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      鐵皮石斛的組培快繁技術(shù)研究進(jìn)展

      2017-02-04 15:45劉和平唐海堯林劍波張俊麗李彤豐關(guān)廣勝
      現(xiàn)代園藝 2017年18期
      關(guān)鍵詞:原球莖莖段外植體

      陳 勇 劉和平唐海堯 林劍波 張俊麗 李彤豐 關(guān)廣勝

      (陽江職業(yè)技術(shù)學(xué)院,廣東 陽江 529566)

      鐵皮石斛的組培快繁技術(shù)研究進(jìn)展

      陳 勇 劉和平*唐海堯 林劍波 張俊麗 李彤豐 關(guān)廣勝

      (陽江職業(yè)技術(shù)學(xué)院,廣東 陽江 529566)

      鐵皮石斛是我國名貴瀕危藥材,藥效顯著,但是傳統(tǒng)種植方法繁殖率低,利用組織培養(yǎng)繁殖技術(shù),擴(kuò)大鐵皮石斛產(chǎn)量,成為提高其經(jīng)濟(jì)價值的重要方式。本文參考多年來國內(nèi)外鐵皮石斛組織培養(yǎng)相關(guān)文獻(xiàn),對鐵皮石斛的快速繁殖關(guān)鍵技術(shù)進(jìn)行了總結(jié)。

      鐵皮石斛;組織培養(yǎng);快速繁殖

      1 鐵皮石斛快速繁殖關(guān)鍵技術(shù)

      1.1 外植體選取

      鐵皮石斛自然繁殖率低下,因此,利用組織培養(yǎng)技術(shù)來快速繁殖是解決鐵皮石斛種苗的有效途徑。目前,鐵皮石斛外植體主要有種子、無菌苗幼苗莖段等。饒寶蓉[3]等研究表明,從無菌系建立效率來看,種子外植體優(yōu)于莖段外植體,種子誘導(dǎo)感染率為8%~13%,而莖段誘導(dǎo)感染率為48%~62%。從生長整齊度來看,也是種子外植體優(yōu)于莖段外植體。

      2.2 初代培養(yǎng)基選擇

      在鐵皮石斛的組織培養(yǎng)技術(shù)中,選擇合適的培養(yǎng)基是尤為關(guān)鍵的環(huán)節(jié),不同的物種、同一物種不同品種、同一植物不同位置的外植體材料,在不同培養(yǎng)階段、不同培養(yǎng)目的,所對應(yīng)的最適培養(yǎng)基也不同。

      2.2.1 基本培養(yǎng)基。初代培養(yǎng)基時常用誘導(dǎo)或分化培養(yǎng)基,培養(yǎng)基中的生長素和細(xì)胞分裂素的配比和濃度最為重要,誘導(dǎo)不定芽時,需要較高的細(xì)胞分裂素。誘導(dǎo)愈傷組織形成,增加生長素的濃度,并補(bǔ)充一定濃度的細(xì)胞分裂素是十分必要的。鐵皮石斛組織培養(yǎng)基包括MS、1/2MS、改良MS、B5、VW等,主要由于外植體來源不同所致。

      林江波[4]等研究得出,通過對各處理因子不同水平的SSR檢驗(yàn),MS和1/2MS基本培養(yǎng)基的誘導(dǎo)率均值分別為28.5和17.3,差異不顯著,與VW誘導(dǎo)率均值4.9差異達(dá)到顯著水平;楊立昌[5]等研究發(fā)現(xiàn),鐵皮石斛的愈傷組織在1/2MS培養(yǎng)基上的出芽率比MS培養(yǎng)基要好,說明在適當(dāng)?shù)募に貪舛燃捌浣M合下,低鹽培養(yǎng)基有利于不定芽的分化。

      2.2.2 激素及添加物。鐵皮石斛的愈傷組織培養(yǎng)常用的基本激素主要有6-BA、2,4-D、NAA、IBA等。常用的添加物主要為一些天然有機(jī)物,這些都能夠?yàn)橥庵搀w提供一些必要的微量營養(yǎng)成分、生理活性物質(zhì)和生長激素等,對鐵皮石斛原球莖的增殖和分化有促進(jìn)作用。王福喜[6]通過試驗(yàn)發(fā)現(xiàn),添加6-BA 4.0mg/L+NAA 0.5mg/L+IBA 0.3mg/L的改良MS培養(yǎng)基培養(yǎng),增值率1∶5以上,可見增值率高。蔣向輝[7]等在用赤霉素處理對幼葉成苗的試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn),成苗率明顯較高,且最適濃度是1.5mg/L。

      2.3 繼代培養(yǎng)基選擇

      鐵皮石斛原球莖增殖是鐵皮石斛組織培養(yǎng)過程中一個十分重要的環(huán)節(jié),通過誘導(dǎo)石斛產(chǎn)生原球莖,可為之后的分化、壯苗生根奠定基礎(chǔ)。培養(yǎng)基中,植物生長調(diào)節(jié)劑對植物細(xì)胞分裂、誘導(dǎo)器官形成和次生產(chǎn)物的合成都具有重要作用。但由于不同品種或不同增殖途徑等原因,所研究得出的結(jié)果也不盡相同。

      2.3.1 原球莖增殖與分化。唐桂香[8]等研究表明,不論是固體還是液體培養(yǎng)基,均以添加6-BA 1.0mg/L和NAA 0.1mg/L有利于原球莖誘導(dǎo)增殖,增殖系數(shù)分別達(dá)到10.3和17.1。林江波[4]等研究表明,通過對各處理因子不同水平的SSR檢驗(yàn),原球莖增殖的最佳培養(yǎng)基為MS9+蔗糖30g/L;原球莖分化的最佳培養(yǎng)基為1/2MS+蔗糖10g/L+10%馬鈴薯泥;陳兆貴[9]等研究表明,原球莖增殖以MS+NAA 1.0mg/L+6-BA 1.0mg/L+KT 1.0mg/L培養(yǎng)增殖倍數(shù)達(dá)到5倍;原球莖分化以MS+NAA 1.0mg/L+6-BA 3.0mg/L+KT 1.0mg/L培養(yǎng)分化率達(dá)84%。

      謝啟鑫等[10]研究得出,原球莖增殖的最佳培養(yǎng)基為1/2MS+0.5mg/L 6-BA+0.5mg/LNAA+20%馬鈴薯提取液,每代增殖16倍,原球莖形態(tài)好、變異少;原球莖團(tuán)于1/2MS+2mg/L 6-BA+0.25mg/LNAA+20%馬鈴薯提取液的培養(yǎng)基上可誘導(dǎo)叢芽分化,于MS+0.5mg/LNAA+20%香蕉汁+活性炭5g/L的培養(yǎng)基上易于誘導(dǎo)不定根的形成,60d后可形成健壯的完整小植株。

      2.3.2 芽增殖。李宏博[11]等研究表明,在B5+蔗糖30 g/L+NAA 0.2mg/L+香蕉汁100mg/L+瓊脂5.5g/L培養(yǎng),芽增殖效果較優(yōu)。藺紅蘋[12]等研究,以石斛蘭幼芽得出較好的繼代培養(yǎng)基為MS+6-BA 0.5mg/L+2,4-D 0.5mg/L+10%椰乳。在試驗(yàn)結(jié)果中可以看出,在適宜石斛蘭生長的生長素和細(xì)胞分裂素濃度的范圍內(nèi),生長素和細(xì)胞分裂素的比值越小,越有利于芽的生長。且在培養(yǎng)基中添加適量的活性碳,可以防止植物組織自身的酚類物質(zhì)排泌和變褐老化,對形態(tài)發(fā)生和器官形成有良好作用,通常使用濃度為0.5~10g/L。

      在前人研究的結(jié)果中可以看出,不同的研究人員,在鐵皮石斛培養(yǎng)的不同階段,所得出的結(jié)果都有小的區(qū)別。這可能跟不同研究人員選取的鐵皮石斛品種不同、外植體類型不同而造成。因此,在鐵皮石斛組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基配方選擇上,要根據(jù)具體的品種、外植體類型等實(shí)際情況選擇培養(yǎng)配方。

      1 自美發(fā),黃敏.鐵皮石斛組培技術(shù)研究[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2008(36)

      2 陸兵.鐵皮石斛組織培養(yǎng)研究進(jìn)展[J].黑龍江農(nóng)業(yè)科學(xué),2009(2)

      3 饒寶蓉,陳泳和,江文清等.鐵皮石斛不同外植體組培快繁技術(shù)比較[J].安徽農(nóng)業(yè)科技,2017(4)

      4 林江波,王偉英,李海明等.鐵皮石斛莖段原球莖的誘導(dǎo)、分化與植株再生[J].福建農(nóng)業(yè)學(xué)報,2016(31)

      5 楊立昌,乙引等.鐵皮石斛快速繁殖體系研究[J].北方園藝,2010(22)

      6 王福喜.鐵皮石斛組織培養(yǎng)研究[J].陰山學(xué)刊,2011(1)

      7 蔣向輝,余朝文等.不同激素濃度對鐵皮石斛高效快速繁殖體系的影響[J].江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué),2010(1)

      8 唐桂香,黃福燈,周偉軍.鐵皮石斛的種胚萌發(fā)及其離體繁殖研究[J].中國中藥雜志,2005(20)

      9 陳兆貴,譚俊.不同激素配比對鐵皮石斛組織培養(yǎng)的影響研究[J].惠州學(xué)院學(xué)報,2006(3)

      10 謝啟鑫,宋小明,黃東華,等.鐵皮石斛的種子培養(yǎng)[J].北方園藝,2010(8)

      11 李宏博,張宏宇,樸鐘云.鐵皮石斛組織培養(yǎng)研究[A].第九屆全國藥用植物及植物藥學(xué)術(shù)研討會論文集[C],2010

      12 藺紅蘋.不同培養(yǎng)基成分對石斛蘭繼代和生根的影響[J].北方園藝,2010(4)

      陳勇(1986-),男,廣東吳川人,助理實(shí)驗(yàn)師,從事園藝專業(yè)教學(xué)與科研工作。

      *通訊作者:劉和平(1976-),湖南衡陽人,博士,副教授,從事園林植物生物技術(shù)、園林植物栽培。

      (責(zé)任編輯 王蔓)

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