沙丁胺醇的檢測(cè)方法研究進(jìn)展

李政清， 聶 婉， 伍曉紅， 陳秋玲， 王琤*

（江西科技師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，江西南昌330013）

檢測(cè)分析

沙丁胺醇的檢測(cè)方法研究進(jìn)展

李政清， 聶 婉， 伍曉紅， 陳秋玲， 王琤韋華*

（江西科技師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，江西南昌330013）

沙丁胺醇是β-興奮劑的一種，在臨床應(yīng)用中能有效地治療支氣管哮喘、肺氣腫等常見哮喘類呼吸道疾病。在畜牧業(yè)中能提高瘦肉率，但由于β-興奮劑易產(chǎn)生殘留而危害食用者的身體健康，因此大部分國(guó)家通過立法以禁止β-興奮劑的使用。本文就β-興奮劑中沙丁胺醇的危害以及常用檢測(cè)方法作一簡(jiǎn)述。

沙丁胺醇；檢測(cè)；方法

1 沙丁胺醇的作用與危害性

沙丁胺醇化學(xué)名為1-（4-羥基-3-羥甲基苯基），屬于β-興奮劑的一種。添加5～10倍劑量的沙丁胺醇可增強(qiáng)蛋白質(zhì)的合成和脂肪組織代謝能力（王振玲等，2014），從而達(dá)到提高飼料利用率、改善肉質(zhì)（趙德明，2008；Zhang等，2007）、促進(jìn)禽類生長(zhǎng)的目的（黃素文等，2007）。沙丁胺醇易在人和動(dòng)物的內(nèi)臟、器官中殘留（Shelver等，2003），產(chǎn)生的毒性對(duì)心臟、肝臟、腎臟的危害較大（孫書剛等，2015），易使糖尿病、心腦血管疾病病人病情惡化，嚴(yán)重危害人們的身體健康。近年來發(fā)生多起沙丁胺醇中毒事件（胡萍，2008）。因此，高效、實(shí)用的檢測(cè)方法對(duì)畜產(chǎn)品安全有著重要的作用（Wang等，2006），本文就豬肉以及豬尿中的沙丁胺醇檢測(cè)方法作一概述。

2 沙丁胺醇的檢測(cè)方法

2.1 感官檢測(cè)法 正常生豬色澤淡紅，肉質(zhì)具有良好彈性，不易滲血。長(zhǎng)期使用沙丁胺醇飼喂的生豬皮膚光亮、色澤光鮮，毛較少，臀部圓潤(rùn)且上翹，傷口不易愈合，易跛足，及蹄部易感染，易滲血等（畢玉香，2009）。另外，其瘦肉率高、脂肪少、肌肉飽滿、瘦肉纖維疏松。感官檢測(cè)法對(duì)人員的技術(shù)要求比較低，適用于各種人員，但會(huì)因每個(gè)人的判定標(biāo)準(zhǔn)不同而產(chǎn)生誤判。

2.2 酶聯(lián)免疫吸附法 酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）是當(dāng)前最常用的檢測(cè)方法之一，也是當(dāng)前分析化學(xué)的重點(diǎn)研究方向。酶聯(lián)免疫吸附法的原理是用酶復(fù)合物和抗體結(jié)合，從而產(chǎn)生顯色反應(yīng)以檢測(cè)沙丁胺醇是否存在，酶聯(lián)免疫法的檢測(cè)限為0.1 ppb（Sawayawn，2000），靈敏度較高。沙丁胺醇的分子結(jié)構(gòu)與萊克多巴胺相似，檢測(cè)時(shí)容易產(chǎn)生交叉反應(yīng)。為了建立沙丁胺醇直接競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫法，王俊平等（2011）使用沙丁胺醇多克隆抗體進(jìn)行了試驗(yàn)，結(jié)果所獲得IC15的值為0.05 ng/mL，具有較高的靈敏度。酶聯(lián)免疫法具有檢測(cè)時(shí)間短、操作簡(jiǎn)單、見效快等優(yōu)點(diǎn)，目前可作為一個(gè)快速檢測(cè)方法，并不能作為確證方法。

2.3 膠體金免疫法 膠體金免疫法（GIFA）是以膠體金為示蹤物，對(duì)沙丁胺醇進(jìn)行快速檢測(cè)的方法。其原理為在硝酸纖維素膜上加入待測(cè)樣品，以液體的膠體金為標(biāo)記抗體，對(duì)滲濾膜中形成的抗體抗原復(fù)合物進(jìn)行檢測(cè)，如果試驗(yàn)結(jié)果為陽性，硝酸纖維素膜上會(huì)有紅色斑點(diǎn)顯現(xiàn)（吳巧麗和葉春生，2012）。彭濤等（2015）利用膠體金免疫層析法對(duì)豬尿中的沙丁胺醇進(jìn)行了快速檢測(cè)，其檢測(cè)限為0.83μg/L，回收率為86.6%～109.7%。韓京朋等（2014）對(duì)豬尿中的沙丁胺醇建立了膠體金檢測(cè)法，用時(shí)5 min，可檢測(cè)出豬尿中的SAL，檢測(cè)限為3.0μg/L。由此可見，膠體金免疫法具有操作簡(jiǎn)便、見效迅速、成本低廉的優(yōu)點(diǎn)。但此法只能作為初步的篩選方法來確定樣品是否含有β興奮劑，并不能準(zhǔn)確的檢測(cè)出樣品中是否含有沙丁胺醇。

2.4 色譜法

2.4.1 氣象色譜-質(zhì)譜法 氣象色譜-質(zhì)譜法（GC-MS）是一種可定性和定量的檢測(cè)方法，其在檢測(cè)樣品中沙丁胺醇含量的應(yīng)用中已十分成熟。在使用氣相色譜法檢測(cè)樣品中的沙丁胺醇時(shí)，通常要經(jīng)過處理、凈化、衍生三個(gè)步驟 （管健等，2007）。王建平等（2007）對(duì)豬肝中的沙丁胺醇建立了免疫親和色譜-氣相色譜/質(zhì)譜法，又稱IAC-GC/MS法，檢測(cè)限為0.5 ng/g，定量限為2 ng/g，回收率為78.4%～106.9%。氣相色譜法檢測(cè)精準(zhǔn)度高、靈敏度高、穩(wěn)定性強(qiáng)（Shen等，2005），但是實(shí)驗(yàn)儀器昂貴，不能普及使用，檢測(cè)時(shí)間慢，不適合快速檢測(cè)，而且氣相色譜法操作難度大，對(duì)實(shí)驗(yàn)人員的技術(shù)操作與專業(yè)知識(shí)要求較高。

2.4.2 反相高效液相色譜-紫外法 反相高效液相色譜-紫外法是利用含有沙丁胺醇的溶液在紫外下特定的吸收波長(zhǎng)，用紫外分光光度計(jì)對(duì)其進(jìn)行波長(zhǎng)掃描，會(huì)有一條特異的峰型曲線。秦永平（2003）等對(duì)血漿中的沙丁胺醇建立了反相高效液相色譜-紫外法，以嗎啡為內(nèi)標(biāo)，采用Ultraspher Cyano分析柱（250 mm×4.6 mm，5μm），乙腈∶甲醇∶0.025mol/L磷酸銨緩沖液 （2∶0.5∶97.5）為流動(dòng)相，在224 nm波長(zhǎng)下檢測(cè)離子萃取純化后的樣品，按內(nèi)標(biāo)法進(jìn)行定量，標(biāo)準(zhǔn)曲線在0.5～32μg/L內(nèi)有良好線性關(guān)系，最低檢測(cè)濃度為0.3μg/L，萃取回收率為93%～99%，方法回收率為98%～109%，批內(nèi)RSD小于5%，批間RSD小于8%，回收率高。

2.4.3 高效液相色譜-二極管陣列檢測(cè)法 高效液相色譜-二極管陣列檢測(cè)法是當(dāng)前沙丁胺醇檢測(cè)法中一種較為重要的檢測(cè)方法，二極管陣列檢測(cè)器工作原理是組分選擇性吸收通過樣品池的復(fù)色光進(jìn)入單色器，然后照射在二極管陣列裝置上，二極管陣列裝置把光信號(hào)轉(zhuǎn)化為電信號(hào)，從而獲得特定組分的成分。戴華等（2003）在檢測(cè)飼料中的鹽酸克倫特羅與沙丁胺醇時(shí)利用了高效液相色譜-二極管陣列檢測(cè)法，測(cè)得鹽酸克倫特羅、沙丁胺醇的定量下限分別為0.10、0.36mg/kg，回收率分別大于88%、74%，RSD（n=5）分別小于6.4%、3.0%。尚紅霞等（2003）在檢測(cè)飼料中沙丁胺醇含量時(shí)使用了Amberlite XAD-2大孔吸附樹脂進(jìn)行固相萃取，解決了萃取時(shí)產(chǎn)生的乳化問題，取得了良好的試驗(yàn)結(jié)果。這種檢測(cè)方法的優(yōu)點(diǎn)在于檢測(cè)精確度高、噪音低、成本低、易于操作和推廣、可提供組分的定性信息（Korfmachen，2005），而且還可以得到任意時(shí)間的光譜圖。

2.4.4 高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法 高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（HPLC-MS）也是沙丁胺醇的常用檢測(cè)法之一，該方法采用乙酸銨緩沖液酶以及經(jīng)混合陽離子交換柱凈化的提取液解提血漿中的目標(biāo)化合物，再采用超高效液相色譜對(duì)化合物進(jìn)行檢測(cè)。此法對(duì)豬肝中的沙丁胺醇含量檢測(cè)可精確到0.1μg/kg。為了檢測(cè)動(dòng)物血液中的沙丁胺醇含量，王鳳美等（2015）對(duì)其建立了高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法，線性相關(guān)系數(shù)均大于0.99，測(cè)定低限為0.5μg/kg，說明沙丁胺醇回收良好。谷麗麗等（2010）利用高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法對(duì)病理小鼠的肝臟進(jìn)行檢測(cè)，并對(duì)其建立病理模型，可以詳細(xì)的觀察出沙丁胺醇的含量以及變化趨勢(shì)，并且其精確度、靈敏度都較高 （Josefsson等，2006；Spyridaki等，2006）。但是質(zhì)譜儀操作復(fù)雜，儀器昂貴，不易普及使用。

3 小結(jié)

沙丁胺醇的檢測(cè)方法在日益發(fā)展，檢測(cè)靈敏度和精確度也在不斷的提高。相信隨著科技的不斷進(jìn)步，沙丁胺醇的檢測(cè)技術(shù)會(huì)變的越來越成熟，檢測(cè)方法會(huì)更加精確、簡(jiǎn)單。

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salbutamol；detection；methods

S816.17

A

1004-3314（2017）01-0033-03

10.15906/j.cnki.cn11-2975/s.20170107

*通訊作者