飼糧添加糞腸球菌對(duì)蛋雞生產(chǎn)性能、蛋品質(zhì)、脂質(zhì)代謝和腸道微生物數(shù)量的影響

劉 松 董曉芳 佟建明 鮑延娥 王志紅

(中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京畜牧獸醫(yī)研究所，北京100193)

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飼糧添加糞腸球菌對(duì)蛋雞生產(chǎn)性能、蛋品質(zhì)、脂質(zhì)代謝和腸道微生物數(shù)量的影響

劉 松 董曉芳*佟建明 鮑延娥 王志紅

(中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京畜牧獸醫(yī)研究所，北京100193)

本試驗(yàn)旨在研究飼糧添加糞腸球菌對(duì)蛋雞生產(chǎn)性能、蛋品質(zhì)、脂質(zhì)代謝和腸道微生物數(shù)量的影響。選擇137日齡海蘭褐殼蛋雞450只，隨機(jī)分成5個(gè)組，每組6個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)15只雞，分別飼喂在基礎(chǔ)飼糧中添加0、1.0×104、1.0×106、1.0×108和1.0×1010CFU/g糞腸球菌(CGMCC1.2135T)的試驗(yàn)飼糧。試驗(yàn)期168 d。結(jié)果顯示：1)試驗(yàn)第113～140天和第141～168天，1.0×106CFU/g糞腸球菌添加組蛋雞的產(chǎn)蛋量極顯著高于對(duì)照組和其他糞腸球菌添加組(P<0.01)。試驗(yàn)第141～168天，1.0×104CFU/g糞腸球菌添加組的料蛋比顯著低于1.0×108CFU/g糞腸球菌添加組(P<0.05)。2)試驗(yàn)第56天，各糞腸球菌添加組的蛋殼厚度均顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，對(duì)照組和1.0×106CFU/g糞腸球菌添加組的蛋白高度顯著高于1.0×104和1.0×1010CFU/g糞腸球菌添加組(P<0.05)；試驗(yàn)第84天和第140天，1.0×108CFU/g糞腸球菌添加組的蛋白高度顯著高于1.0×104CFU/g糞腸球菌添加組(P<0.05)。試驗(yàn)第56天，1.0×106CFU/g糞腸球菌添加組的哈夫單位極顯著高于1.0×104和1.0×1010CFU/g糞腸球菌添加組(P<0.01)；試驗(yàn)第84天，1.0×106和1.0×108CFU/g糞腸球菌添加組的哈夫單位顯著高于1.0×104CFU/g糞腸球菌添加組(P<0.05)。試驗(yàn)第28天，1.0×1010CFU/g糞腸球菌添加組的蛋黃顏色極顯著高于對(duì)照組和1.0×104CFU/g糞腸球菌添加組(P<0.01)；試驗(yàn)第56天，1.0×104、1.0×106和1.0×1010CFU/g糞腸球菌添加組的蛋黃顏色極顯著高于對(duì)照組(P<0.01)；試驗(yàn)第112天，各糞腸球菌添加組的蛋黃顏色均極顯著高于對(duì)照組(P<0.01)，且1.0×108CFU/g糞腸球菌添加組的蛋黃顏色極顯著高于1.0×106CFU/g糞腸球菌添加組(P<0.01)；試驗(yàn)第140天，1.0×108CFU/g糞腸球菌添加組的蛋黃顏色極顯著高于對(duì)照組(P<0.01)，而1.0×1010CFU/g糞腸球菌添加組蛋黃顏色極顯著低于對(duì)照組和其他糞腸球菌添加組(P<0.01)。3)試驗(yàn)第56天和第112天，1.0×108CFU/g糞腸球菌添加組蛋雞的蛋黃總膽固醇含量極顯著低于對(duì)照組、1.0×104和1.0×106CFU/g糞腸球菌添加組(P<0.01)。與對(duì)照組相比，飼糧添加糞腸球菌顯著或極顯著降低試驗(yàn)第84天的血清總膽固醇(P<0.01)、低密度脂蛋白膽固醇含量(P<0.01)和第168天的血清甘油三酯含量(P<0.05)。4)1.0×106、1.0×108和1.0×1010CFU/g糞腸球菌添加組的回腸大腸桿菌數(shù)量顯著低于對(duì)照組(P<0.05)；空腸大腸桿菌數(shù)量隨糞腸球菌添加水平的增加呈線性降低(P<0.05)。1.0×1010CFU/g糞腸球菌添加組的回腸糞腸球菌數(shù)量極顯著高于對(duì)照組、1.0×104和1.0×108CFU/g糞腸球菌添加組(P<0.01)；1.0×108和1.0×1010CFU/g糞腸球菌添加組的盲腸糞腸球菌數(shù)量極顯著高于對(duì)照組(P<0.01)。結(jié)果表明，飼糧添加糞腸球菌能提高蛋雞的產(chǎn)蛋量、蛋白高度和蛋黃顏色，降低血清和蛋黃的總膽固醇含量，調(diào)節(jié)腸道微生物數(shù)量；糞腸球菌在蛋雞飼糧中的適宜添加量為1.0×106或1.0×108CFU/g。

糞腸球菌；蛋雞；生產(chǎn)性能；蛋品質(zhì)；脂質(zhì)代謝；腸道微生物數(shù)量

糞腸球菌(Enterococcusfaecalis)是一種普遍存在于人和動(dòng)物腸道內(nèi)的產(chǎn)乳酸革蘭氏陽(yáng)性需氧菌或兼性厭氧菌[1-3]，是我國(guó)農(nóng)業(yè)部公布的《飼料添加劑品種目錄(2013)》中規(guī)定的可以直接飼喂動(dòng)物的飼料級(jí)微生物添加劑菌種之一。早在1998年美國(guó)食品和藥物管理局(FDA)和美國(guó)飼料控制官員協(xié)會(huì)(AAFCO)就將糞腸球菌認(rèn)定為安全的、可以直接飼喂的微生物菌種。研究發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加糞腸球菌具有提高動(dòng)物生產(chǎn)性能、改善營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)代謝和提高免疫功能等作用[4-8]。史自濤等[4]報(bào)道，飼糧中添加糞腸球菌可降低仔豬的腹瀉率，提高血液中總蛋白和球蛋白含量，降低白球比和谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性，改善機(jī)體蛋白質(zhì)代謝和免疫功能，提高平均日采食量和平均日增重，改善其生長(zhǎng)性能。劉輝等[5]在斷奶仔豬飼糧中添加糞腸球菌，發(fā)現(xiàn)平均日增重提高了8.79%，料重比降低了8.43%。侯璐[6]在斷奶仔豬飼糧中添加糞腸球菌，發(fā)現(xiàn)平均日增重提高了8.51%，料重比降低了7.57%。Ross等[7]在斷奶仔豬飼糧中添加糞腸球菌，發(fā)現(xiàn)仔豬采食量顯著降低而飼料利用率顯著提高。貢筱等[8]報(bào)道，飼糧中添加1×108CFU/kg糞腸球菌時(shí)育成期藍(lán)狐的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化率、氮沉積、凈蛋白質(zhì)利用率和蛋白質(zhì)生物學(xué)價(jià)值較為理想，且可獲得較好的生長(zhǎng)性能。然而，目前關(guān)于糞腸球菌作為益生菌在蛋雞上的研究和應(yīng)用尚無報(bào)道。因此，本試驗(yàn)旨在通過飼養(yǎng)試驗(yàn)研究糞腸球菌對(duì)蛋雞生產(chǎn)性能、蛋品質(zhì)、脂質(zhì)代謝和腸道微生物數(shù)量的影響，為糞腸球菌在蛋雞上的應(yīng)用提供試驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

糞腸球菌菌懸液的制備：取出糞腸球菌(CGMCC1.2135T)凍干粉，接種于胰蛋白胨大豆肉湯(TSB)培養(yǎng)基，在溫度37 ℃、轉(zhuǎn)速160 r/min條件下進(jìn)行活化和擴(kuò)繁培養(yǎng)。將所得發(fā)酵液用生理鹽水稀釋，取0.2 mL稀釋液均勻涂布于胰蛋白胨大豆肉湯瓊脂(TSA)培養(yǎng)基平板，37 ℃培養(yǎng)24 h后進(jìn)行活菌計(jì)數(shù)，計(jì)算總菌體數(shù)量。然后4 500 r/min離心15 min，棄去上清液，以無菌生理鹽水洗滌菌體，再4 500 r/min離心15 min，棄去上清液，重復(fù)2次，獲得菌體沉淀。用生理鹽水稀釋到確定濃度(CFU/mL)，得到菌體濃度已知的糞腸球菌菌懸液。將菌懸液均勻噴灑至飼糧中，攪拌均勻即可。糞腸球菌在飼糧中的添加水平、菌懸液濃度和菌懸液添加水平見表1。

表1 糞腸球菌在飼糧中的添加水平

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)及飼糧

選擇137日齡海蘭褐殼蛋雞450只，隨機(jī)分成5個(gè)組，每組6個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)15只雞，各組之間體重和產(chǎn)蛋率無顯著差異(P>0.05)。對(duì)照組飼喂不添加糞腸球菌的基礎(chǔ)飼糧，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ組分別飼喂在基礎(chǔ)飼糧中添加1.0×104、1.0×106、1.0×108和1.0×1010CFU/g糞腸球菌的試驗(yàn)飼糧?；A(chǔ)飼糧參照NRC(1994)[9]蛋雞營(yíng)養(yǎng)需要配制，基礎(chǔ)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平見表2。

表2 基礎(chǔ)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))

1)預(yù)混料為每千克飼糧提供 Premix provided the following per kg of the diet：Mn 63.6 mg，Zn 69 mg，F(xiàn)e 30 mg，Cu 6.25 mg，I 0.4 mg，Se 0.2 mg，VA 8 000 IU，VD33 000 IU，VE 15 IU，VK32 mg，VB12 mg，VB24 mg，VB64 mg，VB120.01 mg，泛酸鈣 calcium pantothenate 14 mg，煙酸 nicotinic acid 40 mg，葉酸 folic acid 1 mg，生物素 biotin 0.1 mg，氯化膽堿 choline chloride 250 mg，蛋氨酸 Met 990 mg。

2)粗蛋白質(zhì)、粗纖維和粗脂肪為實(shí)測(cè)值，其余均為計(jì)算值。CP, CF and EE were measured values, while the others were calculated values.

1.3 飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)蛋雞采用半開放雞舍3層階梯式籠養(yǎng)，每籠3只雞。每日定時(shí)飼喂3次(06:00、12:00、18:00)，自由采食和飲水。采用自然加人工補(bǔ)光，恒定光照時(shí)間為16 h/d(06：00～22：00，自動(dòng)照明控制系統(tǒng)控制)，光照強(qiáng)度為14 lx。用干濕球溫度計(jì)測(cè)定每天雞舍溫度和濕度，及時(shí)采取管理措施保證雞舍溫度在(20±3) ℃，相對(duì)濕度在60%～80%。試驗(yàn)期168 d。

1.4 測(cè)定指標(biāo)及方法

1.4.1 生產(chǎn)性能

試驗(yàn)期間，每天以重復(fù)為單位記錄蛋雞體重、產(chǎn)蛋數(shù)、蛋重、死亡雞數(shù)，并計(jì)算產(chǎn)蛋率、平均蛋重、產(chǎn)蛋量；每周結(jié)料1次，并計(jì)算平均日采食量和料蛋比。

1.4.2 蛋品質(zhì)

試驗(yàn)第28、56、84、112、140和168天，采集當(dāng)天所有雞蛋，于12 h內(nèi)進(jìn)行蛋品質(zhì)測(cè)定。采用蛋殼強(qiáng)度測(cè)定儀(Model-Ⅲ，Robotmation公司，日本)測(cè)定蛋殼強(qiáng)度；采用蛋殼厚度測(cè)定儀(Model P-1，Ozaki MFG公司，日本)測(cè)定蛋殼厚度；采用蛋品質(zhì)測(cè)定儀(EMT-2500，Robotmation公司，日本)測(cè)定蛋白高度、哈氏單位和蛋黃顏色。

1.4.3 血清總膽固醇(TCHO)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)含量

試驗(yàn)第1、28、56、84、112、140和168天，每個(gè)重復(fù)隨機(jī)選取3只雞，翅靜脈采血，3 000 r/min離心10 min，分離血清，-20 ℃保存。采用總膽固醇測(cè)定試劑盒(COD-PAP法)測(cè)定血清總膽固醇含量，采用甘油三酯測(cè)定試劑盒(GPO-PAP法)測(cè)定血清甘油三酯含量，采用低密度脂蛋白膽固醇測(cè)定試劑盒(聚乙烯硫酸沉淀法)測(cè)定血清低密度脂蛋白膽固醇含量，所用試劑盒均由北京中生北控生物科技股份有限公司提供。吸光度法測(cè)定所用的分光光度計(jì)為雙光束紫外可見光分光光度計(jì)(TU-1901，北京普析通用儀器有限責(zé)任公司)。

1.4.4 蛋黃總膽固醇含量

試驗(yàn)第28、56、84、112、140和168天，每個(gè)重復(fù)隨機(jī)采集8枚雞蛋，分離蛋黃，混合均勻，-20 ℃保存。采用總膽固醇測(cè)定試劑盒(COD-PAP法)測(cè)定蛋黃總膽固醇含量，所用試劑盒由北京中生北控生物科技股份有限公司提供。

1.4.5 腸道微生物數(shù)量

試驗(yàn)第168天，每個(gè)重復(fù)隨機(jī)選取1只雞，放血處死，在超凈臺(tái)內(nèi)采集空腸、回腸和盲腸并結(jié)扎，迅速轉(zhuǎn)移到微生物實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行腸道內(nèi)容物中大腸桿菌和糞腸球菌的選擇培養(yǎng)和平板計(jì)數(shù)。大腸桿菌的選擇培養(yǎng)基為伊紅美藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基(北京路橋技術(shù)股份有限公司)，糞腸球菌的選擇培養(yǎng)基為KF鏈球菌瓊脂培養(yǎng)基(CM0701)(北京路橋技術(shù)股份有限公司)。稱取0.5 g左右的腸道內(nèi)容物于10 mL離心管內(nèi)，加入一定量的生理鹽水進(jìn)行10倍梯度稀釋，用旋渦混合器混勻至合適梯度。取0.1 mL稀釋后的菌懸液在各培養(yǎng)基上用涂布棒進(jìn)行涂板，每個(gè)梯度3個(gè)重復(fù)，37 ℃培養(yǎng)24 h后計(jì)數(shù)。

每克樣品中菌落數(shù)=lg[(菌落數(shù)×
稀釋倍數(shù)×10 mL/0.1 mL)/0.5 g]。

1.5 數(shù)據(jù)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SAS 9.1統(tǒng)計(jì)軟件中的GLM程序進(jìn)行單因素方差分析，差異顯著者用Duncan氏法進(jìn)行多重比較，P<0.05和P<0.01分別作為差異顯著和極顯著的判斷標(biāo)準(zhǔn)。同時(shí)，用正交多項(xiàng)式分析飼糧中添加糞腸球菌對(duì)蛋雞生產(chǎn)性能、蛋品質(zhì)、蛋黃膽固醇含量和血清膽固醇、低密度脂蛋白膽固醇、甘油三酯含量以及腸道微生物數(shù)量影響的線性和二次效應(yīng)。其中產(chǎn)蛋率數(shù)據(jù)經(jīng)反正弦轉(zhuǎn)換后進(jìn)行分析，腸道微生物數(shù)量數(shù)據(jù)經(jīng)對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換后進(jìn)行分析。

2 結(jié) 果

2.1 飼糧添加糞腸球菌對(duì)蛋雞生產(chǎn)性能的影響

飼糧添加糞腸球菌對(duì)蛋雞的體重、產(chǎn)蛋率、平均蛋重、平均日采食量均無顯著影響(數(shù)據(jù)未展示)(P>0.05)。由表3可知，與對(duì)照組和其他糞腸球菌添加組相比，飼糧添加1.0×106CFU/g糞腸球菌可極顯著提高試驗(yàn)第113～140天和第141～168天的產(chǎn)蛋量(P<0.01)。試驗(yàn)第141～168天，各糞腸球菌添加組的料蛋比與對(duì)照組無顯著差異(P>0.05)，但1.0×104CFU/g糞腸球菌添加組的料蛋比顯著低于1.0×108CFU/g糞腸球菌添加組(P<0.05)；其余階段各組的料蛋比無顯著差異(P>0.05)。

表3 飼糧添加糞腸球菌對(duì)蛋雞生產(chǎn)性能的影響

同行數(shù)據(jù)肩標(biāo)相同小寫字母或無字母表示差異不顯著(P>0.05)，不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)，不同大寫字母表示差異極顯著(P<0.01)。下表同。

In the same row， values with the same small letter or no letter superscripts mean no significant difference (P>0.05), and with different small letter superscripts mean significant difference (P<0.05), while with different capital letter superscripts mean significant difference (P<0.01). The same as below.

2.2 飼糧添加糞腸球菌對(duì)蛋雞蛋品質(zhì)的影響

飼糧添加糞腸球菌對(duì)蛋雞的蛋殼強(qiáng)度無顯著影響(數(shù)據(jù)未展示)(P>0.05)。由表4可知，試驗(yàn)第56天，各糞腸球菌添加組的蛋殼厚度均顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，各糞腸球菌添加組間無顯著差異(P>0.05)；其余階段各組的蛋殼厚度無顯著差異(P>0.05)。試驗(yàn)第56天，對(duì)照組和1.0×106CFU/g糞腸球菌添加組的蛋白高度顯著高于1.0×104和1.0×1010CFU/g糞腸球菌添加組(P<0.05)；試驗(yàn)第84天和第140天，各糞腸球菌添加組的蛋白高度與對(duì)照組無顯著差異(P>0.05)，1.0×108CFU/g糞腸球菌添加組的蛋白高度顯著高于1.0×104CFU/g糞腸球菌添加組(P<0.05)。整個(gè)試驗(yàn)期間，與對(duì)照組相比，各糞腸球菌添加組的哈夫單位無顯著差異(P>0.05)；試驗(yàn)第56天，1.0×106CFU/g糞腸球菌添加組的哈夫單位最高，且極顯著高于1.0×104和1.0×1010CFU/g糞腸球菌添加組(P<0.01)；試驗(yàn)第84天，1.0×106和1.0×108CFU/g糞腸球菌添加組的哈夫單位顯著高于1.0×104CFU/g糞腸球菌添加組(P<0.05)。試驗(yàn)第28天，1.0×1010CFU/g糞腸球菌添加組的蛋黃顏色極顯著高于對(duì)照組和1.0×104CFU/g糞腸球菌添加組(P<0.01)；試驗(yàn)第56天，1.0×104、1.0×106和1.0×1010CFU/g糞腸球菌添加組的蛋黃顏色極顯著高于對(duì)照組(P<0.01)，各糞腸球菌添加組間無顯著差異(P>0.05)；試驗(yàn)第112天，各糞腸球菌添加組的蛋黃顏色均極顯著高于對(duì)照組(P<0.01)，且1.0×108CFU/g糞腸球菌添加組的蛋黃顏色極顯著高于1.0×106CFU/g糞腸球菌添加組(P<0.01)；試驗(yàn)第140天，1.0×108CFU/g糞腸球菌添加組的蛋黃顏色極顯著高于對(duì)照組(P<0.01)，而1.0×1010CFU/g糞腸球菌添加組的蛋黃顏色極顯著低于對(duì)照組和其他糞腸球菌添加組(P<0.01)。

表4 飼糧添加糞腸球菌對(duì)蛋雞蛋品質(zhì)的影響

續(xù)表4項(xiàng)目Items糞腸球菌添加水平Enterococcusfaecalissupplementallevel/(CFU/g)01.0×1041.0×1061.0×1081.0×1010SEMP值P-value處理Treatment線性Linear二次Quadratic蛋黃顏色Yolkcolor第28天Day288.3Bc8.3Bc8.4ABbc8.6ABab8.7Aa0.0640.0020.0010.015第56天Day568.7Bc9.0Aab9.1Aa8.9ABb9.1Aa0.058<0.0010.0120.417第84天Day848.99.19.19.19.10.0720.1050.4680.355第112天Day1127.8Cc8.8ABa8.6Bc8.9Aa8.7ABab0.073<0.0010.021<0.001第140天Day1409.0Bb9.2ABa9.2ABab9.3Aa8.8Cc0.059<0.001<0.0010.061第168天Day1689.69.69.39.49.60.1010.0940.2520.332

2.3 飼糧添加糞腸球菌對(duì)蛋雞蛋黃總膽固醇含量的影響

由表5可知，試驗(yàn)第56天，1.0×108CFU/g糞腸球菌添加組蛋雞的蛋黃總膽固醇含量極顯著低于對(duì)照組、1.0×104和1.0×106CFU/g糞腸球菌添加組(P<0.01)；試驗(yàn)第112天，1.0×108和1.0×1010CFU/g糞腸球菌添加組的蛋黃總膽固醇含量極顯著低于對(duì)照組、1.0×104和1.0×106CFU/g糞腸球菌添加組(P<0.01)。蛋黃總膽固醇含量在1.0×108和1.0×1010CFU/g糞腸球菌添加組間無顯著差異(P>0.05)。

表5 飼糧添加糞腸球菌對(duì)蛋雞蛋黃總膽固醇含量的影響

2.4 飼糧添加糞腸球菌對(duì)蛋雞血清總膽固醇、甘油三酯和低密度脂蛋白膽固醇含量的影響

由表6可知，試驗(yàn)第84天，各糞腸球菌添加組蛋雞的血清總膽固醇含量均極顯著低于對(duì)照組(P<0.01)，各糞腸球菌添加組間無顯著差異(P>0.05)；試驗(yàn)第168天，隨著糞腸球菌添加水平的增加血清總膽固醇含量呈二次降低(P<0.05)。試驗(yàn)第168天，各糞腸球菌添加組的血清甘油三酯含量均顯著低于對(duì)照組(P<0.05)，各糞腸球菌添加組間無顯著差異(P>0.05)。試驗(yàn)第84天，各糞腸球菌添加組的血清低密度脂蛋白膽固醇含量均極顯著低于對(duì)照組(P<0.01)，各糞腸球菌添加組間無顯著差異(P>0.05)。

2.5 飼糧添加糞腸球菌對(duì)蛋雞腸道微生物數(shù)量的影響

由表7可知，1.0×106、1.0×108和1.0×1010CFU/g糞腸球菌添加組的回腸大腸桿菌數(shù)量顯著低于對(duì)照組(P<0.05)，各糞腸球菌添加組間無顯著差異(P>0.05)；空腸大腸桿菌數(shù)量隨飼糧糞腸球菌添加水平的增加呈線性降低(P<0.05)。1.0×1010CFU/g糞腸球菌添加組的回腸糞腸球菌數(shù)量極顯著高于對(duì)照組、1.0×104和1.0×108CFU/g糞腸球菌添加組(P<0.01)；1.0×108和1.0×1010CFU/g糞腸球菌添加組的盲腸糞腸球菌數(shù)量極顯著高于對(duì)照組(P<0.01)，各糞腸球菌添加組間無顯著差異(P>0.05)。

表6 飼糧添加糞腸球菌對(duì)蛋雞血清膽固醇、甘油三酯和低密度脂蛋白膽固醇含量的影響

3 討 論

糞腸球菌是一種普遍存在于人和動(dòng)物腸道的產(chǎn)乳酸革蘭氏陽(yáng)性需氧菌或兼性厭氧菌[1-3]。益生菌能發(fā)揮作用的關(guān)鍵之一是具有耐酸、耐膽鹽特性，從而保證其能到達(dá)發(fā)揮益生作用的腸道區(qū)域。前期研究表明，本試驗(yàn)所用的糞腸球菌CGMCC1.2135T具有良好的耐酸、耐膽鹽特性[10]。侯璐[6]研究也表明，糞腸球菌具有耐酸、耐膽鹽以及耐高溫等特性，能夠順利到達(dá)畜禽腸道并存活。研究還發(fā)現(xiàn)，糞腸球菌CGMCC1.2135T具有體外抑制沙門氏菌和大腸桿菌的能力[10]。Hugas等[11]研究也發(fā)現(xiàn)，糞腸球菌可產(chǎn)生有機(jī)酸及細(xì)菌素，抑制腸道內(nèi)病原菌及腐敗微生物的生長(zhǎng)，降低盲腸及回腸pH，從而優(yōu)化腸道環(huán)境。此外，Pereira等[12]發(fā)現(xiàn)糞腸球菌具有很高的膽鹽分解酶活性，可將膽鹽肝腸循環(huán)中的膽鹽酶解，從而導(dǎo)致腸道對(duì)膽汁的重吸收減少，動(dòng)物血液中用于補(bǔ)償性合成膽鹽的膽固醇增多。這個(gè)生理特性為糞腸球菌作為降膽固醇益生菌提供了理論可能。

表7 飼糧添加糞腸球菌對(duì)蛋雞腸道微生物數(shù)量的影響

本試驗(yàn)中，飼糧中添加糞腸球菌24周對(duì)蛋雞的體重、產(chǎn)蛋率、平均蛋重和平均日采食量均無顯著影響。目前，尚無關(guān)于糞腸球菌對(duì)蛋雞體重、產(chǎn)蛋率、平均蛋重和平均日采食量影響的研究報(bào)道。研究認(rèn)為，飼糧添加乳酸菌[13-15]、地衣芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌[16]和釀酒酵母[17]對(duì)蛋雞的體重均無顯著影響；飼糧添加乳酸菌[14]、地衣芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌[16,18]能提高蛋雞的產(chǎn)蛋率。但Nahashon等[15,19]、Balevi等[20]、Salma等[21]和Mikulski等[22]報(bào)道乳酸菌、莢膜紅細(xì)菌、乳酸片球菌等益生菌對(duì)蛋雞的產(chǎn)蛋率無顯著影響。Nahashon等[13]、Kurtoglu等[16]、Yousefi等[17]、Goodling等[23]和Mohan等[24]研究發(fā)現(xiàn)乳酸菌、地衣芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌、釀酒酵母、嗜酸乳桿菌、干酪乳桿菌和雙歧桿菌等益生菌對(duì)蛋雞的蛋重?zé)o顯著影響。本試驗(yàn)研究結(jié)果顯示，飼糧添加1.0×106CFU/g糞腸球菌可極顯著提高試驗(yàn)第113～140天和第141～168天的產(chǎn)蛋量。Nahashon等[19]、Tortuero等[25]和Xu等[26]的研究也發(fā)現(xiàn)乳酸菌、糞鏈球菌和枯草芽孢桿菌能提高蛋雞的產(chǎn)蛋量。試驗(yàn)第141～168天，飼糧添加1.0×104CFU/g糞腸球菌相比添加1.0×108CFU/g糞腸球菌能顯著降低料蛋比，提高飼料轉(zhuǎn)化率。這可能與糞腸球菌能抑制腸道有害微生物，調(diào)節(jié)腸道pH，從而優(yōu)化腸道環(huán)境，提高腸道酶活性和養(yǎng)分消化率有關(guān)[11,27]。蛋殼厚度和蛋殼強(qiáng)度是用來評(píng)價(jià)蛋殼質(zhì)量的常用指標(biāo)。本試驗(yàn)中，試驗(yàn)第56天，飼糧添加糞腸球菌可顯著提高蛋殼厚度，推測(cè)可能與糞腸球菌可改善腸道環(huán)境和功能、提高腸道鈣吸收有關(guān)。飼糧添加糞腸球菌對(duì)蛋殼強(qiáng)度無顯著影響，這與Nahashon等[15]和Mahdavi等[18]的報(bào)道相一致。哈夫單位和蛋白高度是評(píng)價(jià)蛋新鮮程度的指標(biāo)。研究報(bào)道，哈夫單位和蛋白高度隨存儲(chǔ)時(shí)間的延長(zhǎng)顯著降低[28-30]。本試驗(yàn)中，試驗(yàn)第56天，飼糧添加1.0×106CFU/g糞腸球菌相比添加1.0×104和1.0×1010CFU/g糞腸球菌可顯著提高蛋白高度和哈夫單位；試驗(yàn)第84天，飼糧添加1.0×108CFU/g糞腸球菌相比添加1.0×104CFU/g糞腸球菌可顯著提高蛋白高度和哈夫單位；從而提高雞蛋新鮮程度，延長(zhǎng)商品雞蛋貨架期。對(duì)于蛋黃顏色而言，雖然沒有明顯的劑量效應(yīng)或規(guī)律一致的結(jié)果，但試驗(yàn)中觀察到試驗(yàn)第28、56、84和112天，各糞腸球菌添加組的蛋黃顏色與對(duì)照組相比有所提高，飼糧中添加糞腸球菌對(duì)蛋黃顏色的影響作用機(jī)理有待進(jìn)一步研究討論。

糞腸球菌降低蛋黃和血清膽固醇含量的機(jī)理可能與其能產(chǎn)生膽鹽分解酶有關(guān)。膽鹽是以膽固醇為前體在肝臟中合成的水溶性物質(zhì)。膽鹽分解酶為N端親核水解酶，能特異性地水解結(jié)合膽鹽的酰胺鍵，釋放出游離膽鹽和甘氨酸或?；撬岬陌被釟埢鵞31]。糞腸球菌能產(chǎn)生膽鹽分解酶[32-34]。經(jīng)膽鹽分解酶分解的游離膽鹽與結(jié)合膽鹽相比，其溶解度較低，不容易被腸道重新吸收[35]，從而隨糞便排出體外[36-37]。因此，機(jī)體為維持正常的肝腸循環(huán)，彌補(bǔ)膽鹽損失，肝臟會(huì)利用血液中的膽固醇重新合成新的膽鹽，從而引起血清膽固醇含量的降低[12,37]。除通過膽鹽分解酶活性的解離作用降低機(jī)體膽固醇含量外，研究者還推測(cè)益生菌可通過細(xì)胞質(zhì)同化胞外膽固醇、細(xì)胞膜整合胞外膽固醇以及細(xì)胞壁吸附胞外膽固醇等途徑發(fā)揮降低機(jī)體膽固醇含量的作用[38-39]。

一些致病性的大腸桿菌可以在慢性無癥狀攜帶狀態(tài)引起局部或全身性感染，因此一直是世界性的公共衛(wèi)生問題。此外，殘留在雞蛋上的大腸桿菌也是影響食品安全的因素之一。本試驗(yàn)中，1.0×106、1.0×108和1.0×1010CFU/g糞腸球菌添加組的回腸大腸桿菌數(shù)量顯著低于對(duì)照組，空腸大腸桿菌數(shù)量隨糞腸球菌添加水平的增加呈線性降低。鮑延娥等[10]報(bào)道，糞腸球菌CGMCC1.2135T能抑制大腸桿菌O1和O78的生長(zhǎng)。研究證實(shí)，糞腸球菌產(chǎn)生的細(xì)菌素具有廣譜抗菌性，不僅包括革蘭氏陽(yáng)性菌，同時(shí)也包括諸如李斯特菌(Listeriaspp.)[40-43]、沙門氏菌(Salmonellaspp.)[44]、大腸桿菌(Escherichiacoli)[44]和金黃色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)[45]等革蘭氏陰性菌。因此，飼糧添加糞腸球菌有助于降低蛋雞感染大腸桿菌的風(fēng)險(xiǎn)，同時(shí)，這或許有助于降低雞蛋大腸桿菌污染。

4 結(jié) 論

① 飼糧添加1.0×106CFU/g糞腸球菌極顯著提高試驗(yàn)第113～168天的產(chǎn)蛋量。

② 試驗(yàn)第56天，飼糧添加1.0×106CFU/g糞腸球菌相比添加1.0×104和1.0×1010CFU/g糞腸球菌可顯著提高蛋白高度和哈夫單位；試驗(yàn)第84天，飼糧添加1.0×108CFU/g糞腸球菌相比添加1.0×104CFU/g糞腸球菌可顯著提高蛋白高度和哈夫單位。試驗(yàn)第28、56、84和112天，各糞腸球菌添加組均能提高蛋黃顏色，但飼糧添加1.0×1010CFU/g糞腸球菌會(huì)降低試驗(yàn)第140天的蛋黃顏色。

③ 試驗(yàn)第56天和第112天，1.0×108CFU/g糞腸球菌添加組蛋雞的蛋黃總膽固醇含量極顯著低于對(duì)照組、1.0×104和1.0×106CFU/g糞腸球菌添加組。飼糧添加糞腸球菌顯著降低了血清總膽固醇(第84天)、甘油三酯(第168天)和低密度脂蛋白膽固醇(第84天)含量。

④ 飼糧添加1.0×106、1.0×108和1.0×1010CFU/g糞腸球菌顯著降低回腸大腸桿菌數(shù)量；空腸大腸桿菌數(shù)量隨糞腸球菌添加水平的增加呈線性降低。與對(duì)照組、1.0×104和1.0×108CFU/g糞腸球菌添加組相比，飼糧添加1.0×1010CFU/g 糞腸球菌極顯著提高回腸糞腸球菌數(shù)量，飼糧添加1.0×108和1.0×1010CFU/g糞腸球菌顯著提高盲腸糞腸球菌數(shù)量。

⑤ 蛋雞飼糧中糞腸球菌的適宜添加量為1.0×106或1.0×108CFU/g。

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*Corresponding author, associate professor, E-mail: xiaofangd1124@sina.com

(責(zé)任編輯 李慧英)

Effects of Dietary Enterococcus faecalis on Performance, Egg Quality, Lipid Metabolism and Intestinal Microflora Numbers of Laying Hens

LIU Song DONG Xiaofang*TONG Jianming BAO Yan’e WANG Zhihong

(InstituteofAnimalSciences,ChineseAcademyofAgriculturalSciences,Beijing100193,China)

This experiment was conducted to investigate the effects of dietaryEnterococcusfaecalison performance, egg quality, lipid metabolism and intestinal microflora numbers of laying hens. Four hundred and fifty 137-day-old Hy-Line brown laying hens were randomly allocated to 5 groups with 6 replicates per group and 15 hens per replicate. Hens were fed the basal diet supplemented with 0, 1.0×104, 1.0×106, 1.0×108and 1.0×1010CFU/gEnterococcusfaecalis(CGMCC1.2135T)， respectively. The experiment lasted for 168 days. The results showed as follows: 1) egg mass of laying hens in 1.0×106CFU/gEnterococcusfaecalissupplemental group was significantly higher than that in the control group and the otherEnterococcusfaecalissupplemental groups during day 113 to 140 and day 141 to 168 (P<0.01). During day 141 to 168, the ratio of feed to egg in 1.0×104CFU/gEnterococcusfaecalissupplemental group was significantly lower than that in the 1.0×108CFU/gEnterococcusfaecalissupplemental group (P<0.05). 2) On day 56, eggshell thickness in allEnterococcusfaecalissupplemental groups was significantly higher than that in the control group (P<0.05), and albumen height in the control group and 1.0×106CFU/gEnterococcusfaecalissupplemental group was significantly higher than that in the 1.0×104and 1.0×1010CFU/gEnterococcusfaecalissupplemental groups (P<0.05). On days 84 and 140, albumen height in the 1.0×108CFU/gEnterococcusfaecalissupplemental group was significantly higher than that in the 1.0×104CFU/gEnterococcusfaecalissupplemental group (P<0.05). On day 56, Haugh unit in 1.0×106CFU/gEnterococcusfaecalissupplemental group was significantly higher than that in 1.0×104and 1.0×1010CFU/gEnterococcusfaecalissupplemental groups (P<0.01); On day 84, Haugh unit in 1.0×106and 1.0×108CFU/gEnterococcusfaecalissupplemental groups was significantly higher than that in 1.0×104CFU/gEnterococcusfaecalissupplemental group (P<0.05). On day 28, yolk color in 1.0×1010CFU/gEnterococcusfaecalissupplemental group was significantly higher than that in the control group and 1.0×104CFU/gEnterococcusfaecalissupplemental group (P<0.01). On day 56, yolk color in 1.0×104, 1.0×106and 1.0×1010CFU/gEnterococcusfaecalissupplemental groups was significantly higher than that in the control group (P<0.01). On day 112, yolk color in allEnterococcusfaecalissupplemental groups was significantly higher than that in the control group (P<0.01), moreover, yolk color in the 1.0×108CFU/gEnterococcusfaecalissupplemental group was significantly higher than that in 1.0×106CFU/gEnterococcusfaecalissupplemental group (P<0.01). On day 140, yolk color in 1.0×108CFU/gEnterococcusfaecalissupplemental group was significantly higher than that in the control group (P<0.01), however, yolk color in the 1.0×1010CFU/gEnterococcusfaecalissupplemental group was significantly lower than that in the control group and the otherEnterococcusfaecalissupplemental groups (P<0.01). 3) The content of total cholesterol (TCHO) in egg yolk of laying hens in 1.0×108CFU/gEnterococcusfaecalissupplemental group was significantly lower than that in the control group and 1.0×104and 1.0×106CFU/gEnterococcusfaecalissupplemental groups on days 56 and 112 (P<0.01). Compared with the control group, dietaryEnterococcusfaecalissignificantly decreased the contents of TCHO and low-density lipoprotein cholesterol (LDL-C) in serum on day 84 (P<0.01) and the content of triglyceride (TG) in serum on day 168 (P<0.05). 4) The number ofEscherichiacoliin ileum in 1.0×106, 1.0×108and 1.0×1010CFU/gEnterococcusfaecalissupplemental groups was significantly lower than that in the control group (P<0.05), and the number ofEscherichiacoliin jejunum had a linear decrease with the increasingEnterococcusfaecalissupplemental level (P<0.05). The number ofEnterococcusfaecalisin ileum in 1.0×1010CFU/gEnterococcusfaecalissupplemental group was significantly higher than that in the control group and 1.0×104and 1.0×108CFU/gEnterococcusfaecalissupplemental groups (P<0.01), and the number ofEnterococcusfaecalisin caecum in 1.0×108and 1.0×1010CFU/gEnterococcusfaecalissupplemental groups was significantly higher than that in the control group (P<0.01). This study indicates that dietaryEnterococcusfaecaliscan increase egg mass, albumen height and yolk color, decrease the content of TCHO in serum and egg yolk and regulate intestinal microflora numbers of laying hens, and the appropriate supplemental amount ofEnterococcusfaecalisin diets of laying hens is 1.0×106or 1.0×108CFU/g.[ChineseJournalofAnimalNutrition, 2017, 29(1)：202-213]

Enterococcusfaecalis; laying hen; performance; egg quality; lipid metabolism; intestinal microflora numbers

10.3969/j.issn.1006-267x.2017.01.023

2016-07-14

國(guó)家蛋雞產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系建設(shè)專項(xiàng)經(jīng)費(fèi)(CARS-41-K16)；中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院科技創(chuàng)新工程(ASTIP-IAS08)

劉 松(1991—)，男，山東日照人，碩士研究生，動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)與飼料科學(xué)專業(yè)。E-mail： liusong7@yeah.net

*通信作者：董曉芳，副研究員，碩士生導(dǎo)師，E-mail： xiaofangd1124@sina.com

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