己酸發(fā)酵液中己酸的檢測(cè)方法

廖勤儉，郭艷，周翰玲，安明哲，李楊華，王小琴，謝正敏

(四川宜賓五糧液股份有限公司，四川宜賓644007)

己酸發(fā)酵液中己酸的檢測(cè)方法

廖勤儉，郭艷，周翰玲，安明哲，李楊華，王小琴，謝正敏

(四川宜賓五糧液股份有限公司，四川宜賓644007)

建立了一種己酸發(fā)酵液中己酸的檢測(cè)方法。己酸發(fā)酵液經(jīng)硫酸酸化處理后，用二氯甲烷萃取，利用氣相色譜檢測(cè)萃取液中的己酸。結(jié)果表明，定量檢測(cè)限為10mg/L，線(xiàn)性相關(guān)系數(shù)R2值為0.9999，回收率為98.05%～101.88%，檢測(cè)結(jié)果的相對(duì)偏差（RSD）為0.32%。

己酸發(fā)酵液；己酸；萃取；氣相色譜

己酸是濃香型白酒中己酸乙酯的前體物質(zhì)，也是白酒成分之一。目前，己酸發(fā)酵液的檢測(cè)方法有硫酸銅顯色法、比色法、紙上層析法、直接進(jìn)樣毛細(xì)管柱氣相色譜法[1]，蒸餾進(jìn)樣毛細(xì)管柱氣相色譜法[2]等，其中硫酸銅顯色法、比色法、紙上層析法較適合于生產(chǎn)中的快速檢測(cè)，但不能準(zhǔn)確地檢出發(fā)酵液中的己酸含量。己酸發(fā)酵過(guò)程會(huì)添加碳酸鈣等調(diào)節(jié)pH值的鹽類(lèi)，不能直接進(jìn)氣相色譜儀進(jìn)行檢測(cè)，已有的氣相色譜法也有對(duì)發(fā)酵液樣品的前處理，如活性炭吸附，過(guò)濾，或是蒸餾己酸發(fā)酵液的方式。本實(shí)驗(yàn)研究了一種己酸發(fā)酵液中己酸的檢測(cè)方法，經(jīng)硫酸酸化后，利用二氯甲烷進(jìn)行萃取，萃取液進(jìn)氣相色譜儀進(jìn)行檢測(cè)，該方法簡(jiǎn)便適用，精確度高，重復(fù)性好。

1 材料與方法

1.1 材料、試劑及儀器

己酸標(biāo)準(zhǔn)品的配制：準(zhǔn)確稱(chēng)取色譜級(jí)己酸，以二氯甲烷配制成100 m L濃度為10 g/L的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液放置于4℃冰箱中冷藏。

儀器設(shè)備：美國(guó)Agilent公司6890氣相色譜，F(xiàn)ID檢測(cè)器。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 氣相色譜條件

色譜柱：HP-INNOWax Agilent30×0.25×0.25；進(jìn)樣口溫度：250℃；檢測(cè)器溫度：250℃；柱流速：恒流1.0m L/m in；分流模式：20∶1；進(jìn)樣量：1μL；柱溫程序升溫：（HPINNOWax Agilent）40℃（保持1 m in），以8℃/m in升溫至100℃（保持1m in），再以6℃/m in升溫至220℃（保持1m in）。

1.2.2 樣品前處理

己酸發(fā)酵液200μL，2%的硫酸溶液100μL，混勻后，用2m L的二氯甲烷進(jìn)行萃取，萃取液用0.2μm的膜過(guò)濾后作為待測(cè)樣品。

2 結(jié)果與分析

2.1 標(biāo)樣和樣品的檢測(cè)

取10 g/L的己酸標(biāo)準(zhǔn)溶液，用二氯甲烷稀釋至1000mg/L，進(jìn)行定性檢測(cè)。標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的氣相色譜圖見(jiàn)圖1、圖2，己酸的出峰時(shí)間為20.820m in左右。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)及線(xiàn)性范圍

取10mg/L的己酸標(biāo)準(zhǔn)溶液，用二氯甲烷稀釋至100 mg/L、500 mg/L、1000 mg/L、1500 mg/L、2000 mg/L共5個(gè)濃度梯度，作為定量分析校正。以峰面積Y為縱坐標(biāo)，以質(zhì)量濃度（mg/L）為X橫坐標(biāo)進(jìn)行線(xiàn)性回歸。結(jié)果表明，化合物線(xiàn)性關(guān)系良好，回歸方程為y=0.5493x-11.272，R2值為0.9999，滿(mǎn)足分析要求。根據(jù)3倍信噪比計(jì)算出化合物的檢測(cè)限為10mg/L。

表1 精密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果(n=6)

圖1 標(biāo)樣色譜圖

圖2 發(fā)酵液樣品色譜圖

2.3 精密度實(shí)驗(yàn)

用上述實(shí)驗(yàn)方法對(duì)同一樣品平行測(cè)定6次，得到發(fā)酵液經(jīng)前處理后的待測(cè)樣品中己酸含量的檢測(cè)結(jié)果的相對(duì)偏差（RSD）為0.32%，滿(mǎn)足分析要求，結(jié)果見(jiàn)表1。

2.4 加標(biāo)回收率實(shí)驗(yàn)

取發(fā)酵液4份，其中1份作為空白本底值進(jìn)行前處理，另外3份分別加入已知量的標(biāo)準(zhǔn)溶液后進(jìn)行前處理，處理后的樣品進(jìn)行檢測(cè)，用上述實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行回收率實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，化合物的回收率為98.05%～101.88%，滿(mǎn)足分析要求。表2中數(shù)據(jù)為處理后樣品及加標(biāo)處理后樣品的實(shí)測(cè)值。

表2 處理后樣品及加標(biāo)處理后樣品的實(shí)測(cè)值

3 結(jié)果與討論

該方法能快速準(zhǔn)確地分析發(fā)酵液樣品中的己酸含量。發(fā)酵液樣品只需簡(jiǎn)單的萃取就能進(jìn)樣分析，R2值、檢測(cè)的精密度、加標(biāo)回收率等各項(xiàng)指標(biāo)均達(dá)到分析要求。

該方法還可以檢測(cè)釀酒廢水中的己酸、丁酸等沸點(diǎn)較高的有機(jī)酸，省去了對(duì)有機(jī)酸的衍生等前處理，又避免了直接進(jìn)樣對(duì)色譜柱的損害。

[1]羅維,劉永婷.準(zhǔn)確測(cè)定己酸菌液中己酸含量的方法[J].釀酒科技,2003(5)：83.

[2]鐘雨,謝宜輝.己酸菌培養(yǎng)液中己酸含量的測(cè)定方法[J].釀酒科技,2004(3)：91-92.

Determination Method of Caproic Acid in Caproic Acid Fermented Liquid

LIAOQinjian,GUOYan,ZHOU Hanling,ANM ingzhe,LIYanghua,WANG Xiaoqin and XIEZhengm in
(Wuliangye Group Co.Ltd.,Yibin,Sichuan 644007,China)

In this study,a method for the determination of caproic acid in caproic acid fermented liquid has been developed.Caproic acid fermented liquid was acidified by using sulfuric acid and then extracted by using dichloromethance,and caproic acid in the extract was determined by using GC.The results suggested that,the quantitative detection limit was 10 mg/L,the linear correlation coefficient R2was 0.9999,the recovery ratewas98.05%to 101.88%,and relative deviation(RSD)of the test results was0.32%.

caproic acid fermented liquid;caproic acid;extraction;gas chromatography

TS262.3；TS261.1；TS261.7

A

1001-9286（2017）02-0118-02

10.13746/j.njkj.2016282

2016-09-18

廖勤儉，女，四川宜賓人，高級(jí)工程師，主要從事儀器分析工作。

優(yōu)先數(shù)字出版時(shí)間：2016-11-21；地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/52.1051.TS.20161121.1632.004.htm l。