子宮內(nèi)膜異位癥患者病灶組織和血清VEGF-A、CA125表達(dá)變化及其意義

陸月梅，盧紅，劉婭，陳麗平

(1南通大學(xué)附屬海安縣人民醫(yī)院，江蘇南通226600；2南通大學(xué)第二附屬醫(yī)院226001)

子宮內(nèi)膜異位癥患者病灶組織和血清VEGF-A、CA125表達(dá)變化及其意義

陸月梅1，盧紅1，劉婭1，陳麗平2

(1南通大學(xué)附屬海安縣人民醫(yī)院，江蘇南通226600；2南通大學(xué)第二附屬醫(yī)院226001)

目的 觀察子宮內(nèi)膜異位癥(EMs)患者病灶組織和血清中血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子A(VEGF-A)、糖類抗原125(CA125)表達(dá)變化，并探討其意義。方法 選擇EMs患者40例為病例組，子宮內(nèi)膜正常的子宮肌瘤患者20例為對(duì)照組，留取病例組的異位內(nèi)膜組織、在位內(nèi)膜組織，留取對(duì)照組的正常內(nèi)膜組織。采用Western blotting檢測(cè)病例組異位內(nèi)膜組織、在位內(nèi)膜組織及對(duì)照組正常內(nèi)膜組織中的VEGF-A、CA125，采用ELISA法檢測(cè)病例組術(shù)前、術(shù)后及對(duì)照組術(shù)前血清中的VEGF-A、CA125。分析VEGF-A、CA125聯(lián)合檢測(cè)診斷EMs的敏感度、特異度及準(zhǔn)確率。結(jié)果 病例組異位內(nèi)膜組織中VEGF-A、CA125相對(duì)表達(dá)量高于在位內(nèi)膜組織及對(duì)照組(P均<0.05)。病例組術(shù)后血清VEGF-A、CA125表達(dá)水平低于術(shù)前，手術(shù)前后血清VEGF-A、CA125表達(dá)水平均高于對(duì)照組(P均<0.01)。病例組異位內(nèi)膜組織中VEGF-A、CA125與術(shù)前血清中VEGF-A、CA125表達(dá)呈正相關(guān)關(guān)系(r分別為0.956、0.882，P均<0.01)；對(duì)照組正常內(nèi)膜組織中VEGF-A、CA125與血清中VEGF-A、CA125表達(dá)呈正相關(guān)關(guān)系(r分別為0.851、0.876，P均<0.05)。血清VEGF-A、CA125聯(lián)合檢測(cè)診斷EMs的敏感度、特異度及準(zhǔn)確率分別為92.50%、95.00%、93.33%。結(jié)論 EMs患者病灶組織及血清中VEGF-A、CA125表達(dá)水平升高；VEGF-A、CA125可能參與了EMs的發(fā)生、發(fā)展；血清VEGF-A、CA125聯(lián)合檢測(cè)可能有助于提高對(duì)EMs的診斷效能。

子宮內(nèi)膜異位癥；血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子A；糖類抗原125

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2014年1月～2016年3月在南通大學(xué)附屬海安縣人民醫(yī)院婦科行手術(shù)治療、術(shù)后病理診斷為EMs的40例患者為病例組，年齡20～46(35.0±4.6)歲；選擇同期診斷為子宮肌瘤需手術(shù)治療、術(shù)后病理證實(shí)為子宮肌瘤且子宮內(nèi)膜正常的患者20例為對(duì)照組，年齡23～50(41.0±5.3)歲。所有患者入院前半年內(nèi)均未服用激素類藥物，且均排除內(nèi)分泌疾病及其他內(nèi)、外科疾病。收集兩組術(shù)前、術(shù)中診斷性刮宮或術(shù)中、術(shù)后采集的組織標(biāo)本，放置-80 ℃冰箱保存。

1.2 異位內(nèi)膜組織及在位內(nèi)膜組織中VEGF-A、CA125檢測(cè) 采用Western blotting法檢測(cè)病例組的異位內(nèi)膜組織、在位內(nèi)膜組織及對(duì)照組正常內(nèi)膜組織中的VEGF-A、CA125。取標(biāo)本組織，加入RIPA裂解液制成勻漿，蛋白定量后稀釋成3 g/L，行SDS-PAGE電泳分離蛋白，經(jīng)半干轉(zhuǎn)印系統(tǒng)轉(zhuǎn)膜，5%脫脂奶粉室溫封閉2 h后用5%脫脂奶粉稀釋的鼠抗VEGF-A或CA125單克隆抗體(1∶500)及小鼠抗β-actin單克隆抗體(1∶1 500)室溫孵育1 h，4 ℃過(guò)夜。次日洗滌后加入用5%脫脂奶粉稀釋的結(jié)合有HRP的羊抗鼠IgG(1∶2 000)和羊抗小鼠IgG(1∶2 000)，室溫孵育2 h，洗滌后行ECL顯色。以目的蛋白條帶灰度值與β-actin內(nèi)參條帶灰度值的比值表示目的蛋白相對(duì)表達(dá)量。

1.3 血清中VEGF-A、CA125檢測(cè) 兩組患者入院后或術(shù)前采取靜脈血，靜置、離心后取其上清液，置于-80 ℃冰箱保存。病例組術(shù)后1個(gè)月復(fù)查，采集靜脈血分離血清，置于-80 ℃冰箱保存。采用ELISA法檢測(cè)兩組血清中的VEGF-A、CA125。

1.4 血清VEGF-A、CA125聯(lián)合檢測(cè)對(duì)EMs的診斷效能分析 分析血清VEGF-A、CA125聯(lián)合檢測(cè)診斷EMs的敏感度、特異度及準(zhǔn)確率。

2 結(jié)果

2.1 兩組異位內(nèi)膜組織及在位內(nèi)膜組織中VEGF-A、CA125表達(dá)比較 病例組異位內(nèi)膜組織中VEGF-A、CA125相對(duì)表達(dá)量分別為0.901 2±0.106 4、0.811 1±0.112 5，在位內(nèi)膜組織中分別為0.125 3±0.042 5、0.096 4±0.037 8；對(duì)照組正常內(nèi)膜組織中VEGF-A、CA125相對(duì)表達(dá)量分別為0.118 9±0.043 2、0.100 2±0.040 8。病例組異位內(nèi)膜組織中VEGF-A、CA125相對(duì)表達(dá)量高于在位內(nèi)膜組織及對(duì)照組(P均<0.05)。

2.2 兩組血清中VEGF-A、CA125表達(dá)比較 病例組術(shù)前血清VEGF-A、CA125表達(dá)水平分別為(721.35±95.61)pg/mL、(33.67±10.66)μg/mL，術(shù)后分別為(368.20±33.68)pg/mL、(20.88±9.92)μg/mL；對(duì)照組血清VEGF-A、CA125表達(dá)水平分別為(115.5±78.24)pg/mL、(15.30±6.01)μg/mL。病例組術(shù)后血清VEGF-A、CA125表達(dá)水平低于術(shù)前，手術(shù)前后血清VEGF-A、CA125表達(dá)水平均高于對(duì)照組(P均<0.01)。

2.3 內(nèi)膜組織VEGF-A、CA125表達(dá)水平與術(shù)前血清VEGF-A、CA125表達(dá)水平的相關(guān)性 病例組異位內(nèi)膜組織中VEGF-A、CA125與術(shù)前血清中VEGF-A、CA125表達(dá)呈正相關(guān)關(guān)系(r分別為0.956、0.882，P均<0.01)；對(duì)照組正常內(nèi)膜組織中VEGF-A、CA125與血清中VEGF-A、CA125表達(dá)呈正相關(guān)關(guān)系(r分別為0.851、0.876，P均<0.05)。

2.4 血清VEGF-A、CA125聯(lián)合檢測(cè)對(duì)EMs的診斷效能 VEGF-A單項(xiàng)檢測(cè)診斷EMs的敏感度、特異度及準(zhǔn)確率分別為75.00%、95.00%、81.67%；CA125單項(xiàng)檢測(cè)診斷EMs的敏感度、特異度及準(zhǔn)確率分別為88.88%、95.00%、92.11%；VEGF-A、CA125聯(lián)合檢測(cè)診斷EMs的敏感度、特異度及準(zhǔn)確率分別為92.50%、95.00%、93.33%。

3 討論

目前EMs的診斷金標(biāo)準(zhǔn)為腹腔鏡探查及病理檢查，但均屬于有創(chuàng)性檢查[5]。血清CA125升高是EMs的診斷標(biāo)準(zhǔn)之一。除腫瘤以外，早孕、炎癥反應(yīng)及EMs人群血清CA125也會(huì)升高。CA125單項(xiàng)檢測(cè)診斷EMs的敏感度、特異度和準(zhǔn)確率均不理想[3]。尋找對(duì)EMs有較好診斷效能的檢查方法已成為廣大臨床工作者關(guān)注的問(wèn)題。關(guān)于EMs的發(fā)病機(jī)制有多種學(xué)說(shuō)，目前被廣泛接受的是經(jīng)血逆流種植學(xué)說(shuō)，但經(jīng)血逆流現(xiàn)象普遍，而EMs發(fā)病率僅為10%左右[6～8]，這說(shuō)明經(jīng)血逆流只是誘因，關(guān)鍵與內(nèi)膜的異位種植生長(zhǎng)有關(guān)。經(jīng)血中的子宮內(nèi)膜能成功地異位種植生長(zhǎng)，與局部毛細(xì)血管的新生密不可分[9～11]。因此，新生血管生成已成為EMs發(fā)病機(jī)制、治療策略及診斷相關(guān)研究的熱點(diǎn)。

VEGF是一種高度特異的血管內(nèi)皮細(xì)胞有絲分裂素，能夠提高微血管通透性，改變細(xì)胞外基質(zhì)成分，以利于新生血管的生長(zhǎng)[5]。很多學(xué)者[6,7]觀察到EMs患者的異位病灶、血液、腹腔液中多種血管生成因子水平明顯增高。VEGF可分為A、B、C、D、E五個(gè)亞型，其中VEGF-A是最常見(jiàn)的一型，主要與VEGF受體1、2結(jié)合發(fā)揮生物學(xué)效用[12]。目前國(guó)內(nèi)外多項(xiàng)研究[13～15]報(bào)道了EMs患者血清和組織中VEGF的表達(dá)及其在EMs診斷、治療中的價(jià)值，但對(duì)VEGF-A、CA125聯(lián)合檢測(cè)診斷EMs的效能報(bào)道較少。

本研究分別納入EMs患者及子宮內(nèi)膜正常的子宮肌瘤患者，觀察EMs病灶組織及血清中VEGF-A、CA125的表達(dá)變化，結(jié)果顯示病例組異位內(nèi)膜組織中VEGF-A、CA125相對(duì)表達(dá)量高于在位內(nèi)膜組織及對(duì)照組；病例組術(shù)后血清VEGF-A、CA125表達(dá)水平低于術(shù)前，手術(shù)前后血清VEGF-A、CA125表達(dá)水平均高于對(duì)照組。上述結(jié)果提示VEGF-A高表達(dá)可能與EMs的發(fā)病、進(jìn)展有關(guān)，血清VEGF-A水平可能在EMs術(shù)后隨訪評(píng)估中有一定應(yīng)用價(jià)值。另外，我們分析了病灶組織與血清中兩項(xiàng)指標(biāo)的相關(guān)性，發(fā)現(xiàn)病例組異位內(nèi)膜組織中VEGF-A、CA125表達(dá)與術(shù)前血清中VEGF-A、CA125表達(dá)呈正相關(guān)關(guān)系，對(duì)照組正常子宮內(nèi)膜組織中VEGF-A、CA125表達(dá)與血清中VEGF-A、CA125表達(dá)也呈正相關(guān)關(guān)系，由此說(shuō)明EMs患者血清VEGF-A、CA125表達(dá)水平變化趨勢(shì)與病灶組織中的一致。進(jìn)一步分析得出，血清VEGF-A、CA125聯(lián)合檢測(cè)診斷EMs的敏感度、特異度及準(zhǔn)確率分別為92.50%、95.00%、93.33%，高于CA125單獨(dú)檢測(cè)對(duì)EMS的診斷效能[16]，說(shuō)明VEGF-A、CA125聯(lián)合檢測(cè)對(duì)EMs的診斷效能更好。

綜上所述，EMs患者病灶組織和血清中VEGF-A、CA125表達(dá)水平升高，VEGF-A、CA125可能參與了EMs的發(fā)生、發(fā)展；血清VEGF-A、CA125聯(lián)合檢查有助于提高對(duì)EMs的診斷效能。然而，本研究樣本量較少，上述結(jié)論仍有待于進(jìn)一步證實(shí)。

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(收稿日期：2016-10-08)

南通市衛(wèi)生局青年科研基金項(xiàng)目(WQZ2015016)。

陳麗平(E-mail: 1193136107@qq.com)

10.3969/j.issn.1002-266X.2017.03.026

R711.71

B

1002-266X(2017)03-0081-03

2016-06-28)

子宮內(nèi)膜異位癥(EMs)可引起患者痛經(jīng)、月經(jīng)紊亂、不孕及盆腔痛，嚴(yán)重影響中青年婦女的生活質(zhì)量[1]。EMs雖為良性病變，但具有類似惡性腫瘤的局部種植、浸潤(rùn)生長(zhǎng)及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移能力[2]。目前，血清糖類抗原125(CA125)升高是EMs的診斷標(biāo)準(zhǔn)之一，但CA125對(duì)EMs的診斷敏感度、特異度、準(zhǔn)確率均不盡如人意[3]。血管形成在EMs的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中具有重要作用。近年來(lái)發(fā)現(xiàn)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)參與了EMs的病理過(guò)程[4]。本研究觀察了EMs患者病灶組織和血清中VEGF-A、CA125的表達(dá)變化，并探討其意義。