGE-A3，分析MAGE-A3表達(dá)與患者年齡、FIGO分期、組織病理學(xué)分級(jí)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及陰道殘端癌累及的關(guān)系。收集70例宮頸癌患者的術(shù)后隨訪資料，采用Kaplan-Meier生存曲線分析MAGE-A3表達(dá)與患者預(yù)后的關(guān)系。結(jié)果 宮頸癌組織、CIN組織、正常宮頸組織中MAGE-A3陽性表達(dá)率分別為53.94%、7.50%、0，組間兩兩相比，P均<0.05。FIGO分期Ⅱa1期宮頸癌組織中MAGE-A3陽性表達(dá)率高于Ⅰ期者(P<0.05)。病理分級(jí)為G1、G2、G3的宮頸癌組織中MAGE-A3陽性表達(dá)率逐漸增高(P均<0.05)。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的宮頸癌組織中MAGE-A3陽性表達(dá)率高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者(P<0.05)。MAGE-A3低表達(dá)組患者5年生存率為78.1%(25/32)，高表達(dá)組患者5年生存率為44.7%(17/38)，兩者相比，P<0.05。結(jié)論 宮頸癌組織中MAGE-A3陽性表達(dá)率高于CIN組織和正常宮頸組織；MAGE-A3高表達(dá)可能與宮頸癌的發(fā)生發(fā)展及不良預(yù)后密切相關(guān)。

宮頸癌；宮頸上皮內(nèi)瘤變;人類黑色素瘤相關(guān)抗原A3

子宮頸癌是常見的惡性腫瘤之一，發(fā)病趨于年輕化。隨著宮頸病變?cè)缙诤Y查的普及，越來越多的宮頸癌得以早發(fā)現(xiàn)早治療，其預(yù)后也得到很大改善，但宮頸癌發(fā)病機(jī)制目前仍不清楚。宮頸上皮內(nèi)瘤變(CIN)是一組發(fā)生于宮頸上皮的癌前病變，與宮頸癌的發(fā)生密切相關(guān)。隨著分子生物學(xué)的迅速發(fā)展，學(xué)者們逐漸認(rèn)識(shí)到宮頸病變的形成和演變是多基因共同作用的復(fù)雜進(jìn)程。人類黑色素瘤相關(guān)抗原A3(MAGE-A3)作為MAGE-A基因家族的一員[1]，除在睪丸和胚盤組織中表達(dá)外，在其他正常組織也有微弱表達(dá)。研究[2～7]顯示，MAGE-A3在腎癌、膀胱癌、卵巢癌、非小細(xì)胞肺癌、黑色素瘤、胃癌等腫瘤組織中高表達(dá)，關(guān)于MAGE-A3在子宮頸癌中表達(dá)的研究尚少。本研究觀察了宮頸癌組織中MAGE-A3的表達(dá)變化，并分析其與腫瘤臨床病理參數(shù)及預(yù)后的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 臨床資料 2008年6月～2011年6月河北大學(xué)附屬醫(yī)院手術(shù)切取并制作的宮頸癌組織標(biāo)本76例、CIN組織標(biāo)本40例、正常宮頸組織標(biāo)本25例。宮頸癌患者年齡30～67歲、中位年齡43歲，F(xiàn)IGO分期Ⅰa～b期52例、Ⅱa期24例，鱗癌60例、腺癌16例，病理分級(jí)為高分化(G1)24例、中分化(G2)32例、低分化(G3)20例，無淋巴轉(zhuǎn)移61例、有淋巴轉(zhuǎn)移15例，所有病例均經(jīng)病理診斷證實(shí)，排除患其他惡性腫瘤疾病或急慢性疾病者，患者術(shù)前均未進(jìn)行放化療；截止到2016年6月，共70例患者獲得隨訪，按月數(shù)計(jì)算生存時(shí)間。CIN患者年齡26～56歲、中位年齡38歲。正常宮頸組織選自良性子宮肌瘤行子宮全切手術(shù)標(biāo)本，患者年齡30～61歲、中位年齡52歲。三組標(biāo)本來源患者年齡資料具有可比性。本研究方案獲醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 MAGE-A3檢測(cè)方法 采用免疫組化SP法。將各組石蠟切片經(jīng)常規(guī)脫蠟和水化后，以枸櫞酸鹽緩沖液(pH 6.0)進(jìn)行抗原修復(fù)13 min，冷卻至室溫；依次加入過氧化酶阻斷液、適量辣根酶標(biāo)記的鏈霉卵白素工作液和DAB顯色劑，顯微鏡下觀察染色情況；自來水沖洗，蘇木素復(fù)染，脫水，透明，中性樹膠封片；以已知陽性組織作陽性對(duì)照，以PBS代替一抗作陰性對(duì)照。每張切片在高倍鏡(400×)下隨機(jī)挑選5個(gè)視野(每個(gè)觀察視野范圍內(nèi)的細(xì)胞數(shù)量≥200個(gè))，結(jié)合染色強(qiáng)度和陽性細(xì)胞百分比綜合判定結(jié)果。染色強(qiáng)度為不著色計(jì)0分，淺黃色計(jì)1分，棕黃色計(jì)算2分，棕褐色計(jì)3分；陽性細(xì)胞百分比<5%計(jì)0分5%～<25%計(jì)1分，25%～<50%計(jì)2分，≥50%計(jì)3分；將上述兩項(xiàng)得分相加，0～2分為蛋白表達(dá)陰性，3～4分為弱陽性，5～6分為強(qiáng)陽性，3～6分為蛋白表達(dá)陽性；0～2分為低表達(dá)，3～6分為高表達(dá)。所有切片由兩名資深病理科醫(yī)生雙盲閱片。

2 結(jié)果

2.1 宮頸癌組織、CIN組織、正常宮頸組織中MAGE-A3表達(dá)比較 MAGE-A3蛋白主要表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)中，少量表達(dá)細(xì)胞核中，呈淺黃色至棕褐色染色，MAGE-A3蛋白的染色強(qiáng)度隨著宮頸病變程度加重而增強(qiáng)。宮頸癌組織、CIN組織、正常宮頸組織中MAGE-A3的陽性表達(dá)率分別為53.94%(41/76)、7.5%(3/40)、0(0/25)，呈遞減趨勢(shì)，組間兩兩相比，P均<0.05。見圖1。

注：A為正常宮頸組織；B為CIN組織；C、D為宮頸癌組織。

圖1 宮頸癌組織、CIN組織、正常宮頸組織中 MAGE-A3的表達(dá)

2.2 MAGE-A3表達(dá)與宮頸癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系 FIGO分期Ⅱa1期宮頸癌組織中MAGE-A3陽性表達(dá)率高于Ⅰ期者(P<0.05)。病理分級(jí)為G1、G2、G3的宮頸癌組織中MAGE-A3陽性表達(dá)率逐漸增高(P均<0.05)。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的宮頸癌組織中MAGE-A3陽性表達(dá)率高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者(P<0.05)。詳見表1。

2.3 MAGE-A3表達(dá)與宮頸癌患者預(yù)后的關(guān)系 Kaplan-Meier生存分析結(jié)果顯示，MAGE-A3低表達(dá)組患者5年生存率為78.1%(25/32)，高表達(dá)組患者5年生存率為44.7%(17/38)，兩者相比，P<0.05。詳見圖2。

表1 MAGE-A3表達(dá)與宮頸癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系

圖2 MAGE-A3低表達(dá)與高表達(dá)的宮頸癌患者的生存曲線

3 討論

自1991年Vander Bruggen等[8]用基因克隆技術(shù)在黑色素瘤細(xì)胞株中發(fā)現(xiàn)MAGE-A1以來，目前已有60多種MAGE抗原相繼被發(fā)現(xiàn)。MAGE-A3基因與其他A亞家族成員一樣位于X染色體的長臂末端即Xq28，有3個(gè)外顯子，第1、21號(hào)外顯子很短，第3號(hào)外顯子很長；有一個(gè)開放閱讀框(ORF)位于第3個(gè)外顯子，編碼一段長309～319個(gè)氨基酸殘基的蛋白質(zhì)。MAGE-A3基因編碼的腫瘤抗原MA2-D分子量為48 kD，由314個(gè)氨基酸殘基組成[9]。MAGE-A3為染色體上固有存在的原癌基因，其在正常細(xì)胞(除睪丸及胎盤組織)中均不表達(dá)[10]，在腫瘤發(fā)生發(fā)展中所起的作用目前尚未完全明確[11]。MAGE-A3在基因轉(zhuǎn)錄和特殊轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)調(diào)節(jié)中起重要作用，機(jī)制涉及多條信號(hào)通路。研究[12]發(fā)現(xiàn)MAGE-A3能通過與p53結(jié)合從而抑制p53的活性，促進(jìn)黑色素瘤細(xì)胞活化。Doyle等[13]發(fā)現(xiàn)MAGE的表達(dá)能促進(jìn)KAP1/p53蛋白復(fù)合物的形成，從而促進(jìn)p53脫乙酰作用。

MAGE-A3在多種腫瘤組織中表達(dá)。Liu等[14]研究表明MAGE-A3與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和預(yù)后有密切關(guān)系，MAGE-A3為成纖維細(xì)胞生長因子受體2(FGRF2)信號(hào)通路的靶基因，可負(fù)調(diào)節(jié)FGRF2的表達(dá)，并通過調(diào)節(jié)纖維連接蛋白而控制腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移。Guo等[15]檢測(cè)結(jié)果顯示膠質(zhì)瘤組織中MAGE-A3蛋白陽性表達(dá)率為51.3%，而正常腦組織中未檢測(cè)到MAGE-A3，認(rèn)為MAGE-A3有望作為神經(jīng)膠質(zhì)瘤免疫治療的理想靶點(diǎn)。楊靜等[16]發(fā)現(xiàn)低度惡性和高度惡性膠質(zhì)瘤組織中MAGE-A3的陽性表達(dá)率分別為39.1%、70.4%。宮頸癌的侵襲性很強(qiáng)，有盆腔轉(zhuǎn)移的宮頸癌患者術(shù)后復(fù)發(fā)率高達(dá)70%[17]。本研究結(jié)果顯示，宮頸癌組織中MAGE-A3的陽性表達(dá)率為53.94%，顯著高于CIN組織和正宮頸組織，且MAGE-A3表達(dá)與宮頸癌FIGO分期、病理分級(jí)和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況等有關(guān)，因此推測(cè)，MAGE-A3蛋白在宮頸癌組織中異常高表達(dá)，可能參與某些癌基因的激活或抑癌基因沉默，從而導(dǎo)致宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展。

早期宮頸癌患者經(jīng)治療后預(yù)后較好，但仍有15%～30%的復(fù)發(fā)率[18]，50%的復(fù)發(fā)患者在治療后在1年內(nèi)復(fù)發(fā)，75%～80%的患者在治療后2年內(nèi)復(fù)發(fā)[19]?，F(xiàn)已證實(shí)，MAGE-A3的高表達(dá)與惡性腫瘤不良預(yù)后相關(guān)，MAGE-A3是多種惡性腫瘤不良預(yù)后的獨(dú)立預(yù)測(cè)因子。Yin等[20]認(rèn)為MAGE-A3可作為腎透明細(xì)胞癌潛在的不良預(yù)后標(biāo)志物。本研究結(jié)果顯示，MAGE-A3高表達(dá)者5年生存率低于低表達(dá)者，與既往相關(guān)研究結(jié)果一致，說明MAGE-A3陽性表達(dá)率越高提示患者預(yù)后越差。

綜上所述，宮頸癌組織中MAGE-A3陽性表達(dá)率高于CIN組織和正常宮頸組織，MAGE-A3的高表達(dá)可能與宮頸癌的發(fā)生發(fā)展及不良預(yù)后密切相關(guān)。我們推測(cè)MAGE-A3可作為宮頸癌的預(yù)后評(píng)價(jià)指標(biāo)，并有可能成為宮頸癌的治療靶點(diǎn)。MAGE-A3在宮頸癌發(fā)病中的具體作用機(jī)制還有待于進(jìn)一步研究闡明。

[1] Lueas S, De Smet C, Arden KC, et al. Identification of a new MAGE gene with tumor-specific expression by representational difference analysis[J]. Cancer Res, 1998,58(4):743-752．

[2] Yin B, Liu G, Wang XS, et al. Expression profile of cancer-testis genes in transitional cell carcinoma of the bladder[J]. Urol Oncol, 2012,30(6):886-892.

[3] Esfandiary A, Ghafouri-Fard S. MAGE-A3: an immunogenic target used in clinical practice[J]. Immunotherapy, 2015,7(6):683-704.

[4] Thongprasert S, Yang PC, Lee JS, et al. The prevalence of expression of MAGE-A3 and PRAME tumor antigens in East and South East Asian non-small cell lung cancer patients[J]. Lung Cancer, 2016,101(3):137-144.

[5] Wu YL, An SJ, Chen ZH, et al. Gene expression of MAGE-A3 and PRAME tumor antigens and EGFR mutational status in Chinese non-small cell lung cancer patients[J]. Chin J Cancer Res, 2015,27(3):301-308.

[6] Saiag P, Gutzmer R, Ascierto PA, et al. Prospective assessment of a gene signature potentially predictive of clinical benefit in metastatic melanoma patients following MAGE-A3 immunotherapeutic (PREDICT)[J]. Ann Oncol, 2016,27(10):1947-1953.

[7] Xie C, Subhash VV, Datta A, et al. Melanoma associated antigen (MAGE)-A3 promotes cell proliferation and chemotherapeutic drug resistance in gastric cancer[J]. Cell Oncol (Dordr), 2016,39(2):175-186.

[8] Vander Bruggen P, Traversari C, Chomez P, et al. A gene encoding an antigen recognized by cytolytic T lymphocytes on a human melanoma[J]. Science, 1991,254(5038):1643-1647.

[9] Kocher T, Thater ES, Gudal F, et al. Identification and intracellular location of MAGE-3 gene product[J]. Cancer Res, 1995,55(11):2236-2239.

[10] Akers SN, Odunsi K, Karpf AR. Regulation of cancer germline antigen gene expression：implications for cancer immunotherapy[J]. Future Oncol, 2010,6(5):717-732.

[11] Decoster L, Wauters I, Vansteenkiste JF, et al. Vaccination therapy for non-small-cell lung cancer:review of agents in phase Ⅲ development[J]. Ann Oncol, 2012,23(6):1387-1393.

[12] Yang B, OHerrin SM, Wu J, et al. MEGE-A,mMage-b,and MAGE-C proteins form complexes with KAP1 and suppress P53-dependent apoptosis in MAGE-positive cell line[J].Cancer Res, 2007,67(20):9954-9962.

[13] Doyle JM, Gao J, Wang J, et al. MAGE-RING protein complexes comprise a family of E3 ubiquitin ligases [J]. Mol Cell, 2010,39(6):963-974.

[14] Liu W, Cheng S, Asa SL, et al. The melanoma-associated antigen A3 mediates fibronectin-controlled cancer progression and metastasis[J]. Cancer Res, 2008,68(19):8014-8112.

[15] Guo L, Sang M, Liu Q, et al. The expression and clinical significance of melanoma-associated antigen-A1,-A3 and -A11 in glioma[J]. Oncol Lett, 2013,6(1):55-62.

[16] 楊靜,廖紅,陳紆,等.MAGE-A1/A3蛋白在膠質(zhì)瘤的表達(dá)及意義[J].現(xiàn)代免疫學(xué),2011,31(5):395-399.

[17] Arbyn M, Castellsagué X, de Sanjosé S, et al. Worldwide burden of cervical cancer in 2008[J]. Ann Oncol, 2011,22(12):2675-2686.

[18] Kim MK, Jo H, Kong HJ, et al. Postoperative nomogram predicting risk of recurrence after radical hysterectomy for early-stage cervical cancer[J]. Int J Gynecol Cancer, 2010,20(9):1581-1586.

[19] 謝幸,茍文麗.婦產(chǎn)科學(xué)[M].8版.北京:人民衛(wèi)生出版社,2013:308.

[20] Yin B, Zeng Y, Wang X, et al. Expression and clinical significance of cancer-testis genes in clear cell renal cell carcinoma[J]. Int J Clin Exp Pathol, 2014,7(7):4112-4119.

河北省政府資助臨床醫(yī)學(xué)優(yōu)秀人才培養(yǎng)和基礎(chǔ)課題研究項(xiàng)目(2016361007)；河北省醫(yī)學(xué)科學(xué)研究重點(diǎn)課題計(jì)劃項(xiàng)目(20160381)。

梁義娟(E-mail:HHPWL@163.com)

10.3969/j.issn.1002-266X.2017.03.021

R737.33

B

1002-266X(2017)03-0067-03

2016-09-26)