高效液相色譜法檢測丙泊酚及依托咪酯混合液化學(xué)穩(wěn)定性的研究*

廖 勇，游 艷

(三峽大學(xué)仁和醫(yī)院藥學(xué)部，湖北宜昌 443001)

·技術(shù)與方法·

高效液相色譜法檢測丙泊酚及依托咪酯混合液化學(xué)穩(wěn)定性的研究*

廖 勇，游 艷

(三峽大學(xué)仁和醫(yī)院藥學(xué)部，湖北宜昌 443001)

目的 采用高效液相色譜法(HPLC)體外模擬體內(nèi)環(huán)境條件確定丙泊酚、依托咪酯混合后的新物質(zhì)生成情況。方法 采用十八烷基硅烷鍵合硅膠作為填充劑(250.0 mm×4.6 mm，5 μm)，以磷酸鹽緩沖液-乙腈(調(diào)至pH7.4)作為流動相[磷酸鹽緩沖液∶乙腈=35∶65 (V/V)]，設(shè)定柱溫為30 ℃，流速為1.0 mL/min，進樣量為10 μL，全波長下進行紫外光譜檢測(波長190～800 nm)，通過對比標準品及對照品圖譜確認圖譜中是否有新的特征峰。結(jié)果 通過與標準品圖譜進行比較發(fā)現(xiàn)，丙泊酚、依托咪酯二者混合品在體外模擬體內(nèi)環(huán)境條件下無新的特征峰出現(xiàn)，即未生成第3種物質(zhì)。結(jié)論 所建方法簡便、快速、準確地檢測出丙泊酚、依托咪酯混合后無新物質(zhì)生成。

丙泊酚；依托咪酯；高效液相色譜法；化學(xué)穩(wěn)定性

丙泊酚乳劑(propofol)是目前臨床上普遍用于麻醉誘導(dǎo)、麻醉維持、ICU危重患者鎮(zhèn)靜的一種新型快速、短效靜脈麻醉藥[1-3]。依托咪酯乳劑(etomidate)系非巴比妥類靜脈鎮(zhèn)靜藥，也是目前臨床全身麻醉(簡稱全麻)誘導(dǎo)的常用藥物之一[4-5]。兩種藥物均具有起效快、維持時間短、蘇醒快的特點。然而，丙泊酚有易致心血管功能抑制而降低血壓和減慢心率，明顯抑制呼吸，注射痛發(fā)生率高等不足；依托咪酯乳劑靜脈注射易致肌陣攣，長時間應(yīng)用抑制腎上腺皮質(zhì)功能。兩種藥除起效時間、維持時間、蘇醒時間均快外，半衰期亦相似，溶媒都是中長鏈脂肪酸乳劑[6]。已有文獻報道，將兩種藥混合后聯(lián)合應(yīng)用于全麻誘導(dǎo)和門診短小手術(shù)與操作的全麻[7-9]，將兩種藥混合后應(yīng)用，在減少二者用量的同時也相對減輕不良反應(yīng)，作用特點得以發(fā)揮。盡管臨床上將兩種藥混合后顯示出許多優(yōu)點，但仍擔(dān)心兩種藥混用后藥物理化性質(zhì)改變或有新物質(zhì)生成。本實驗利用高效液相色譜法初步了解二者體外混合后的理化性質(zhì)變化，為兩種藥混用應(yīng)用及建立合理易行的全麻用藥方法提供藥學(xué)實驗論據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 儀器設(shè)備 高效液相色譜儀(Dionex Ultimate 3000)；ODS色譜柱(YMC-Pack ODS 250.0 mm×4.6 mm,5 μm)； 1 mL無菌注射器；過濾器(d=5 μm)；自動進樣器；恒溫三用水浴鍋(金壇市醫(yī)療儀器廠)；漩渦混合儀(上海滬西分析儀器廠)；電子分析天平(Mettler Toledo公司)。

1.1.2 藥品與試劑 丙泊酚對照品(中國藥檢所，批號100806，純度為99.8%)，依托咪酯對照品(中國藥檢所，批號101132，純度為99.8%)，乙腈(色譜純)，甲醇(色譜純)，雙蒸水，85%的磷酸溶液，磷酸鹽緩沖液。

1.2 方法

1.2.1 色譜條件 ODS色譜柱為C18柱(250.0 mm×4.6 mm,5 μm)，流動相為磷酸鹽緩沖液∶乙腈=35∶65(V/V)；pH7.4；柱溫即室溫；流速為1.0 mL/min；紫外檢測波長：全波長(190～800 nm)；進樣量為10 μL。

1.2.2 溶液的制備

1.2.2.1 磷酸鹽緩沖液的制備 精確稱取磷酸二氫鈉水合物2.76 g溶解于900 mL水中，待其溶解完全后定容至1 000 mL，用85%的磷酸調(diào)節(jié)pH至3.0，0.22 μm濾紙抽濾后4 ℃冰箱保存待用。

1.2.2.2 對照品儲備液的制備 丙泊酚對照品：精確稱取該品100 mg置于100 mL容量瓶中，用流動相溶解至刻度，配制成濃度為1 mg/mL的丙泊酚溶液，密封后4 ℃冰箱保存，使用前放至室溫。依托咪酯對照品：精確稱取該品100 mg置于100 mL容量瓶中，用流動相溶解至刻度，配制成濃度成1 mg/mL的依托咪酯溶液，密封后4 ℃冰箱保存，使用前放至室溫。

1.2.2.3 供試品溶液的制備 丙泊酚和依托咪酯混合品(10∶1)：精確量取20 mL丙泊酚及2 mL依托咪酯充分混合均勻，即配制成10∶1的混合溶液，現(xiàn)用現(xiàn)配。

1.2.3 專屬性實驗 取上述對照品溶液、供試品溶液，按1.2.1方法進樣測定，記錄色譜圖。

1.2.4 精密度實驗 精密量取1.2.2.3方法制得的供試品溶液10 μL，按照1.2.1的色譜洗脫條件連續(xù)進樣6次，測定丙泊酚和依托咪酯的峰面積。

1.2.5 重復(fù)性實驗 取1.2.2.3項下方法制備的供試品溶液6份，分別吸取10 μL進樣，測定相應(yīng)峰面積。

1.2.6 加樣回收率實驗 分別精密配置不同濃度比例的丙泊酚及依托咪酯混合液[16.0∶1.6，20∶2.0，24.0∶2.4(mg/mg)]各3份，加流動相溶解并稀釋至刻度，按上述色譜條件測定，記錄色譜圖。

1.2.7 穩(wěn)定性實驗 準備丙泊酚和依托咪酯供試品液5份，用磷酸調(diào)節(jié)pH至7.35～7.45，分別置于37 ℃恒溫水浴0、4、8、12、24 h，水浴完成后分別進樣10 μL，并分別記錄色譜圖。

2 結(jié) 果

2.1 專屬性實驗 輔料不干擾測定，供試品溶液的主峰保留時間與標準品一致；丙泊酚及依托咪酯標準品的保留時間分別為7.657 min和3.617 min，見圖1。

A:丙泊酚標準品色譜圖；B：依托咪酯標準品色譜圖；C：供試品色譜圖。

圖1 標準品高效液相色譜圖

2.2 精密度實驗 丙泊酚峰面積的標準偏差(relative standard deviation，RSD)為0.42%，依托咪酯峰面積的RSD為0.34%，表明該實驗儀器的精密度良好。

2.3 重復(fù)性實驗 根據(jù)測定相應(yīng)峰面積，按外標法測定標示含量，計算得丙泊酚平均值標示量為99.50%，RSD為0.50%，依托咪酯平均值標示量為99.80%，RSD為0.20%。

2.4 加樣回收率實驗 計算回收率，結(jié)果表明丙泊酚、依托咪酯平均加樣回收率分別為99.52%和98.94%，RSD分別為0.48%和1.23%，見表1。

2.5 穩(wěn)定性實驗 根據(jù)記錄色譜圖可知，在不同混合時間條件下、全波長檢測范圍內(nèi)與對照品相比，二者的保留時間幾無變化，也無新的特征峰出現(xiàn)，表示在此混合過程中無新物質(zhì)生成；丙泊酚峰面積的RSD為0.24%，依托咪酯峰面積的RSD為0.58%，見圖2。

表1 回收率實驗結(jié)果(n=9)

A:丙泊酚和依托咪酯混合0 h；B：丙泊酚和依托咪酯混合4 h；C：丙泊酚和依托咪酯混合8 h；D：丙泊酚和依托咪酯混合12 h；E：丙泊酚和依托咪酯混合24 h。

圖2 不同混合時間下的高效液相色譜圖

3 討 論

丙泊酚注射液麻醉誘導(dǎo)起效快[10]、蘇醒迅速且功能恢復(fù)完善[11]，術(shù)后惡心嘔吐發(fā)生率低；且能抑制咽喉反射，有利于插管，很少發(fā)生喉痙攣。但其易致血壓劇烈下降，明顯抑制呼吸，注射痛發(fā)生率高[12-13]。依托咪酯注射液是麻醉誘導(dǎo)常用的藥物之一[14-15]；但一次性劑量可使腎上腺皮質(zhì)對緊張刺激的反應(yīng)明顯減慢約4～6 h；持續(xù)使用本藥可能出現(xiàn)暫時性腎上腺皮質(zhì)功能低下。沒有接受過適當(dāng)前驅(qū)給藥的患者，使用單劑量后可能出現(xiàn)肌陣攣，導(dǎo)致惡心、嘔吐。Saricaoglu等[7]報道將兩種藥混合后在全麻誘導(dǎo)中的應(yīng)用，研究結(jié)果顯示二者混合后用于全麻誘導(dǎo)有有其明顯的優(yōu)勢，表現(xiàn)為血流動力學(xué)比單純使用丙泊酚更穩(wěn)定；注射痛和肌陣攣的發(fā)生率降低；達到相同麻醉深度所需要的時間更短。鑒于二者藥理學(xué)作用互補，藥動學(xué)特點相似，兩種藥的溶媒都是中長鏈飽和脂肪乳。本文將二者體外模擬體內(nèi)條件進行混合后，采用全波長高效液相色譜法進行實驗，發(fā)現(xiàn)不同混合時間下的保留時間無明顯差異，說明二者混合后無第3種物質(zhì)生成。這些實驗結(jié)果表明丙泊酚注射液和依托咪酯注射液模擬條件下的混合品未發(fā)生化學(xué)變化。本實驗建立了簡單、快速的高效液相色譜法，為兩藥混合應(yīng)用或制成復(fù)方制劑、建立合理易行的全麻用藥方法提供藥學(xué)實驗論據(jù)。

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HPLC for determinating the pharmacy changes of propofol and etomidate solution after mixing*

LiaoYong，YouYan

(DepartmentofPharmacy,RenheHospital,ThreeGorgesUniversity,Yichang,Hubai443001,China)

Objective To establish a high performance liquid chromatography (HPLC) method for determinating the related substances of propofol and etomidate after mixing.Methods With octadecylsilane chemically bonded silica as the filler (250 mm×4.6 mm,5 μm),the mixture of phosphate buffer-acetonitrile(phosphate buffer:acetonitrile =35:65(V/V)) was acted as the mobile phase,and adjusting PH to 7.4.The UV detection wavelength:190-800 nm.The column temperature:30 ℃.The flow rate:1.0 mL/min.The injection volume:10 μL.The comparison result of standard substance and reference substance were used to confirm whether there was a new sabstance in the spectrum.Results There was no new substance generated.Conclusion There was no new substance generated of propofol and etomidate mixture by this simple,rapid and accurate method.

propfol；etomidate;HPLC;chemical stability

10.3969/j.issn.1671-8348.2017.03.027

湖北省宜昌市科技局計劃項目(A13301-40)。 作者簡介：廖勇(1972-)，副主任藥師，本科，主要從事臨床藥學(xué)方面研究。

R917

A

1671-8348(2017)03-0373-03

2016-07-22

2016-10-10)