飼料中藥物殘留及其檢測方法研究進展

胡紅芹，張 坤

（漯河食品職業(yè)學(xué)院，河南漯河 462300）

飼料中藥物殘留及其檢測方法研究進展

胡紅芹，張 坤

（漯河食品職業(yè)學(xué)院，河南漯河 462300）

隨著畜牧業(yè)的快速發(fā)展，飼料作為畜牧業(yè)發(fā)展的后盾，不但投入加大而且更加多樣化和全面化，為集約化養(yǎng)殖業(yè)提供了堅實的技術(shù)保障，同時飼料的安全問題也備受人們關(guān)注，飼料安全直接影響著畜產(chǎn)品的安全，與人類的健康密切相關(guān)。而在飼料生產(chǎn)過程中，一些企業(yè)違反我國有關(guān)法律法規(guī)，濫用藥物或不規(guī)范使用藥物，造成畜產(chǎn)品中殘留超標(biāo)，進而危害人們身體健康。目前，我國和歐盟及其他國家對動物源性食品中獸藥殘留的檢測加大了力度，而飼料中違規(guī)添加的藥物也是動物源性食品中獸藥殘留的主要因素，因此飼料中藥物的檢測也不容忽視。

飼料；藥物殘留；危害；檢測方法

1 藥物在飼料中的殘留及其危害

1.1 藥物在飼料中的殘留

隨著人們對食品安全認識的深入，藥物的殘留問題受到了食品立法委員會（CAC）、食品添加劑立法委員會等有關(guān)國際組織的關(guān)注。1986年世界衛(wèi)生組織（WHO）和聯(lián)合國糧農(nóng)組織（FAO）聯(lián)合發(fā)起成立了食品中獸藥殘留法典委員會（CCRVDF），專門負責(zé)獸藥殘留工作，我國成為40多個成員國之一。近年來，對動物性食品的源頭——飼料、飼料添加劑、獸藥和獸醫(yī)防疫更為關(guān)注。1997年開始討論對動物長期使用抗菌藥，特別是作為飼料添加劑，會導(dǎo)致細菌耐藥性滋生的問題；美國、歐盟、英國、日本等國政府對于獸藥和飼料管理法規(guī)也進行了改進，主要體現(xiàn)為更全面地評價飼料、飼料添加劑和獸藥的安全性，如增加環(huán)境毒性和殘留毒理學(xué)等。歐洲國家早在1988年就禁止使用β-興奮劑，如鹽酸克倫特羅，俗稱“瘦肉精”，我國在1997年起禁用；1998年底歐盟決定禁止使用喹乙醇和卡巴氧，還不準(zhǔn)許桿菌肽鋅、泰樂菌素、維吉尼霉素和螺旋霉素等藥物作飼料添加劑；1986年瑞典禁止在家禽飼料中使用抗生素添加劑；2000年歐盟已禁止氯霉素、青霉素、鏈霉素等26種藥物作獸用，并計劃將飼料中的抗生素逐漸淘汰。我國從1997年以來，先后發(fā)布了“動物性食品中獸藥最高殘留量”的規(guī)定、“關(guān)于開展獸藥殘留檢測工作的通知”，并成立了全國獸藥殘留專家委員會；1999年發(fā)布了《中華人民共和國動物及動物源食品中殘留物質(zhì)監(jiān)控計劃》和《官方取得程序》通知，這是我國對藥物殘留監(jiān)控、保證動物性食品安全可靠的有力舉措。幾年來，我國先后發(fā)布了27種飼料藥物添加劑使用規(guī)定、19種獸藥在飼料中殘留檢測方法、39種獸藥及其他化學(xué)物質(zhì)在動物性食品中殘留檢測方法。同時，我國加入WTO后，法律法規(guī)逐漸與國際相接軌，并得到了很大的完善，適應(yīng)了新形勢的需要。

1.2 藥物殘留危害

從20世紀60年代開始，藥物作為飼料添加劑被廣泛使用，尤其是一些激素和抗生素在畜禽飼料中被作為非治療性目的用藥，由于長期和過量的使用導(dǎo)致了獸藥殘留的產(chǎn)生，這種危害具有隱蔽性，對人體健康和環(huán)境造成實質(zhì)性和難以預(yù)料的后果。主要引起的危害如下。

1.2.1 “三致（致癌、致畸、致突變）”作用

一些激素類藥物，如“瘦肉精”、己烯雌酚、玉米赤霉酮等在食品中殘留，人們食用后導(dǎo)致體內(nèi)內(nèi)分泌失調(diào)，擾亂激素平衡，引起心跳加快、頭暈、心悸、呼吸困難、肌肉震顫、頭痛等中毒癥狀；幼兒發(fā)育異常，出現(xiàn)性別異?；徽T導(dǎo)女性乳腺癌、卵巢癌、子宮內(nèi)膜病變等疾病的發(fā)生。一些抗生素藥也可導(dǎo)致“三致”作用，有研究表明，磺胺二甲嘧啶能引起大鼠甲狀腺癌和肝癌的發(fā)生。砷制劑作為生長促進劑也危害著人類健康，砷與巰基酶結(jié)合，使酶失活，導(dǎo)致細胞代謝紊亂，皮膚癌發(fā)病率上升[1]。

1.2.2 過敏反應(yīng)和慢性毒性作用

抗生素類殘留易引起人體過敏反應(yīng)和蓄積中毒，如磺胺類主要表現(xiàn)為皮炎、蕁麻疹、嘔吐、腹瀉、溶血性貧血、粒細胞減少、休克等癥狀；青霉素易引起過敏反應(yīng)、水腫、血壓急劇下降，導(dǎo)致休克；氯霉素蓄積造成慢性中毒，引發(fā)再生障礙性貧血，并且其發(fā)生與使用劑量和頻率無關(guān)，其危害是不可逆的。

1.2.3 影響生態(tài)環(huán)境和畜牧業(yè)發(fā)展

一些不易降解的藥物經(jīng)動物腸道排出體外，從而造成土壤、水資源的污染，使環(huán)境微生物的生存受到威脅，生態(tài)環(huán)境失去平衡，并且能繼續(xù)危害人體健康。Wollenberger L等人[2]發(fā)現(xiàn)喹乙醇能使水環(huán)境中的甲殼細水蚤發(fā)生急性中毒，對水環(huán)境有潛在危害；Strong L等人[3]報道了阿維菌素、伊維菌素和美倍霉素在動物糞便中能保持8周左右的活性，對草原中的多種昆蟲都有強大的抑制或殺滅作用。藥物殘留易對畜禽體產(chǎn)生耐藥性，給畜禽疾病的預(yù)防和治療帶來了很大的困難，不但影響了畜牧業(yè)的發(fā)展，而且增加了養(yǎng)殖戶的成本，因此養(yǎng)殖戶在飼養(yǎng)過程中盡可能少用藥物或使用不易產(chǎn)生殘留并對人體危害很小的藥物。在食品進出口貿(mào)易中，藥物殘留檢測成為一項不可缺少的法規(guī)，并設(shè)立專門機構(gòu)進行執(zhí)行和監(jiān)督。

20世紀90年代我國在肉制品出口貿(mào)易中曾經(jīng)受到很大打擊，屢次被退貨、銷貨、索賠，究其原因就是產(chǎn)品中藥物殘留超標(biāo)，嚴重影響了我國農(nóng)產(chǎn)品的出口量和國際聲譽。

2 飼料中藥物殘留檢測方法研究進展

我國飼料中藥物殘留分析起步于20世紀90年代，在食品中藥物殘留和農(nóng)藥殘留檢測方法的基礎(chǔ)上逐步發(fā)展起來。飼料中藥物殘留分析是復(fù)雜混合物中痕量組分的分析技術(shù)。由于飼料成分比較復(fù)雜，而且藥物在飼料中添加量很低，這給飼料中藥物殘留分析帶來了較大的困難。目前，常用的檢測方法主要有分光光度法、氣相色譜-質(zhì)譜法（GC/MS）、高效液相色譜法（HPLC）、免疫分析技術(shù)等。

2.1 分光光度法

分光光度法包括紫外-可見光分光光度（UVVis）法和熒光分光光度法。紫外-可見光分光光度法是通過被測物質(zhì)在紫外光區(qū)的特定波長或一定波長范圍內(nèi)光的吸收度，對該物質(zhì)進行定性定量分析的方法。紫外光譜是物質(zhì)在200~400 nm近紫外光區(qū)和400~800 nm可見光區(qū)的吸收光譜。由于藥物分子中多含有紫外光區(qū)的生色基，因此紫外-可見光分光光度法是飼料中藥物殘留檢測使用比較普及的方法，如飼料中克倫特羅、磺胺類藥物、鹽酸氯苯胍、二甲硝基咪唑等藥物的檢測。該方法具有操作簡便、試劑消耗少、結(jié)果準(zhǔn)確、離散程度小等優(yōu)點，但容易受到介質(zhì)中各種離子的干擾。徐昆龍等人[4]用對-二甲氨基苯甲醛作顯色劑，采用分光光度法測定了飼料中磺胺二甲基嘧啶含量，最小檢測量0.05 mg/kg，平均回收率99.2%，變異系數(shù)≤5%，結(jié)果比較滿意。盧業(yè)玉等人[5]在克倫特羅陰性飼料中添加適量克倫特羅，經(jīng)提取，在乙醇介質(zhì)中克倫特羅與鐵氰化鉀和三氯化鐵的混合溶液反應(yīng)后，用稀鹽酸溶解反應(yīng)產(chǎn)物得綠色溶液，該溶液的最大吸收波長為770 nm，克倫特羅在0~50 μg/10 mL線性關(guān)系良好。目前，美國AOAC標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定飼料中磺胺喹惡啉也用此方法進行檢測。熒光分光光度法不常用，受背景干擾較大，靈敏度不高，主要用于飼料中萊克多巴胺等少數(shù)藥物的檢測。

2.2 氣相色譜-質(zhì)譜法（GC/MS）

氣相色譜儀是質(zhì)譜法的理想“進樣器”，試樣經(jīng)色譜分離后以純物質(zhì)形式進入質(zhì)譜儀，就可充分發(fā)揮質(zhì)譜法的特長。質(zhì)譜儀是氣相色譜法的理想“檢測器”，色譜法所用的檢測器都有其局限性，而質(zhì)譜儀能檢出幾乎全部化合物，準(zhǔn)確度和靈敏度都較高。由于GC/MS所具有的獨特優(yōu)點，目前已得到廣泛的應(yīng)用。一般來說，凡能用氣相色譜法進行分析的樣品，大部分都能用GC-MS進行定性及定量測定。吳平谷等人[6]建立了動物飼料中克倫特羅的GC/MS測定方法，試樣中克倫特羅經(jīng)提取、凈化、衍生，采用GC/MS/SIM方式進行測定，外表法定量。試驗表明，試樣中添加0.2~5.0 mg/kg濃度水平的克倫特羅，回收率在92.0%~98.7%，克倫特羅的檢測限為0.05 mg/kg。陳存社等人[7]對鹽酸克倫特羅的GC/MS檢測方法進行了深入探討，采用二次提取法從飼料中將鹽酸克倫特羅提純、凈化，分別用TMCS和乙酸酐衍生處理，進行了定性檢測，2次試驗中樣品與標(biāo)準(zhǔn)品的保留時間之差均小于2 s，匹配度均大于800，符合農(nóng)業(yè)部NY/T 468—2001標(biāo)準(zhǔn)。

2.3 高效液相色譜法（HPLC）

高效液相色譜法是20世紀70年代迅速發(fā)展起來的一項高效、快速的分析分離技術(shù)，現(xiàn)在使用廣泛。通常使用紫外-可見檢測器（UV-Vis）進行檢測，盡可能選取最大吸收波長并且干擾組分相應(yīng)值較小的波長作為測定波長。由于其只能檢測對紫外有吸收和本身能發(fā)射熒光的藥物，限制了高效液相色譜法的應(yīng)用。范理等人[8]用高效液相色譜法測定飼料中磺胺喹惡啉含量，最小檢出量為5.0 mg/kg，適用于配合飼料、濃縮料及添加劑預(yù)混合飼料中磺胺喹惡啉的測定。黃土新等人[9]用試驗建立了高效液相色譜法測定飼料中違禁藥物氯丙嗪的方法，試驗表明，氯丙嗪在0.05~5.00 mg/kg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，最低檢測限為0.05 μg/mL。姜兆興等人[10]建立了測定飼料中磺胺二甲嘧啶、磺胺六甲氧嘧啶、磺胺氯噠嗪、磺胺甲惡唑含量的反相高效液相色譜方法，結(jié)果表明，線性在20~160 mg/kg良好，平均回收率較高，檢測限達到10 mg/kg，該法準(zhǔn)確度高、精密度好、簡便快速。秦燕等人[11]建立并同時分析了食用動物飼料中磺胺嘧啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲嘧啶等8種磺胺類藥物的高效液相色譜方法，比較和優(yōu)化了不同的提取方法及凈化參數(shù)，該方法對飼料中磺胺的檢出限為0.20×10-6（w），8種磺胺添加水平為1×10-6（w）時，回收率在68%以上，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差小于12%。戴華等人建立了一種用高效液相色譜法同時分離測定飼料中鹽酸克倫特羅、沙丁胺醇含量的方法，方法的定量下限（w）：鹽酸克倫特羅為0.10×10-6，沙丁胺醇為0.36×10-6，方法的回收率和精密度均滿足檢測要求。

2.4 免疫分析技術(shù)

近年來，免疫分析技術(shù)用于藥物殘留快速檢測的研究也十分活躍。免疫分析技術(shù)是將抗體抗原反應(yīng)與現(xiàn)代測試手段相結(jié)合的超微量分析法，它集現(xiàn)代測試方法的高靈敏度和抗原—抗體反應(yīng)的強特異性于一體，在某些重要生物活性物質(zhì)的痕量檢測方面取得了很大成就。免疫分析技術(shù)具有操作簡單、快速、靈敏度高、特異性強、檢測費用低等優(yōu)點，是目前最理想的殘留篩選性分析方法之一。免疫分析方法包括放射免疫測定法（RIA）、熒光免疫測定法（FIA）、流動注射免疫分析法（FIIA）、滴金免疫技術(shù)（DIGFA）、酶免疫法（EIA）等，其中應(yīng)用最廣泛的是酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）。柳其芳[12]聯(lián)合應(yīng)用r-Biopharm（德國拜發(fā)公司）酶聯(lián)免疫測試盒和Stat Fax 303 Plus Microstrip Reader（美國）液晶顯示酶標(biāo)儀測定飼料、尿中克倫特羅含量，在克倫特羅含量濃度為100~8 100 ng/kg時，CV為1%~7%，回收率為95.6%~99.6%，標(biāo)準(zhǔn)曲線的R值為-0.995，其分析指標(biāo)較滿意，驗證了ELISA可有效適用于檢測飼料和尿，是目前檢測飼料、尿中克倫特羅較好的方法。陳繼明等人[13]用自制的β-激動劑克倫特羅抗血清建立其間接抑制ELISA檢測方法，用該法檢測了定量添加克倫特羅的飼料，將檢測值除以實際添加值，得到的檢測回收率在85%以上，變異系數(shù)在15%以下，表明該法簡便、特異和靈敏，具有很高的實用價值。

此外，免疫膠體金技術(shù)也越來越受到相關(guān)學(xué)者的重視，此方法操作簡單、省時、靈敏度高、成本低，能進行大批量篩選，肉眼即可判斷結(jié)果。其原理是：用膠體金標(biāo)記特異性抗體，檢測樣品時，樣品中含的藥物與金標(biāo)抗體結(jié)合成復(fù)合物沿硝酸纖維素膜移動，與膜上包被的抗原競爭結(jié)合，藥物含量越高檢測限顏色越淺，反之則越深。賴衛(wèi)華等人研究了用膠體金試紙條快速檢測食品和飼料中的赭曲霉毒素A，測試結(jié)果表明，赭曲霉毒素A快速檢測試紙條的檢測限為10 ng/mL，檢測時間為10 min，適合于赭曲霉毒素A現(xiàn)場快速檢測之用。目前，市場上已有“瘦肉精”、氯霉素、鏈霉素和雙氫鏈霉素等快速檢測試紙條出售，且最低檢測限都能到達我國及歐盟規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)。但是，用免疫膠體金法對藥物殘留的檢測使用還較少，有待進一步深入研究和推廣，這種方法將是今后藥物殘留檢測的發(fā)展方向。

3 結(jié)語

藥物殘留技術(shù)是近幾十年發(fā)展起來的多學(xué)科交叉的方法學(xué)領(lǐng)域，現(xiàn)已成為獸醫(yī)學(xué)和農(nóng)業(yè)化學(xué)最活躍的研究方向之一，各種檢測方法逐步完善，為人們的健康作出了巨大貢獻。飼料作為畜禽生活的保障，飼料安全與食品安全息息相關(guān)，一方面要提高人們食品安全的意識，另一方面要加強對飼料和食品中藥物的監(jiān)測，高靈敏度、更低檢測限、高選擇性、多殘留分析、聯(lián)用分析、高分析速度、智能化、自動化、在線分析、活體分析、現(xiàn)場快速分析、分析儀器的微型化、集成化和便攜化是目前殘留分析的主要發(fā)展趨勢。

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Drug Residues in Feed and its Detection Method Research Progress

HU Hongqin，ZHANG Kun
（Luohe Vocational College of Food，Luohe，He'nan 462300，China）

With the rapid development of animal husbandry，animal husbandry feed as backing the development，not only investment is increased and diversified and comprehensive，for intensive aquaculture provides a solid technical support.At the same time，the safe problem of feed also times get people attention，feed safety directly affects the safety of animal produce，and human health are closely related.While in the feed production process，some enterprises that violate the relevant Chinese laws and regulations，drug abuse or do not regulate the use of drugs in animal products，resulting in excessive residues and do harm to people's health.At present，China and the EU and other countries in food of animal origin of veterinary drug residuesdetection increased strength，and irregularities in the feed add drugs is also of veterinary drugs in animal derived food residues are the main factors.Therefore，feed drug testing also nots allow to ignore.

feed；drug residues；hazard；detection method

S816.7

A

10.16693/j.cnki.1671-9646（X）.2017.02.047

1671-9646（2017）02b-0065-03

2017-02-05

胡紅芹（1977— ），女，碩士，講師，研究方向為營養(yǎng)與檢測。