聚乙二醇沉淀聯(lián)合化學(xué)發(fā)光法檢測高泌乳素血癥的臨床意義

王利健 陳俊 傅真

高泌乳素血癥（HP）是指由內(nèi)外環(huán)境因素引起的人體血清泌乳素升高，女性表現(xiàn)為閉經(jīng)、溢乳或不孕[1]。巨泌乳素是泌乳素和泌乳素抗體結(jié)合形成的復(fù)雜免疫復(fù)合物，分子量較大，不能通過人體的血管壁，所以無法與細(xì)胞進(jìn)行結(jié)合，因此無生物學(xué)作用，但是巨泌乳素在人體內(nèi)大量堆積時會導(dǎo)致泌乳素產(chǎn)生假性增高，導(dǎo)致誤診、誤治[2-4]。從泌乳素蛋白質(zhì)的特性可知，巨泌乳素血癥（MP）是HP的特殊存在形式。由于聚乙二醇（PEG）可以選擇性地沉淀大分子量的泌乳素，從而有效區(qū)別泌乳素活性，因此筆者采用PEG沉淀聯(lián)合化學(xué)發(fā)光法檢測HP，以提高臨床對HP的診斷。

1 對象和方法

1.1 對象 選擇2016年2至7月義烏市中心醫(yī)院因不孕、有溢乳、月經(jīng)不調(diào)等癥狀就診且血清泌乳素濃度＞29.93ng/ml患者共158例，均為女性，年齡 20～45（30.07±9.23）歲。根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道[1]，PEG沉淀后泌乳素測定回收率=（PEG沉淀后泌乳素×2/PEG沉淀前泌乳素）×100%，按PEG沉淀后泌乳素測定回收率進(jìn)行分組，其中巨泌乳素組59例（回收率＜40%），標(biāo)本中含有的泌乳素主要為巨泌乳素，判定為巨泌乳素血癥；混合泌乳素組20例（回收率在40%～60%），標(biāo)本中所含泌乳素既有泌乳素單體，又有巨泌乳素的存在；單體泌乳素組79例（回收率＞60%），標(biāo)本中主要含有小分子泌乳素，判定為真性高泌乳素血癥。

1.2 儀器與試劑 美國雅培i2000化學(xué)發(fā)光儀，試劑盒由雅培公司提供，其中泌乳素的批號為62039U100。

1.3 方法

1.3.1 檢測方法 采用化學(xué)發(fā)光法，女性泌乳素參考范圍為1.20～29.93ng/ml。嚴(yán)格按照儀器全自動SOP程序操作，泌乳素高、中、低水平質(zhì)控均處于在控范圍，儀器運(yùn)行良好。

1.3.2 25%PEG準(zhǔn)備 25%PEG（分子量為6 000）水溶液，用作巨泌乳素的沉淀劑。平時分裝貯存于2~8℃冰箱，有效期3個月。用前置室溫，達(dá)到室溫后使用。

1.3.3 操作步驟 所有患者均于清晨空腹抽取靜脈血5ml，分離血清并進(jìn)行檢測。在雅培i2000儀器上檢測泌乳素，經(jīng)篩檢為HP的標(biāo)本再行PEG沉淀處理：500μl血清加等量 500μl的25%PEG溶液，充分混勻后室溫放置30min，以3 500r/min離心5min，然后取上清液于雅培i2000分析儀上測泌乳素濃度。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)軟件，正態(tài)分布的計(jì)量資料以表示，3組間比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 年齡因素對組別的影響 巨泌乳素組平均年齡為（32.86±7.53）歲，混合泌乳素組為（29.15±8.08）歲，單體泌乳素組為（29.18±10.42）歲，3組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=3.120，P=0.047）；巨泌乳素組和混合泌乳素組的年齡比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.267），巨泌乳素組和單體泌乳素組的年齡比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.046），混合泌乳素組和單體泌乳素組的年齡比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.948）。

2.2 3組患者血清PEG沉淀前后泌乳素水平的比較3組間沉淀前泌乳素水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=1.706，P=0.185），沉淀后，3組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=9.523，P=0.000）。進(jìn)一步比較發(fā)現(xiàn)，沉淀前3組間兩兩比較泌乳素水平均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（均P＞0.05）；沉淀后混合泌乳素組和巨泌乳素組、單體泌乳素組比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.792、0.068），但巨泌乳素組和單體泌乳素組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.000），見表1。

表1 3組患者血清PEG沉淀前后泌乳素水平的比較（ng/ml）

2.3 巨泌乳素的分布特點(diǎn) 以2倍泌乳素高限（59.86ng/ml）為界，分析158例患者巨泌乳素的分布特點(diǎn)發(fā)現(xiàn)，＞2倍泌乳素高限者47例，其中巨泌乳素21例，占44.68%。＜2倍泌乳素高限者111例，其中巨泌乳素38例，占34.23%。若按回收率＜40%為限，＞2倍泌乳素高限21例為巨泌乳素，臨床診斷符合率達(dá)100%；＜2倍泌乳素高限38例為巨泌乳素，臨床診斷明確巨泌乳素26例，符合率達(dá)68.42%以上，總體符合率達(dá)79.66%。

3 討論

泌乳素在人血清中有3種存在形式：（1）有生物和免疫活性泌乳素單體，分子量為23kD；（2）缺乏生物活性泌乳素二倍體，分子量約50～60kD；（3）無或不發(fā)揮任何生物活性，亦即巨泌乳素，分子量150～170kD。巨泌乳素是在血管內(nèi)形成的，主要是與血液中IgG形成大分子復(fù)合物。在體內(nèi)無活性，這是由于復(fù)合物的分子量大，無法通過毛細(xì)管內(nèi)皮與靶受體起作用。再加上它在體內(nèi)的半衰期較長，易于在血管內(nèi)中累積，并且被體外免疫分析系統(tǒng)視作泌乳素檢出，從而造成泌乳素濃度的假性增高[5]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，158例HP患者血清中，巨泌乳素59例（37.34%），混合泌乳素 20例（12.66%），單體泌乳素79例（50.00%），這更進(jìn)一步證實(shí)了巨泌乳素是造成HP的基礎(chǔ)原因。

目前鑒別巨泌乳素引起的HP的主要方法有：凝膠色譜法、PEG法、蛋白A瓊脂糖凝膠吸附法、羊抗人IgG瓊脂糖吸附法等。其中凝膠色譜法是檢測巨泌乳素的金標(biāo)準(zhǔn)，但因其重復(fù)性差，操作復(fù)雜，價格昂貴，從而不適合臨床大范圍開展。其中，以PEG法操作簡單、價格低廉、無需昂貴的輔助儀器、可作為臨床常規(guī)篩查方法在醫(yī)院內(nèi)推廣使用。

泌乳素的正確檢測關(guān)系到臨床正確診斷、合理用藥及預(yù)后的評價。近幾年來，泌乳素免疫檢測技術(shù)及顱腦CT和MRI診斷技術(shù)的進(jìn)步，對HP的診斷水平有了大幅度的提高了。如今，如何排除巨泌乳素的干擾，提高泌乳素檢測的準(zhǔn)確性已成為臨床和檢驗(yàn)今后關(guān)注的一個要點(diǎn)。MP血液中泌乳素分子以分子量150～170kD的巨泌乳素為主，PEG可以選擇性地沉淀大分子量的泌乳素，從而可以有效區(qū)別巨泌乳素、單體泌乳素和混合泌乳素。目前，臨床和檢驗(yàn)仍過分信賴泌乳素商品化試劑而未開展巨泌乳素的篩查，致使巨泌乳素引起的HP誤診時有發(fā)生。總之，對于泌乳素增高的標(biāo)本應(yīng)用PEG沉淀法篩查巨泌乳素，這樣可提高診斷水平和檢驗(yàn)質(zhì)量，對于避免誤診和誤治，并對由此引起的醫(yī)療糾紛有一定意義。本項(xiàng)研究中，巨泌乳素組和單體泌乳素組的年齡有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05），患巨泌乳素女性平均年齡偏大。＞2倍泌乳素高限者47例，其中巨泌乳素21例，占44.68%。＜2倍泌乳素高限者111例，其中巨泌乳素38例，占34.23%。若按回收率＜40%為限，＞2倍泌乳素高限21例為巨泌乳素，臨床診斷符合率達(dá)100%；＜2倍泌乳素高限38例為巨泌乳素，臨床診斷明確巨泌乳素26例，符合率達(dá)68.42%以上，總體符合率達(dá)79.66%。對＜2倍泌乳素高限為巨泌乳素的病例，如果和臨床診斷不符合，建議用凝膠色譜金標(biāo)準(zhǔn)方法進(jìn)一步驗(yàn)證。

總之，采用25%PEG沉淀分離法檢測泌乳素升高，對可疑患者進(jìn)行必要的排查，對指導(dǎo)臨床很有必要，特別對有些患者查出有高泌乳素血癥，但臨床用藥效果不佳，而又經(jīng)過顱腦CT及MRI查體無明顯異常的人群。