Aptima HPV聯(lián)合宮頸液基細胞學篩查宮頸癌前病變的臨床研究

范瑩瑩,張 健△,徐 冰

1.上海交通大學醫(yī)學院附屬國際和平婦幼保健院婦科(上海 200123),2.北京大學第三醫(yī)院婦科(北京 100191)

△通訊作者

Aptima HPV聯(lián)合宮頸液基細胞學篩查宮頸癌前病變的臨床研究

范瑩瑩1,張 健1△,徐 冰2

1.上海交通大學醫(yī)學院附屬國際和平婦幼保健院婦科(上海 200123),2.北京大學第三醫(yī)院婦科(北京 100191)

目的：探討Aptima HPV聯(lián)合宮頸液基細胞學在篩查宮頸癌前病變中的作用。方法：選擇25～65歲有性生活史半年以上人群1506例作為研究對象，先進行TCT檢查，ASC-US及以上患者均進行Aptima HPV E6/E7 mRNA、Cobas HPV DNA、CINtec-Plus及陰道鏡檢查；并在宮頸細胞學陰性者中隨機抽取5%行Aptima HPV E6/E7 mRNA、Cobas HPV DNA、CINtec-Plus檢測。結果：Aptima HPV E6/E7 mRNA隨著宮頸病變級別的增加,其陽性率也增加且具有統(tǒng)計學差異(χ2=52.135,P<0.05),陽性率變動范圍高于Cobas HPV DNA及CINtec-Plus，CIN2、CIN3、ICC三者的Aptima HPV E6/E7 mRNA陽性率明顯高于正常或炎癥及CIN1的陽性率且具有統(tǒng)計學差異(χ2=49.625,P<0.05),CIN2、CIN3、ICC三者的Aptima HPV E6/E7 mRNA陽性率之間未發(fā)現(xiàn)有統(tǒng)計學差異(χ2=1.998,P>0.05)。靈敏度以Cobas HPV DNA最高,但其特異度僅45.45%為最低,特異度、陽性預測值、陰性預測值以Aptima HPV E6/E7 mRNA最高,Aptima HPV E6/E7 mRNA與Cobas HPV DNA的靈敏度無統(tǒng)計學差異(P>0.05)。結論：Aptima HPV聯(lián)合宮頸液基細胞學篩查對于早期發(fā)現(xiàn)宮頸癌前病變具有重要的臨床價值。

宮頸癌是威脅女性生命健康居第二位的惡性腫瘤,據(jù)統(tǒng)計全球每年新發(fā)宮頸癌達50余萬例，每年有約23萬的女性死于宮頸癌[1],我國每年新發(fā)宮頸癌約15萬例,每年有約8萬的女性死于宮頸癌,近年來,宮頸癌新發(fā)病例數(shù)逐年上升,且呈年輕化的趨勢[2]。研究發(fā)現(xiàn)人乳頭瘤病毒(Human papilloma virus, HPV)是宮頸癌發(fā)生和發(fā)展的首要因素，本研究擬以陰道鏡活檢病理診斷作為金標準[3]，評價宮頸液基細胞學分別聯(lián)合Aptima HPV檢測、Cobas HPV分型檢測技術及羅氏CINtec-Plus細胞學檢測，用于宮頸癌前病變篩查,期望發(fā)現(xiàn)更有效的宮頸癌聯(lián)合篩查的方法,為宮頸癌篩查提供新策略。

材料與方法

1 一般資料 選取2014年5月至2016年5月就診的25～65歲有性生活史半年以上人群1506例作為研究對象，納入標準：無宮頸物理治療及手術史，無盆腔放射史，均排除妊娠。采樣前3 d無性生活、陰道沖洗及陰道炎。

2 研究方法 ①宮頸液基細胞學(TCT)檢查：所有研究對象均將宮頸管內和鱗柱上皮交界處采集的細胞涮洗在TCT專用取樣瓶中，經TCT專用制片機制成薄層涂片，經巴氏染色后鏡檢。宮頸細胞學診斷按照國際癌癥協(xié)會推薦的TBS(2001)分類法[4]。所有研究對象均采用宮頸液基細胞學進行初篩，宮頸細胞學ASC-US及以上患者均進行Aptima HPV E6/E7 mRNA、Cobas HPV DNA、CINtec-Plus及陰道鏡檢查；并在宮頸細胞學陰性的患者中隨機抽取5%行Aptima HPV E6/E7 mRNA、Cobas HPV DNA、CINtec-Plus檢測，以評估篩查的漏檢率。②Aptima HPV E6/E7 mRNA表達檢測：采用TCT剩余標本，加入試劑處理后的標本采用QuantiVirus TM冷光儀檢測；檢測結果為光子數(shù)，經計算軟件轉換為拷貝數(shù)，≥1 copy/ml為陽性。③Cobas HPV DNA檢測：將鱗柱上皮交界處和宮頸管采集的細胞涮洗在HPV專用取樣瓶中，采用Cobas HPV(羅氏)評估HPV感染情況。④CINtec-Plus檢測：采用羅氏的CINtec-Plus檢測試劑盒(羅氏)，采用TCT剩余標本，進行檢測，雙染陽性的考慮為陽性，單染或者不染色的考慮為陰性。⑤組織病理學檢查：陰道鏡下宮頸活檢病理作為金標準。對病檢結果≥CIN2的患者行子宮頸電環(huán)切除(LEEP)或冷刀錐切術(CKC)，以獲取進一步病理診斷。若不同部位有不同級別診斷，以病理級別最高者作為最后診斷。

3 統(tǒng)計學方法 資料采用Epi Data 3.0軟件進行錄入，采用SPSS 20.0統(tǒng)計學軟件包進行統(tǒng)計分析，計數(shù)資料采用例數(shù)(百分比)表示，其比較采用χ2檢驗,評估檢測結果的陽性率、陰性率、靈敏度、特異度、陽性預測值、陰性預測值等，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

結 果

1 TCT、Aptima HPV E6/E7 mRNA、Cobas HPV DNA、CINtec-Plus檢測和病理檢查結果 見表1。1506例研究對象,TCT檢查結果為未見上皮內病變及惡性細胞(NILM)1317例(87.45%)，≥無明確意義的非典型細胞的改變(ASC-US)189例(12.55%)，對189例≥ASC-US患者均進行Aptima HPV E6/E7 mRNA、Cobas HPV DNA、CINtec-Plus及陰道鏡檢查，病理檢查為CIN1、CIN2、CIN3、ICC(宮頸浸潤癌)的患者，Aptima HPV E6/E7 mRNA總體陽性率為82.08%(142/173)，低于Cobas HPV DNA總體陽性率89.60%(155/173)且具有統(tǒng)計學差異(χ2=4.018,P<0.05),高于CINtec-Plus總體陽性率79.19%(137/173)，但無統(tǒng)計學差異(χ2=0.463,P>0.05)。Aptima HPV E6/E7 mRNA隨著宮頸病變級別的增加，其陽性率也增加且具有統(tǒng)計學差異(χ2=52.135,P<0.05)，陽性率變動范圍高于Cobas HPV DNA及CINtec-Plus，CIN2、CIN3、ICC三者的Aptima HPV E6/E7 mRNA陽性率明顯高于正常或炎癥及CIN1的陽性率且具有統(tǒng)計學差異(χ2=49.625,P<0.05),CIN2、CIN3、ICC三者的Aptima HPV E6/E7 mRNA陽性率之間無統(tǒng)計學差異(χ2=1.998,P>0.05)。在1317例NILM的患者中隨機抽取5%行Aptima HPV E6/E7 mRNA、Cobas HPV DNA、CINtec-Plus檢測,篩查的漏檢率為1.52%(1/66)。

表1 病理檢查結果與Aptima HPV E6/E7 mRNA、Cobas HPV DNA、CINtec-Plus檢測結果關系 [例(%)]

2 Aptima HPV E6/E7 mRNA、Cobas HPV DNA、CINtec-Plus對CIN2診斷價值 見表2。本研究中靈敏度以Cobas HPV DNA最高,但其特異度僅45.45%為最低,特異度、陽性預測值、陰性預測值以Aptima HPV E6/E7 mRNA最高,Aptima HPV E6/E7 mRNA與Cobas HPV DNA的靈敏度無統(tǒng)計學差異(P>0.05),Aptima HPV E6/E7 mRNA、Cobas HPV DNA、CINtec-Plus特異度、陽性預測值、陰性預測值均具有統(tǒng)計學差異(P<0.05)。

表2 Aptima HPV E6/E7 mRNA、Cobas HPV DNA、CINtec-Plus對CIN2診斷價值(%)

討 論

宮頸癌的主要致病病因為高危型的HPV,所以對女性檢測是否感染高危型的HPV,對于防控宮頸癌的發(fā)病具有重要的意義[5]。宮頸液基細胞學聯(lián)合HPV DNA已經在臨床上廣泛用于宮頸癌的普查，但是宮頸液基細胞學檢查在宮頸感染HPV病毒等因素的協(xié)同作用下引起細胞核的形態(tài)學改變以后才能進行臨床診斷，所以其不能早期發(fā)現(xiàn)疾病，HPV DNA檢測只是能夠對病毒感染的類型進行判斷，不能夠表達感染病毒的致癌基因活性[6]，所以尋找能夠早期發(fā)現(xiàn)高危人群的篩查辦法是十分必要的。

目前有研究[7]發(fā)現(xiàn)高危HPV感染,會引起宮頸上皮內發(fā)生病變后,導致E6、E7的表達增多,而E6、E7基因是HPV編碼區(qū)中的癌基因,基因編碼產物E6、E7蛋白聯(lián)合發(fā)揮作用,可抑制P53蛋白功能,從而抑制細胞凋亡,E7蛋白還可通過抑制pRB使細胞周期失控。研究發(fā)現(xiàn)E6/E7mRNA的表達與宮頸病變程度呈正相關[8]。本研究發(fā)現(xiàn)Aptima HPV E6/E7 mRNA隨著宮頸病變級別的增加，其陽性率也增加，陽性率變動范圍高于Cobas HPV DNA及CINtec-Plus，CIN2、CIN3、ICC三者的Aptima HPV E6/E7 mRNA陽性率明顯高于正?；蜓装Y及CIN1的陽性率，CIN2、CIN3、ICC三者的Aptima HPV E6/E7 mRNA陽性率之間未發(fā)現(xiàn)具有統(tǒng)計學差異。靈敏度以Cobas HPV DNA最高，但其特異度僅45.45%為最低，特異度、陽性預測值、陰性預測值以Aptima HPV E6/E7 mRNA最高，未發(fā)現(xiàn)Aptima HPV E6/E7 mRNA與Cobas HPV DNA的靈敏度具有統(tǒng)計學差異。進一步驗證了E6/E7 mRNA 表達是宮頸癌發(fā)生發(fā)展的必經步驟，E6/E7基因的轉錄產物E6/E7mRNA 反映了癌基因活性，其相比DNA，E6、E7 mRNA與病變的相關性更好。

綜上所述，Aptima HPV聯(lián)合宮頸液基細胞學篩查對于早期發(fā)現(xiàn)宮頸癌前病變具有重要的臨床價值。

[1] 易利紅.hTERC基因與宮頸癌前病變及宮頸癌發(fā)生發(fā)展關系的探究[J].海南醫(yī)學院學報,2016,22(11)：1141-1144.

[2] 宮 輝,顧平清,劉 柱,等.人乳頭瘤病毒致宮頸癌細胞免疫逃逸機制探討[J].實用老年醫(yī)學,2010,24(1):40-42.

[3] 羅 旻,譚詩生,倪婷婷,等.宮頸癌術后盆腔不同體外照射療法的劑量學研究[J].貴州醫(yī)藥,2014,38(6):498-501.

[4] 潘秦鏡.TBS(2001)判讀要點及鑒別診斷[C].//第九屆全國子宮頸癌前期病變暨子宮腫瘤高峰論壇論文集,2012：121-124.

[5] 崔亞杰,張培蓮.宮頸上皮內瘤變中人乳頭瘤病毒基因分型及感染狀況研究[J].陜西醫(yī)學雜志,2015,44(10)：1308-1309.

[6] Sarah I, Maria TS, Sara B,etal.Tissue Genotyping of 37 In Situ and Invasive Cervical Cancer With a Concomitant Negative HC2 HPV DNA Test[J].Journal of Lower Genital tract Disease, 2014,18(1):87-91.

[7] Broccolo F, Fusetti L, Rosini S,etal.Comparison of oncogenic HPV type-specific viral DNA load and E6/E7 mRNA detection in cervical samples: Results from a multicenter study[J].Journal of Medical Virology,2013,85(3):472-482.

[8] 張魏芳.高危型人乳頭瘤病毒早期蛋白E6和E7調控細胞周期的機制研究[D].山東大學, 2010.

(收稿：2016-06-20)

子宮頸腫瘤 多相篩查 @Aptima HPV @液基細胞學 @羅氏CINtec-Plus細胞學檢測

R737.33

A

10.3969/j.issn.1000-7377.2017.02.009