胚蛋給養(yǎng)蛋氨酸對(duì)朗德鵝生長性能和抗氧化性能的影響

滕戰(zhàn)偉，李德生，徐 晗，周海柱，婁玉杰

（吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，吉林長春 130118）

胚蛋給養(yǎng)蛋氨酸對(duì)朗德鵝生長性能和抗氧化性能的影響

滕戰(zhàn)偉，李德生，徐 晗，周海柱，婁玉杰*

（吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，吉林長春 130118）

本試驗(yàn)采用胚蛋注射技術(shù)研究孵化后期補(bǔ)充外源性營養(yǎng)物質(zhì)蛋氨酸（Met）對(duì)朗德鵝生長性能和抗氧化性能的影響。選取300枚種蛋隨機(jī)分為2組，每組3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)50枚種蛋。在孵化第24天進(jìn)行Met注射，對(duì)照組不做任何處理，處理組注射Met營養(yǎng)液（Met 5 mg/mL，NaCl 7.5 mg/mL）1.5 mL。出雛后，每個(gè)重復(fù)選取體重均勻、健康的雛鵝20只進(jìn)行飼養(yǎng)試驗(yàn)，飼養(yǎng)28 d。結(jié)果表明：處理組對(duì)孵化率無顯著影響（P＞0.10），但顯著提高了朗德鵝初生重（P＜0.05），顯著提高了0～7日齡平均日增重并顯著降低了飼料增重比（P＜0.05）；處理組降低了血清和肝臟中氧化型谷胱甘肽（ GSSG）和丙二醛（MDA）含量（P＜0.05）；提高了還原型谷胱甘肽（GSH）的含量和谷胱甘肽過氧化物酶（ GSH-Px）酶活性以及GSH和 GSSG的比值（P＜0.05）。試驗(yàn)結(jié)果顯示，孵化后期給養(yǎng)Met可顯著提高朗德鵝初生重，提高機(jī)體的抗氧化能力，促進(jìn)了機(jī)體生長。

胚蛋給養(yǎng)；鵝；蛋氨酸；生長性能；抗氧化性能

蛋氨酸在家禽生產(chǎn)上具有重要作用，不僅參與機(jī)體蛋白質(zhì)的合成，而且能提高機(jī)體的免疫機(jī)能和抗氧化性能等。蛋氨酸的相關(guān)代謝產(chǎn)物及硫化物，如半胱氨酸、?；撬岬龋瑢?duì)機(jī)體的氧化還原平衡狀態(tài)具有重要作用，其中半胱氨酸在細(xì)胞中可以合成谷胱甘肽，并且可以提高機(jī)體的谷胱甘肽過氧化物酶活性。研究表明，提高日糧的蛋氨酸水平可以提高低孵化重肉雞中的超氧化物歧化酶（SOD）的活力，降低肝臟中丙二醛的含量以及改善肝臟還原型谷胱甘肽（ GSH）系統(tǒng)的氧化還原狀態(tài)來提高其生長性能[1]。朗德鵝是世界著名的肥肝專用品種。研究表明，蛋氨酸的中間產(chǎn)物--牛磺酸可以起到保護(hù)肝臟的作用，可以抵抗肝臟的脂質(zhì)過氧化和肝臟的纖維化[2]。本試驗(yàn)利用胚蛋注射技術(shù)來探索蛋氨酸對(duì)朗德鵝生長性能和抗氧化性能的影響，為蛋氨酸在鵝生產(chǎn)中的應(yīng)用提供理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料 試驗(yàn)所用種蛋購自吉林省梅河口市德坤禽類食品有限公司，種蛋保存時(shí)間均在7 d以內(nèi)。DL-蛋氨酸購自諾偉司飼料添加劑（上海）有限公司，其純度≥99%。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與分組 本試驗(yàn)采用單因素完全隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì)。選擇母鵝產(chǎn)蛋史、產(chǎn)次和營養(yǎng)攝入相近的朗德鵝種鵝種蛋300枚，依據(jù)種蛋的儲(chǔ)存時(shí)間（7 d內(nèi)）、種蛋重及蛋形指數(shù)將其分為3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)50枚種蛋。在種蛋孵化期的第24天進(jìn)行胚蛋給養(yǎng)，對(duì)照組不進(jìn)行任何處理，處理組每枚種蛋注射1.5 mL的蛋氨酸營養(yǎng)液，濃度為Met 5 mg/mL、NaCl 7.5 mg/mL。孵化至出雛后，每個(gè)重復(fù)挑選20只健康且體重?zé)o統(tǒng)計(jì)學(xué)差異的雛鵝進(jìn)行飼養(yǎng)，試驗(yàn)周期為28 d。

1.3 種蛋的孵化 選擇德州科裕孵化設(shè)備有限公司制造的科裕CFZ微電腦全自動(dòng)孵化機(jī)進(jìn)行孵化。根據(jù)鵝的胚胎發(fā)育規(guī)律孵化分為前期1～14 d、中期為15～28 d、后期在29～30 d 3個(gè)階段。孵化期采用全進(jìn)全出制變溫孵化。3個(gè)階段的濕度和溫度各不相同，分別控制在70%和37.8℃、65%和37.5℃以及72%和36.5℃。由于鵝蛋蛋殼相對(duì)較厚，蛋殼的表面積相對(duì)小，孵化后期產(chǎn)熱增加，影響胚蛋內(nèi)羊水和卵黃囊營養(yǎng)吸收，導(dǎo)致胚胎提前出殼或者死胚。所以，從孵化的第18 天開始至第24 天，每天中午涼蛋1次，第25～28天，每天涼蛋3次。在孵化的29 d將胚蛋轉(zhuǎn)入出雛機(jī)內(nèi)繼續(xù)孵化直至出殼。其他孵化管理按常規(guī)孵化程序進(jìn)行。

1.4 胚蛋給養(yǎng) 胚蛋給養(yǎng)參照Tako等[3]方法，并進(jìn)行了修改，具體步驟：首先通過照蛋，確定注射部位羊膜腔的位置，然后用75%的酒精棉球?qū)︹g端注射部位進(jìn)行消毒，在消毒過的區(qū)域鉆適宜大小的孔，用5 mL注射器垂直進(jìn)針（深度為2 cm左右），將營養(yǎng)液注射到羊膜腔中（1.5 mL/枚），為避免感染，每枚胚蛋用1枚針頭。注射完畢后經(jīng)再次消毒后，用滅菌的石蠟迅速封口，然后按照正常的孵化程序繼續(xù)孵化直至出殼。

1.5 飼養(yǎng)管理 參照NRC（1994）推薦的鵝營養(yǎng)需要來配制飼糧[4]（表1），出殼后雛鵝分為3個(gè)重復(fù)進(jìn)行飼養(yǎng)，在出殼后12 h內(nèi)開水，24 h內(nèi)開食，并嚴(yán)格控制飼養(yǎng)環(huán)境條件。雛鵝的飼養(yǎng)管理和免疫按照正常的程序進(jìn)行。

1.6 樣品采集 在出殼當(dāng)天（出殼2 h以內(nèi)，0 d）、第7天（7 d）、和第28天（28 d）從每組選取6羽（每個(gè)重復(fù)2羽）鵝胚/雛鵝進(jìn)行組織樣品采集。在雛鵝第7、28天頸靜脈取血液樣品5 mL于離心管中，3 000×g離心15 min，將上清液分裝于0.5 mL的EP管中，置于-80℃低溫冰箱中保存待測。試驗(yàn)雛鵝采血完畢，頸部放血致死，將肝臟樣品完整取出，用預(yù)冷的生理鹽水小心沖洗并去除其上附屬的其他組織，然后將其分成3份，迅速放入準(zhǔn)備好的液氮中冷凍，置于-80℃超低溫冰箱中保存用于抗氧化性能的測定。

1.7 指標(biāo)測定與方法

1.7.1 孵化率測定 雛鵝完全出雛后，按重復(fù)來計(jì)算孵化率，其中胚蛋注射前（孵化第23天）通過照蛋檢測到的死胚不統(tǒng)計(jì)在內(nèi)。

1.7.2 生長性能測定 每天記錄采食量，分別于出殼后第0、7、28天按重復(fù)數(shù)記錄體重，計(jì)算平均日采食量（ADFI）、平均日增重（ADG）和飼料增重比（F/ G）。

1.7.3 血清與肝臟抗氧化指標(biāo)測定 氧化型谷胱甘肽（ GSSG）、還原型谷胱甘肽（ GSH）、谷胱甘肽過氧化物酶（ GSH-Px）和丙二醛（MDA）等指標(biāo)均采用南京建成生物工程研究所的試劑盒進(jìn)行測定。

表1 基礎(chǔ)日糧組成和營養(yǎng)成分（風(fēng)干基礎(chǔ)）

1.8 統(tǒng)計(jì)分析 試驗(yàn)數(shù)據(jù)經(jīng)Excel 2010進(jìn)行整理歸納后，用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，采用t-text進(jìn)行差異顯著性檢驗(yàn)，以P＜0.05為顯著性判斷標(biāo)準(zhǔn)，以0.05≤P＜0.10為有趨勢判斷標(biāo)準(zhǔn)。所有數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤表示。

2 結(jié)果分析

2.1 胚蛋給養(yǎng)蛋氨酸對(duì)朗德鵝生長性能的影響由表2可知，胚蛋給養(yǎng)蛋氨酸對(duì)孵化率無顯著影響（P＞0.10），但顯著提高了朗德鵝的初生重（P＜0.05）。胚蛋給養(yǎng)蛋氨酸對(duì)0 ～7 d的ADFI無顯著影響（P＞0.10），但顯著提高了0～7 d朗德鵝的ADG（P＜0.05）并顯著降低了0～7 d朗德鵝的F/G（P＜0.05）。胚蛋給養(yǎng)蛋氨酸對(duì)7 ～28 d和0 ～ 28 d的生長性能無顯著性的影響（P＞0.10）。

2.2 胚蛋給養(yǎng)蛋氨酸對(duì)朗德鵝血清抗氧化指標(biāo)的影響 由表3可知，與對(duì)照組相比胚蛋給養(yǎng)蛋氨酸有降低7 d血清中 GSSG含量的趨勢（0.05≤P＜0.10）；顯著提高了7 d血清中的 GSH含量（P＜0.05）和GSH/ GSSG（P＜0.05），但在28 d時(shí)對(duì)其均無顯著性影響（P＞0.10）。

表2 胚蛋給養(yǎng)蛋氨酸對(duì)朗德鵝生長性能的影響

表3 胚蛋給養(yǎng)蛋氨酸對(duì)朗德鵝血清氧化型和還原型GSH的影響

由表4可知，胚蛋給養(yǎng)蛋氨酸顯著降低了7 d血清中的MDA含量（P＜0.05），但對(duì)28 d血清的MDA含量無顯著影響（P＞0.10）。對(duì)7 d和28 d血清中的 GSH-Px活性均無顯著性影響（P＞0.10）。

2.3 胚蛋給養(yǎng)蛋氨酸對(duì)朗德鵝肝臟抗氧化指標(biāo)的影響 由表5可知，胚蛋給養(yǎng)蛋氨酸顯著降低了0 d和7 d肝臟的GSSG含量（P＜0.05），顯著提高了0 d肝臟的 GSH含量（P＜0.05），對(duì)7 d和28 d 肝臟 GSH含量有提高趨勢（0.05≤P＜0.10），對(duì)28 d肝臟的 GSSG含量無顯著性影響（P＞0.10），但試驗(yàn)全程提高了 GSH / GSSG （P＜0.05）。

表4 胚蛋給養(yǎng)蛋氨酸對(duì)朗德鵝血清GSH-PxHE 和MDA的影響

由表6可知，與對(duì)照組相比處理組顯著的提高了0 d和7 d肝臟的 GSH-Px活性（P＜0.05），顯著性降低了0 d肝臟的MDA含量（P＜0.05），對(duì)28 d肝臟的 GSH-Px活性和7 d和28 d肝臟的MDA含量無顯著性影響（P＞0.10）。

表5 胚蛋給養(yǎng)蛋氨酸對(duì)朗德鵝肝臟氧化型和還原型GSH的影響

表6 胚蛋給養(yǎng)蛋氨酸對(duì)朗德鵝肝臟GSH-PxHE 和MDA的影響

3 討 論

3.1 胚蛋給養(yǎng)蛋氨酸對(duì)朗德鵝孵化率的影響 孵化率是影響家禽養(yǎng)殖業(yè)經(jīng)濟(jì)效益的一個(gè)關(guān)鍵因素，故孵化率是胚蛋給養(yǎng)是否成功的一個(gè)重要考察指標(biāo)。胚蛋給養(yǎng)的時(shí)間、胚蛋的種類、注射液的滲透壓、注射體積等諸多因素都對(duì)孵化率有不同程度的影響[5]。研究表明，在胚胎后期給胚胎補(bǔ)充外源性的碳水化合物可以提高鴿的孵化率，而在鴨上孵化率是降低的[6-7]。Zhai等[8]研究表明胚蛋注射左旋肉堿對(duì)孵化率沒有影響，李德生[9]研究表明胚蛋注射蛋氨酸對(duì)吉林白鵝的孵化率無顯著影響，本試驗(yàn)研究的研究結(jié)果與其一致。這表明本試驗(yàn)給養(yǎng)蛋氨酸的處理是成功的，可用于后續(xù)進(jìn)一步的研究。

3.2 胚蛋給養(yǎng)蛋氨酸對(duì)朗德鵝生長性能的影響 家禽孵化后期由于胚胎機(jī)體活動(dòng)加強(qiáng)如開始轉(zhuǎn)身、破殼等，而此時(shí)胚蛋內(nèi)的碳水化合物不足，機(jī)體會(huì)通過糖異生作用動(dòng)員胸肌中的蛋白質(zhì)來維持代謝需要，這直接影響了胚胎的胸肌發(fā)育，各組織器官發(fā)育也受到了影響，進(jìn)而可能會(huì)影響禽類的初生重。日糧中添加蛋氨酸提高了胸肌Myf5和MEF2B的相對(duì)表達(dá)量并降低了MSTN的表達(dá)量進(jìn)而促進(jìn)了肉雞的胸肌發(fā)育[10]。Coskun等[11]研究表明，胚蛋給養(yǎng)蛋氨酸顯著提高了雞的出殼重。李世召等[12]研究表明，胚蛋內(nèi)給養(yǎng)3 mg維生素C顯著提高了肉仔雞的初生重，并顯著降低了1～42 d的F/G。本試驗(yàn)研究表明，胚蛋給養(yǎng)蛋氨酸顯著提高了初生重和0～7 d的ADG，顯著降低了0～7 d的F/G，同上述研究結(jié)果相似，這可能是由于胚蛋給養(yǎng)蛋氨酸提供了腸道發(fā)育所需的氨基酸，促進(jìn)了肌肉發(fā)育。陳偉[6]和李德生等[9]在鴨和吉林白鵝上的研究指出，胚蛋給養(yǎng)二糖和蛋氨酸促進(jìn)了腸道和胸肌發(fā)育，這進(jìn)一步說明了本試驗(yàn)的結(jié)果。

3.3 胚蛋給養(yǎng)蛋氨酸對(duì)朗德鵝抗氧化性能的影響動(dòng)物機(jī)體在生長過程中會(huì)產(chǎn)生大量的自由基，其過度積累會(huì)對(duì)機(jī)體造成氧化應(yīng)激，機(jī)體通過自身的抗氧化系統(tǒng)來清除過多的自由基。含硫氨基酸通過自身的抗氧化作用或者生成能夠起到抗氧化作用的代謝產(chǎn)物來實(shí)現(xiàn)抗氧化作用[14]。

GSH在細(xì)胞的脂質(zhì)過氧化損傷防御中發(fā)揮著重要作用，其含量及相關(guān)酶活性可作為反映機(jī)體抗氧化狀態(tài)的標(biāo)志。其原因是， GSH是 GSH-Px的底物，在清除細(xì)胞內(nèi)的過氧化氫（H2O2）及脂類過氧化物上發(fā)揮作用；此外， GSH也能夠單獨(dú)地與烷自由基、過氧自由基、半醌自由基等眾多自由基發(fā)生作用[15]。蛋氨酸能夠參與體內(nèi)甲基基團(tuán)代謝以及參與半胱氨酸合成，而半胱氨酸又是組織中合成GSH和牛磺酸的前體物質(zhì)。

GSH-Px能夠通過催化 GSH與過氧化氫反應(yīng)生成 GSSG來清除過氧化氫。 GSSG可在 GSSG還原酶的催化下形成 GSH或者直接清除出細(xì)胞。在細(xì)胞內(nèi) GSH/ GSSG的和 GSH的含量能反映出硫醇的氧化還原狀態(tài)。本試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)胚蛋給養(yǎng)蛋氨酸增加了 GSH的含量以及降低了 GSSG的含量，而且提高了雛鵝血清和肝臟的 GSH-Px活性。這同李豪[16]在仔豬上的研究結(jié)果較為相似。蛋氨酸在轉(zhuǎn)甲基和轉(zhuǎn)硫的作用下能夠生成半胱氨酸，而半胱氨酸又是谷胱甘肽合成的限速氨基酸，因此，胚蛋給養(yǎng)Met增加了機(jī)體的 GSH含量。

MDA是機(jī)體脂質(zhì)過氧化的產(chǎn)物，其在組織中的含量反映了機(jī)體脂質(zhì)過氧化自由基的存在和細(xì)胞的被氧化程度，所以其含量的高低不僅反映了機(jī)體脂質(zhì)的氧化程度，并且間接反映了細(xì)胞的受損程度[15]。葉慧等[13]研究表明，隨著日糧中蛋氨酸水平的提高，獅頭鵝血清中MDA的含量也隨著降低。本試驗(yàn)研究表明，胚蛋給養(yǎng)蛋氨酸降低了血清和肝臟中的MDA含量，同葉慧等[13]的研究結(jié)果相似，這進(jìn)一步說明胚蛋給養(yǎng)蛋氨酸提高了機(jī)體的抗氧化能力。

4 結(jié) 論

胚蛋給養(yǎng)蛋氨酸對(duì)孵化率無顯著性影響，但顯著提高了朗德鵝的初生重，提高了0～7日齡的平均日增重并降低了飼料增重比，促進(jìn)了生長。

胚蛋給養(yǎng)蛋氨酸提高了機(jī)體血清和肝臟的 GSH和 GSH-Px含量，降低了 GSSG和MDA含量，在一定程度上提高了朗德鵝的抗氧化能力。

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S835.5

A

10.19556/j.0258-7033.2017-01-066

2016-06-13；

2016-07-16

國家自然科學(xué)基金（31372331）

滕戰(zhàn)偉（1988-），男，河南鄢陵人，碩士研究生，動(dòng)物營養(yǎng)與飼料科學(xué)專業(yè),E-mail: tengwei416@126.com

*通訊作者：婁玉杰，教授，博士生導(dǎo)師，E-mail: lyjjlau@ 163.com