免疫檢測的干擾因素分析和控制措施研究

李璀

山東省濟(jì)南市傳染病醫(yī)院檢驗(yàn)科，山東濟(jì)南 250021

免疫檢測的干擾因素分析和控制措施研究

李璀

山東省濟(jì)南市傳染病醫(yī)院檢驗(yàn)科，山東濟(jì)南 250021

免疫檢測法在實(shí)際應(yīng)用過程中，能夠改變檢測物濃度或者檢測抗體結(jié)合能力，從而對檢測結(jié)果造成不同程度的影響，具體會引起檢測結(jié)果出現(xiàn)假性升高或降低的情況對醫(yī)生臨床疾病診斷評估產(chǎn)生影響。因此，檢驗(yàn)人員和臨場醫(yī)生在實(shí)際檢測工作中，如果試驗(yàn)檢測結(jié)果與實(shí)際臨床征象不相符合的情況，分析是否存在干擾因素，從而重新進(jìn)行試驗(yàn)和檢測，提升結(jié)果的正確性。

免疫檢測；干擾因素；分析；對策

在實(shí)際試驗(yàn)過程中，免疫檢測具有敏感性高、標(biāo)本容易處理的特點(diǎn)。但是在一定條件下，免疫檢測的準(zhǔn)確性會受到不同程度的影響，從而影響到最終的試驗(yàn)結(jié)果。在上個世紀(jì)70年代的臨床試驗(yàn)研究中，檢測人員就已經(jīng)發(fā)現(xiàn)免疫法檢測中存在一定的干擾，很多醫(yī)生嘗試著制定解決方案。就目前而言，雖然制定了很多免檢疫檢測方法，但是仍然無法從根本上避免干擾。根據(jù)大量的實(shí)踐證明，免疫檢測干擾因素會導(dǎo)致檢測物出現(xiàn)不同程度假性升高或者降低的情況，從而影響臨床醫(yī)生對病情的診斷和評估，增加不必要的檢查，甚至出現(xiàn)錯誤的用藥，導(dǎo)致用量過量，釀成嚴(yán)重的后果[1]。隨著免疫檢測技術(shù)的發(fā)展，在免疫檢測方法和模式上都出現(xiàn)了新的進(jìn)展，取得了一定的成果，對臨床研究提供了科學(xué)的指導(dǎo)和借鑒。就當(dāng)前的研究證明，人抗動物抗體、自身抗體等內(nèi)源性抗體的干擾受到醫(yī)學(xué)界的廣泛關(guān)注，因此，該文在前人的研究基礎(chǔ)上，首先分析免疫檢驗(yàn)干擾的分類，接著針對免疫檢測干擾因素和控制措施展開論述，從而為臨床試驗(yàn)提供一定的參考和借鑒。

1 免疫檢測的干擾分類

免疫檢測會受到抗體特性、抗體原、試劑成分以及檢測方法的影響。在通常情況下，免疫干擾因素主要分為檢測物依賴和非依賴性干擾因素。檢測依賴的干擾因素主要是被檢測標(biāo)本中成分與試劑中的抗體發(fā)生作用，或者檢測物自身抗體與檢測物產(chǎn)生相互作用，進(jìn)一步影響到檢測抗體與檢測物的精確性[2]。檢測物非依賴干擾因素主要是指常見的物質(zhì)受到干擾的因素，具體包括溶血、黃疸以及抗凝物質(zhì)，從而導(dǎo)致樣本儲存存在一定的差異。

1.1 改變被檢測物濃度

對內(nèi)源性免疫檢測干擾因素而言，在實(shí)際檢測過程中，與標(biāo)本內(nèi)物質(zhì)特性有很大關(guān)系，需要改變被檢測物的濃度，從而影響到到檢測結(jié)果，具體包括激素結(jié)合蛋白和檢測物自身抗體等。

1.1.1 激素結(jié)合蛋白 在標(biāo)本中，急速結(jié)合蛋白可以通過被檢測物或者進(jìn)行解離，從而影響到激素的檢測。比如類固醇能夠有效結(jié)合性激素結(jié)合蛋白等，導(dǎo)致固醇出現(xiàn)游離的情況，降低生長激素檢測結(jié)果[3]。在實(shí)際過程中，人體內(nèi)最高有一半的生長激素與生長激素結(jié)合蛋白形成復(fù)合物，但是生長激素抗原表位就可能被遮蓋，不能與檢測檢測抗體實(shí)現(xiàn)有效的結(jié)合，從而降低檢測的濃度。因此，檢測人員可以利用結(jié)合蛋白變性抑制激素和蛋白的結(jié)合，保證檢測到真實(shí)的血清濃度。另外，在實(shí)際檢測過程中，有的物質(zhì)可以把被檢測物從激素結(jié)合蛋白中替換出來，從而影響到物質(zhì)檢測的計算方法，導(dǎo)致被檢測物出現(xiàn)升高或者下降的問題。

1.1.2 檢測物自身抗體 在進(jìn)行多種免疫檢測方法中，對自身抗體會產(chǎn)生一定的影響，在通常情況下，自身抗體為IgG型，導(dǎo)致這類抗體親和力高，對傳功的免疫鑒定法產(chǎn)生較強(qiáng)的干擾，具體包括酶類、肌鈣蛋白以及甲狀腺激素等。其中血漿巨泌乳素主要由泌乳素和自身抗體形成的巨分子復(fù)合物，在患者無腦垂體疾病的情況下，血中巨泌乳素就會到泌乳素檢測結(jié)果呈現(xiàn)出假性升高的現(xiàn)象，從而導(dǎo)致醫(yī)生臨床診斷為高泌乳素血癥，從而采取不合理的處理方法，導(dǎo)致非常嚴(yán)重的后果[4]。因此，為了滿足實(shí)際需要，在實(shí)際試驗(yàn)過程中，各個實(shí)驗(yàn)室要采用泌乳素檢測系統(tǒng)受到巨泌乳素干擾受到實(shí)際情況的，對患者是否存在巨泌乳素進(jìn)行精確判斷。

1.2 通過改變被檢測物與相應(yīng)抗體結(jié)合影響檢測結(jié)果

內(nèi)源性干擾伊蘇主要通過干擾抗原體，從而影響到最終的檢測結(jié)果，具體包括異嗜性抗體、HAAA等。

①異嗜性抗體主要包括天然抗體和自然抗體，但是針對的抗原不算很明確，在通常情況，能夠與2種或者以上其他物種抗體發(fā)生反應(yīng)，親和力比較低。并且獨(dú)特型坑提能夠結(jié)合到被檢測抗原上，從而影響到免疫檢測抗原抗體的結(jié)合以及后期的檢測結(jié)果。在實(shí)際過程中，獨(dú)特型抗體和自然產(chǎn)生的免疫源性的RF，是造成異嗜性干擾的重要因素[5]。RF是患者體內(nèi)針對變形的lgG的內(nèi)源性IgM抗體，可模擬異嗜性抗體作用在實(shí)際過程中，會直接連接ELISA法，進(jìn)而捕獲抗體和檢測抗體，引起假陽性抗體。異嗜性抗體主要采用非競爭性機(jī)制，進(jìn)行干擾免疫檢測，傳統(tǒng)的雙位點(diǎn)免疫鑒定非免疫球蛋白抗原過程中，異嗜性抗體可以直接捕獲和檢測抗體，就會導(dǎo)致出現(xiàn)假陽性結(jié)果。并且實(shí)際檢測過程中，同一種異嗜性抗體對不同測試劑中抗體組合反應(yīng)就會出現(xiàn)不同的結(jié)果。因此，在利用不同監(jiān)測試劑檢測過程中，需要對異嗜性抗體干擾差異性進(jìn)行分析。

②HAAA，就是具有很高親和力特異性多克隆抗體。在實(shí)際應(yīng)用過程中，主要包括人抗免疫球蛋白、人抗動物白蛋白。隨著動物原型診斷和治療機(jī)制的運(yùn)用，證明了HAAA的存在，比如人抗小鼠抗體、抗兔、抗山羊體等。HAAA與抗原具有很強(qiáng)的結(jié)合性，在血清中滴度較高，可以在試劑中，根據(jù)抗體發(fā)生交叉反應(yīng)，從而影響到最終的檢測結(jié)果[6]。在進(jìn)行多種物質(zhì)檢測過程中，就會受到HAAA的干擾，具體包括心臟標(biāo)志物、甲狀腺激素以及腫瘤標(biāo)志等。采用雙位點(diǎn)免疫分析分方法，更容易受到血清HAAA的干擾，當(dāng)檢測試劑中抗體的物種來源與血清中一樣，就會產(chǎn)生更加明顯的干擾，影響到檢測的效果。

在實(shí)際檢測試驗(yàn)過程中，其他影響抗體結(jié)合干擾免疫法檢測的蛋白，具體包括補(bǔ)體、副蛋白等。補(bǔ)體主要通過結(jié)合免疫球蛋白的Fc段，從而阻斷被檢測與抗體的特異性結(jié)合位點(diǎn)，導(dǎo)致干擾被檢測物，這種干擾可以有效抑制被檢測物與捕獲抗體和檢測抗體的結(jié)果。

2 免疫檢測干擾因素的分析

在實(shí)際檢測過程中，受到各種干擾因素的影響，會產(chǎn)生過重假陽性和假陰性結(jié)果，從而導(dǎo)致醫(yī)生對臨床疾病產(chǎn)生誤判和誤診，甚至進(jìn)行錯誤的治療。因此，為了滿足實(shí)際需要，在要重視免疫檢測中的干擾因素。當(dāng)檢測結(jié)果與臨床征象出現(xiàn)不相符的情況時，臨床醫(yī)生要與檢驗(yàn)師進(jìn)行溝通和交流，從而全面了解免疫檢驗(yàn)可能出現(xiàn)的干擾因素。作為檢驗(yàn)醫(yī)師，需要了解疾病臨床知識和疾病治療方案以及動員源性診斷和治療性抗體等病史。在實(shí)際鑒別過程中，可以采用以下方法，①采用標(biāo)本稀釋液方法，就是按照一定比例進(jìn)行稀釋以后，再進(jìn)行檢測，然后對被檢測物進(jìn)行觀察，是否存在線性的變化。②利用另外一物種來源的檢測抗體進(jìn)行，或者選擇另外一種檢測方法，從而有效降低干擾。③針對實(shí)際的標(biāo)本，采用不同濃度的阻斷劑和不同物種來源的混合阻斷劑，在進(jìn)行阻斷以后，再進(jìn)行檢測。④可以直接檢測自身抗體或者異嗜性抗體是否存在。⑤在標(biāo)本中加入一定的標(biāo)準(zhǔn)品以后，然后進(jìn)行回收，再進(jìn)行試驗(yàn)。

在實(shí)際檢測過程中，如果檢測方案會得出被檢測物具有不同的濃度，從而表明被檢測方案中，存在一定的干擾因素。作為醫(yī)生和檢驗(yàn)而言，雖然大部分檢測系統(tǒng)能夠得到相似的檢測結(jié)果，也不能從根本上排除其他干擾對檢測結(jié)果的影響。因此，在臨床實(shí)際工作過程中，醫(yī)生要結(jié)合患者實(shí)際身體結(jié)合能力出現(xiàn)的缺陷情況，進(jìn)行科學(xué)合理的分析，控制好最終的檢測結(jié)果。

3 減少免疫檢測干擾控制措施

隨著當(dāng)前檢測技術(shù)的發(fā)展，新的方法和技術(shù)不斷應(yīng)用到實(shí)際免疫檢測過程中，最大限度地減少免疫檢測干擾。就目前而言，如何減少消除免疫檢測中的干擾因素成為當(dāng)前檢驗(yàn)工作面臨的重要問題。

①采用物理化學(xué)以及免疫學(xué)方法。通過凝膠色譜層析法，從待檢標(biāo)本中提取被檢測物以后，在進(jìn)行相應(yīng)的檢測。利用聚乙二醇可以去除HAAA的干擾。對熱穩(wěn)定的被檢測物，需要進(jìn)行加熱，才能滿足實(shí)際檢測需要。另外，檢測人員還可以利用三氟乙酸沉淀法和陽離子交換層析法，從而消除自身抗體的干擾。

②加入相應(yīng)的阻斷劑。在實(shí)際試驗(yàn)過程中，針對異嗜性抗體，在通常情況下，可以采用正常動物血清的混合物，阻斷非特異性，從而有效地吸收異嗜性抗體，有效減少檢測干擾。但是在實(shí)際過程中，異嗜性抗體具有較弱的親和力和結(jié)合力的，采用上述方法免疫干擾效果不理想。另外，由于不同個體來源標(biāo)準(zhǔn)干擾因素干擾程度不同，在實(shí)際檢測過程中，很難確定所有標(biāo)本精確的阻斷劑用量。

綜上所述，當(dāng)前對免疫檢測干擾因素作用機(jī)制進(jìn)行一定研究，但是沒有一種方案能夠完善消除所有的干擾因素。檢測人員要結(jié)合實(shí)際情況，充分認(rèn)識到干擾的可能性，采用有效的抗干擾措施，避免導(dǎo)致嚴(yán)重的后果。

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[4]王偉佳,張秀明,闞麗娟,等.降鈣素原檢測在感染性疾病診斷中的干擾研究[J].中華醫(yī)院感染學(xué)雜志,2013(13)：3048-3050，3053.

[5]劉蕊,李剛,崔小璠.膽紅素和血紅蛋白對不同尿白蛋白檢測方法結(jié)果干擾的研究[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué),2012(7)：564-567.

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R7

A

1672-5654（2017）04（c）-0049-02

10.16659/j.cnki.1672-5654.2017.12.049

2017-01-26）

李璀(1976-)，女，山東濟(jì)南人，本科，主管檢驗(yàn)師，研究方向：免疫檢驗(yàn)。