黃曲霉毒素M1及其常見檢測方法

宋 瑞

(石家莊市畜產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)測中心，河北石家莊 050041)

黃曲霉毒素M1及其常見檢測方法

宋 瑞

(石家莊市畜產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)測中心，河北石家莊 050041)

黃曲霉毒素 M1主要是由于奶牛飼入被黃曲霉毒素污染的飼料，經(jīng)過羥基化作用而產(chǎn)生的。是目前發(fā)現(xiàn)的毒性、致癌性較強的天然有毒物。本文主要從黃曲霉毒素 M1的化學(xué)性質(zhì)、對人體的危害以及常見檢測方法進行了闡述。

黃曲霉毒素M1 常見檢測方法

牛奶中的黃曲霉毒素M1主要是由于奶牛飼入被黃曲霉毒素污染的飼料，經(jīng)過羥基化作用而產(chǎn)生的。黃曲霉毒素M1的理化性質(zhì)非常穩(wěn)定，不會因為加熱、消毒等因素消除。黃曲霉毒素M1是目前發(fā)現(xiàn)的毒性、致癌性較強的天然有毒物，它能夠破壞人及動物的肝臟組織，嚴重時可導(dǎo)致肝癌甚至死亡。隨著人們生活水平的提高，黃曲霉毒素M1的危害也逐漸引起老百姓的關(guān)注。相關(guān)專家、學(xué)者對黃曲霉毒素M1的研究也越來越深入，本文從黃曲霉毒素的來源、化學(xué)性質(zhì)、對人體的危害以及檢測方法四方面進行了闡述。

1 黃曲霉毒素 M1的理化性質(zhì)

黃曲霉毒素 M1的分子式為 C17H12O7，分子量為 328，是一類毒性非常強的二氫呋喃香豆素衍生物，熔點 299℃，形狀為長方形片狀、無色結(jié)晶，365nm 紫外光下照射呈藍紫色熒光。黃曲霉毒素 M1可以溶于多種有機極性溶劑，如氯仿、乙腈、甲醇。黃曲霉毒素 M1具有較為穩(wěn)定的化學(xué)結(jié)構(gòu)，對光、熱、酸都較為穩(wěn)定，不易分子結(jié)構(gòu)的變化，因此牛奶常見的消煮方式都不易使之消除。

2 黃曲霉毒素 M1的來源

黃曲霉毒素是黃曲霉、寄生曲霉等霉菌產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物。主要產(chǎn)生原因是糧食未及時晾干或存儲不當(dāng)，極易被黃曲霉污染，產(chǎn)生黃曲霉毒素。有學(xué)者研究較易被黃曲霉污染的糧食，首先是玉米、花生及其制品，其次是小麥、高粱，豆粕等。牛奶中出現(xiàn)黃曲霉毒素 M1，主要是把發(fā)霉的糧食作為飼料飼喂奶牛，其中的黃曲霉毒素會轉(zhuǎn)變?yōu)辄S曲霉毒素 M1并于 24 小時內(nèi)進入到牛奶中；其次是牛奶在儲存環(huán)節(jié)，存儲方法不當(dāng)也會造成牛奶中出現(xiàn)黃曲霉毒素M1。

3 牛奶中黃曲霉毒素 M1的限制標準

歐盟牛奶中黃曲霉毒素 M1的含量≤0.05mg/L 或 50ppt。我國牛奶中黃曲霉毒素 M1的國家規(guī)定為≤0.5μg/kg。由此可見，我國牛奶中普遍含有黃曲霉毒素 M1的數(shù)值較大，這需要我們獸醫(yī)工作者進一步研究適當(dāng)?shù)姆椒ń档臀覈Ｄ讨悬S曲霉毒素 M1的含量。

4 黃曲霉毒素 M1的檢測方法

黃曲霉毒素 M1的檢測方法有很多種，有薄層色譜法、高效液相色譜法、酶聯(lián)免疫法、熒光光度法等。

4.1 酶聯(lián)免疫法

酶聯(lián)免疫法測定黃曲霉毒素 M1的基礎(chǔ)是抗原抗體反應(yīng)。首先微孔板包被具有特異性的單克隆抗體。加入黃曲霉毒素標準、樣品溶液，加入酶標記物，加入顯色劑，加入反應(yīng)停止液后使顏色由藍轉(zhuǎn)變?yōu)辄S色。在 450nm 處讀取數(shù)據(jù)。酶聯(lián)免疫法是檢測黃曲霉毒素 M1最常用的方法，該法具有實際操作較為簡單、整體實驗耗時較短、測定結(jié)果較為準確的優(yōu)點，經(jīng)常作為半定量實驗使用，需要準確的數(shù)據(jù)則需要進一步使用更精密的儀器。

4.2 薄層色譜法

本方法常用于半定量測定黃曲霉毒素 M1實驗。黃曲霉毒素M1具有熒光性，可將牛奶樣品提取濃縮后，通過點板、溶劑展開，使黃曲霉毒素 M1在薄層板上分離，設(shè)置薄層色譜掃描儀波長為 365nm 的，會產(chǎn)生藍紫色熒光，據(jù)此來進行結(jié)果的定性定量。薄層色譜法操作較為簡單易行且所用試劑為常用試劑，但是由于牛奶中可能會有其他熒光物質(zhì)，從而產(chǎn)生干擾，造成測定誤差。

4.3 免疫親和層析凈化高效液相色譜法

該方法是將親和柱內(nèi)含有的黃曲霉毒素 M1抗體交聯(lián)在固體支持物上，與黃曲霉毒素 M1發(fā)生鍵合，形成較為穩(wěn)定的復(fù)合體。用水除去雜質(zhì)，然后洗脫吸附的黃曲霉毒素 M1，收集洗脫液。用帶有熒光檢測器的高效液相色譜儀測定洗脫液中黃曲霉毒素 M1含量。該方法采用：25 %乙腈水溶液為流動相，流速為 1 ml/min，采用高壓輸液系統(tǒng)，將流動相泵入色譜柱，在柱內(nèi)分離后，進入檢測器讀取數(shù)據(jù)。該此方法具有較好的靈敏度、特異性，測定結(jié)果準確可靠等優(yōu)點。目前已較為廣泛地應(yīng)用于黃曲霉毒素 M1的測定。該方法具有快速、靈敏度高、準確、自動化程度高等優(yōu)點，但高效液相色譜儀價格較貴且具體操作較為煩瑣。

4.4 液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)法

液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)是在液相色譜的基礎(chǔ)上加入了質(zhì)譜系統(tǒng)，將牛奶中的黃曲霉毒素 M1經(jīng)過濃縮提取后，在液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀上分離、離子化，從而得到質(zhì)譜圖。液質(zhì)聯(lián)用是將色譜與質(zhì)譜優(yōu)勢合二為一，將色譜的高分離能力和質(zhì)譜的高選擇性相結(jié)合，該方法所采用的母離子為 329.0，定量子離子 273.5，定性子離子 259.5，離子化方式 ESI+。流動相為流動相：0.1%甲酸溶液，乙腈-甲醇溶液。流動相流動速度：0.3 mL/min。本方法具有高靈敏度、基質(zhì)效應(yīng)低、響應(yīng)值較高，檢測結(jié)果準確等優(yōu)點。

5 小結(jié)

綜上所述，伴隨著人們對食品安全的認識逐漸提高，人們以廣泛了解牛奶中黃曲霉毒素M1的危害。牛奶一旦含有黃曲霉毒素M1，會嚴重影響百姓的身體健康。因此，檢測牛奶中黃曲霉毒素M1非常重要，在常見的幾種方法中，初篩可以使用酶聯(lián)免疫法，需要精確定量的可以使用高效液相色譜法、液相色譜質(zhì)譜串聯(lián)法等。同時，在牛奶安全生產(chǎn)中黃曲霉毒素M1所帶來的危害、消除黃曲霉毒素 M1的方法、精確檢測其的方法都應(yīng)引起我們獸醫(yī)工作者嚴密的關(guān)注。