動(dòng)物源性食品中獸藥殘留快速檢測技術(shù)研究進(jìn)展

陳小聰

（廣西-東盟食品藥品安全檢驗(yàn)檢測中心，廣西南寧530001）

動(dòng)物源性食品中獸藥殘留快速檢測技術(shù)研究進(jìn)展

陳小聰

（廣西-東盟食品藥品安全檢驗(yàn)檢測中心，廣西南寧530001）

對動(dòng)物源性食品中獸藥殘留快速檢測方法中的酶聯(lián)免疫技術(shù)、生物芯片技術(shù)、生物傳感器技術(shù)、拉曼光譜檢測技術(shù)等的研究進(jìn)展進(jìn)行了綜述，并對其發(fā)展前景進(jìn)行了展望和建議。

動(dòng)物源性食品；快速檢測；獸藥殘留

0 引言

隨著畜牧業(yè)規(guī)?；彤a(chǎn)業(yè)化，為了防止群體染病事件的發(fā)生，同時(shí)為了追求利益的最大化，養(yǎng)殖過程中獸藥的使用量和使用范圍逐漸被擴(kuò)大化，國家對于獸藥的安全使用有很多規(guī)定，但因?yàn)轲B(yǎng)殖者對法律法規(guī)及相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)的不了解或受到利益的驅(qū)動(dòng)，濫用、誤用獸藥，極易造成獸藥殘留超標(biāo)。食品安全監(jiān)控體系不斷發(fā)展完善，但獸藥殘留依然是動(dòng)物源性食品中安全監(jiān)管的重點(diǎn)和熱點(diǎn)。我國國家標(biāo)準(zhǔn)中獸藥殘留的檢測方法有氣相色譜法、液相色譜法、薄層色譜法、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法、液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法等[1]，但是這些方法存在預(yù)處理復(fù)雜、需要配備昂貴的大型儀器、操作繁瑣、對人員素質(zhì)要求高、試驗(yàn)成本高等缺點(diǎn)，不利于進(jìn)行食品安全監(jiān)管的現(xiàn)場快速檢測；而一些快檢技術(shù)（如免疫技術(shù)、生物傳感器技術(shù)、拉曼光譜檢測技術(shù)）具有快捷、簡便、成本低等特點(diǎn)，被廣泛運(yùn)用。對近幾年動(dòng)物源性食品中獸藥殘留快速檢測技術(shù)進(jìn)行綜述，重點(diǎn)介紹了酶聯(lián)免疫技術(shù)、生物芯片技術(shù)、生物傳感器技術(shù)、拉曼光譜檢測技術(shù)等快速檢測技術(shù)，并對快速檢測技術(shù)在食品分析領(lǐng)域中，尤其是動(dòng)物源性食品中獸藥殘留的應(yīng)用前景進(jìn)行了展望。

1 免疫技術(shù)

1.1 酶聯(lián)免疫技術(shù)

酶聯(lián)免疫技術(shù)是由免疫技術(shù)與現(xiàn)代測試手段相結(jié)合而建立的一種超微量測定技術(shù)[2]，對于獸藥殘留的檢測一般采用3種競爭分析模式，即抗體包被直接競爭、抗原包被直接競爭和間接競爭[3]。Wang L等人[4]進(jìn)行膠體金吸附和酶聯(lián)免疫吸附交叉試驗(yàn)，這2種方法獲得良好的相關(guān)性，可以快速測試動(dòng)物源食品中14種磺胺殘留。王忠斌等人[5]建立了氨基糖苷類抗生素多殘留的直接競爭ELISA分析方法，快速檢測新霉素、卡那霉素、慶大霉素、鏈霉素等獸藥中常用的氨基糖苷類抗生素。王自良等人[6]研制的苯巴比妥ELISA試劑盒，線性檢測范圍廣，達(dá)1.0～81.0 ng/mL，靈敏度高，檢測限低。王選年等人[7]研制的鹽酸克倫特羅ELISA試劑盒，線性檢測范圍為0.5～128.0 ng/mL，與腎上腺素、去甲腎上腺素、萊克多巴胺及多種抗生素均無交叉反應(yīng)性。

1.2 膠體金免疫技術(shù)

膠體金免疫技術(shù)起步于20世紀(jì)70年代，具有體積較小、操作簡單、出具結(jié)果快等特點(diǎn)。近年來，膠體金免疫層析技術(shù)發(fā)展很快，已應(yīng)用在小分子物質(zhì)的檢測上。Zhu Y等人[8]研制出檢測12種喹諾酮類藥物在雞肉和雞肝中殘留的免疫層析試紙條，在能識(shí)別氟喹諾酮藥物的單克隆抗體基礎(chǔ)上，成功研制出了可以同時(shí)檢測12種氟喹諾酮類藥物的膠體金快速檢測試紙條。諾氟沙星及培氟沙星在雞肉和雞肝中的檢測限為25 ng/L，恩諾沙星、環(huán)丙沙星、氟甲喹、氧氟沙星、依諾沙星、洛美沙星、達(dá)氟沙星、氨氟沙星、惡喹酸及麻保沙星在雞肉和雞肝中的檢測限達(dá)到50 μg/kg，整個(gè)過程在10 min之內(nèi)完成。劉烜等人[9]采用免疫競爭法研制出一種快速檢測喹諾酮類藥物殘留的免疫層析法，在檢測肌肉等組織樣品時(shí)，靈敏度最低值為10 ng/mL，只需3～5 min，與類似物無交叉反應(yīng)。

1.3 化學(xué)發(fā)光微粒子免疫技術(shù)

化學(xué)發(fā)光微粒子免疫技術(shù)是近年來發(fā)展較快的新型檢測技術(shù)?？藗愄亓_也稱“瘦肉精”，快檢方法多為酶聯(lián)免疫法。牛治存等人[10]應(yīng)用化學(xué)發(fā)光微粒子免疫分析技術(shù)研發(fā)克倫特羅化學(xué)發(fā)光快速檢測試劑盒，采用直接競爭CMIA方法，配合貴州勤邦食品安全科學(xué)技術(shù)有限公司研制的磁免疫全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光檢測儀，用光子計(jì)數(shù)儀測定光子計(jì)數(shù)的強(qiáng)度與克倫特羅藥物濃度負(fù)相關(guān)得出克倫特羅的含量。黨娟等人[11]運(yùn)用化學(xué)發(fā)光微粒子免疫法對牛肝、牛肉樣品中阿維菌素類藥物殘留進(jìn)行檢測，結(jié)果表明檢測靈敏度與可測范圍遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于酶聯(lián)免疫法，且兼具了ELISA法的簡便操作和短時(shí)反應(yīng)等性能。

2 生物芯片技術(shù)

生物芯片技術(shù)使用了微光技術(shù)，根據(jù)分子間特異性相互作用的原理，將不連續(xù)的分析過程集成于硅芯片、玻璃芯片等，進(jìn)入計(jì)算機(jī)系統(tǒng)，以實(shí)現(xiàn)對細(xì)胞、蛋白質(zhì)、基因及其他生物組分的檢測[12]。分別為基因芯片、蛋白質(zhì)芯片、細(xì)胞芯片等，其中以蛋白芯片發(fā)展最為迅速。陳愛亮等人[13]開發(fā)了獸藥殘留蛋白芯片檢測系統(tǒng)，該系統(tǒng)可用于豬肉、豬肝、雞肉、雞肝、牛奶中磺胺二甲基嘧啶、磺胺喹惡啉、磺胺甲惡唑、磺胺異惡唑、磺胺間甲氧嘧啶、鏈霉素、雙氫鏈霉素、恩諾沙星、氯霉索的定量檢測，可同時(shí)分析多種樣品的多種獸藥殘留。劉楠等人[14]以常用的氯霉素、克倫特羅、雌二醇和泰樂菌素4種獸藥為靶標(biāo)物，基于間接競爭法的免疫學(xué)檢測原理，改進(jìn)了常規(guī)懸浮芯片技術(shù)在微球上固定抗體的方法，根據(jù)待測靶標(biāo)物靈活自由組合，同時(shí)檢出上述4種獸藥殘留靶標(biāo)物，整個(gè)檢測過程僅耗時(shí)1～2 h。因生物芯片技術(shù)通量高、特異性強(qiáng)、靈敏快速等特點(diǎn)，使其在獸藥殘留的檢測領(lǐng)域得到更多運(yùn)用者的關(guān)注。

3 生物傳感器技術(shù)

生物傳感器是由化酶或電化學(xué)或物理傳感器組成的一種能測定溶液中某種或某一類化學(xué)物質(zhì)的傳感裝置[15]。生物傳感器技術(shù)，也已經(jīng)應(yīng)用于獸藥殘留的快速檢測。李瑩等人[16]利用自行研制的便攜式表面等離子體共振（SPR）生物傳感器，根據(jù)免疫反應(yīng)的特異性，研究克倫特羅抗原、抗體的相互作用，分析動(dòng)力學(xué)反應(yīng)過程，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，并提出克倫特羅的連續(xù)檢測法和快速檢測法。李會(huì)芹等人[17]提出了一種新穎、無標(biāo)記、快速的內(nèi)嵌式TsPRlK23生物傳感器的光學(xué)表面等離子共振（SPR）鹽酸克倫特羅測定方法，測定裝置由集成光學(xué)SPR生物傳感器、微流通池、便捷更換芯片的夾具、觸電屏，USB接口板度光電轉(zhuǎn)換電路板組成。在光學(xué)SPR芯片金膜表面固定鹽酸克倫特羅抗原，在標(biāo)準(zhǔn)樣品中分別添加鹽酸克倫特羅抗原，采用競爭免疫反應(yīng)方法建立的鹽酸克倫特羅測定標(biāo)準(zhǔn)曲線，相關(guān)系數(shù)0.997，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差6.5%。

4 拉曼光譜檢測技術(shù)

隨著光電技術(shù)的發(fā)展，拉曼技術(shù)也有長足的發(fā)展，結(jié)合納米技術(shù)，拉曼光譜技術(shù)向表面增強(qiáng)拉曼光譜邁進(jìn)。陳蓓蓓等人[18]借助便攜式激光拉曼光譜儀和相應(yīng)的納米試劑，實(shí)現(xiàn)了利用表面增強(qiáng)拉曼光譜技術(shù)來完成食品中多種化學(xué)物的快速檢測，并進(jìn)行了定量分析，選擇的檢測項(xiàng)目主要涉及食品中非法添加物、食品濫用添加劑、農(nóng)獸藥殘留等，獲得了較好的檢測效果。表面增強(qiáng)拉曼光譜（SERS）技術(shù)基于拉曼散射效應(yīng)，可將信號(hào)強(qiáng)度明顯提高，以高出常規(guī)拉曼技術(shù)104～107的靈敏度實(shí)現(xiàn)對痕量物質(zhì)的檢測。吳輝陽[19]采用表面增強(qiáng)拉曼光譜（SERS）技術(shù)對常見的獸藥殘留檢測方法進(jìn)行研究與開發(fā)，對氟喹諾酮類、硝基呋喃類等獸藥具有很好的檢出效果。

5 展望

目前，能進(jìn)行現(xiàn)場快速檢測獸藥殘留的快速檢測技術(shù)主要有免疫技術(shù)、生物傳感器技術(shù)、拉曼光譜檢測技術(shù)，其中酶聯(lián)免疫技術(shù)較為成熟，是國內(nèi)外獸藥殘留檢測的重要方法之一。膠體金免疫技術(shù)雖然幾分鐘能出結(jié)果，但是檢測限較高、靈敏度差，容易出現(xiàn)假陽性、假陰性。生物芯片技術(shù)檢測獸藥殘留具有通量高、特異性強(qiáng)、靈敏度高等特點(diǎn)，備受各界關(guān)注，發(fā)展迅猛。拉曼光譜技術(shù)簡單、快速、靈敏，可進(jìn)行無損檢測也有一定的發(fā)展前景。其他技術(shù)（如生物傳感器等）仍是發(fā)展的方向，有著較為廣闊的前景。上述快速檢測方法雖然與大型儀器法相比檢測耗時(shí)短、成本低，但由于缺乏統(tǒng)一的快速檢測設(shè)備、耗材的生產(chǎn)標(biāo)準(zhǔn)，市場上的快速檢測產(chǎn)品質(zhì)量不一，有關(guān)權(quán)威部門應(yīng)盡早制定標(biāo)準(zhǔn)化的

食品安全快速檢測產(chǎn)品復(fù)核性驗(yàn)證規(guī)程，對快速檢測產(chǎn)品進(jìn)行確認(rèn)認(rèn)可，有利于規(guī)范快速檢測產(chǎn)品的市場，更好地為食品安全監(jiān)管服務(wù)。

[1]中華人民共和國秦皇島出入境檢驗(yàn)檢疫局.常用獸藥殘留量檢測方法標(biāo)準(zhǔn)選編[M].北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2009：53.

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[8]Zhu Y，Li L，Wang Z，et al.Development of an immunochromatography strip for the rapid detection of 12 fluoroquinolones in chicken muscle and liver[J].Journal of

Advances in Application of Rapid Detection for Detection of Veterinary Drug Residues in Animal-Derived Foods

CHEN Xiaocong
（Guangxi-ASEAN Food and Drug Safety Inspection and Testing Center，Nanning，Guangxi 530001，China）

This paper focuses on the developments of rapid detection in the field of veterinary drugresidue analysis，such as enzyme linked immunosorbent assay，bio-chip technology，biosensor and Raman spectrum technology.Finally，its applications are also analyzed and put forward.

animal-derived foods；rapid detection；veterinary drug residues

S859.84

A

10.16693/j.cnki.1671-9646（X）.2017.08.022

1671-9646（2017）08a-0070-03

2017-06-01

陳小聰（1974—），女，本科，高級(jí)工程師，研究方向?yàn)槭称钒踩珯z測。