白芷有效成分含量測(cè)定及其指紋圖譜研究

席 梅 王 欣 陸 艷

(1 首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京中醫(yī)醫(yī)院，北京，100010； 2 中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院廣安門(mén)醫(yī)院，北京，100053；3 北京大學(xué)藥學(xué)院實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心，北京，100191)

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白芷有效成分含量測(cè)定及其指紋圖譜研究

席 梅1王 欣2陸 艷3

(1 首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京中醫(yī)醫(yī)院，北京，100010； 2 中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院廣安門(mén)醫(yī)院，北京，100053；3 北京大學(xué)藥學(xué)院實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心，北京，100191)

目的：通過(guò)對(duì)白芷指紋圖譜研究，分析判斷不同產(chǎn)地、種屬的白芷藥材質(zhì)量。方法：選取2012年3月北京中醫(yī)醫(yī)院購(gòu)進(jìn)的不同產(chǎn)地的白芷7批，按照種屬不同分為4大組，并未每組內(nèi)按采購(gòu)批次分為7個(gè)小組。采用高效液相色譜法對(duì)其進(jìn)行成分含量的測(cè)定，根據(jù)特征峰的選取原則進(jìn)行白芷藥材HPLC指紋圖譜的建立，同時(shí)對(duì)7批白芷進(jìn)行指紋圖譜的測(cè)定確定4個(gè)峰為共有特征色譜峰并進(jìn)行相似度比較，并判定白芷質(zhì)量。結(jié)果：杭白芷20120305(重慶萬(wàn)州)、滇白芷20120307(云南)為偽品，其余批次品質(zhì)為一般或優(yōu)，其中禹白芷2個(gè)批次品質(zhì)均為優(yōu)，優(yōu)于其他組別的批次。結(jié)論：白芷藥材指紋圖譜的建立可以對(duì)藥材有效成分進(jìn)行精準(zhǔn)測(cè)量，該方法穩(wěn)定性高，重現(xiàn)性好，對(duì)不同產(chǎn)地的白芷品質(zhì)辨識(shí)提供有利的方法，達(dá)到快速、準(zhǔn)確評(píng)價(jià)藥材質(zhì)量的目的，值得推薦。

白芷；有效成分含量測(cè)定；指紋圖譜；特征峰

白芷Angelicadahurica，傘形科植物，在傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)中藥用歷史悠久，其主要功能為解熱、鎮(zhèn)痛以及抗炎等[1]，主要用其干燥根。隨著白芷的藥材植物來(lái)源、生態(tài)環(huán)境等因素的影響，市場(chǎng)上越來(lái)越多的白芷代用品、類(lèi)似品開(kāi)始流通起來(lái)，間接對(duì)使用白芷類(lèi)藥物治療的病患產(chǎn)生不小影響[2]。白芷根據(jù)其變種主要有以下4大類(lèi)可入藥，祁白芷主產(chǎn)于河北，禹白芷主產(chǎn)于河南，杭白芷主產(chǎn)于四川、重慶、浙江等，及滇白芷主產(chǎn)于云南。白芷主要成為為香豆素類(lèi)，其中歐前胡素與異歐前胡素為2種代表性香豆素化合物。目前，建立全面以及系統(tǒng)地控制白芷質(zhì)量的分析方法顯得尤為重要。指紋圖譜質(zhì)量控制模式可以較為綜合地反映藥材中各主要成分及其相對(duì)含量，能更全面地提供質(zhì)量評(píng)價(jià)信息[3]。鑒于此，我們通過(guò)研究對(duì)不同產(chǎn)地白芷中的有效成分進(jìn)行含量測(cè)定及其指紋圖譜的建立，通過(guò)相似度及特征峰比較提供一種藥材品質(zhì)的判斷方法，現(xiàn)總結(jié)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 儀器與試劑 島津LC-10ATVP高效液相色譜儀；島津SPD-10AVP紫外檢測(cè)器；TB328B型電光分析天平(上海天平儀器廠(chǎng))；歐前胡素對(duì)照品來(lái)源于中國(guó)藥品生物制品鑒定所。甲醇為色譜純，水為重蒸水，其余試劑為分析純。

1.1.2 中藥材 白芷藥材由北京大學(xué)藥學(xué)院實(shí)驗(yàn)中心標(biāo)本室提供，經(jīng)鑒定為白芷Angelica dahurica的干燥根。白芷7個(gè)批次根據(jù)種屬不同分為祁白芷、禹白芷、杭白芷、滇白芷，具體產(chǎn)地詳見(jiàn)表1。

表1 不同種屬白芷的批次和產(chǎn)地

1.2 研究方法

1.2.1 供試品溶液制備 將10批次白芷藥材每批選取1 g藥材制成粗粉，過(guò)12目篩，精密稱(chēng)定。于50 mL圓底燒瓶中加入25 mL甲醇溶液超聲提取30 min。取濾液減壓蒸干，并用甲醇溶液精密定容至50 mL容量瓶種，用45 μm微孔濾膜取20 mL，做好批號(hào)待用。

1.2.2 對(duì)照品溶液制備 精密稱(chēng)取歐前胡素對(duì)照品5 mg，異歐前胡素對(duì)照品2 mg，置于50 mL量瓶中，使用甲醇溶解并定容待用。

1.2.3 色譜條件 流速為0.8 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為254 nm，色溫為室溫，每次進(jìn)樣量50 μL。平衡色譜柱時(shí)間為10 min。洗脫總時(shí)間為80 min，流動(dòng)相為甲醇：水，梯度洗脫，甲醇體積百分比從15%增加到90%。

圖1 歐前胡素和異歐前胡素對(duì)照品色譜圖

圖2 白芷高效液相色譜4個(gè)特征指紋峰

1.2.4 方法 將7批次藥材按種屬不同分為祁白芷組、禹白芷組、杭白芷組、滇白芷組4個(gè)組別，每組里每批藥材分別制備供試品溶液進(jìn)行HPLC分析，分析各個(gè)樣品的指紋特征峰及相似度。

選取白芷特征圖譜中指紋峰占總峰面積10%以上的4個(gè)特征峰。詳見(jiàn)圖2。標(biāo)記為1號(hào)、2號(hào)、3號(hào)和4號(hào)峰。比較不同批次種4個(gè)指紋峰的相對(duì)峰面積。

1.3 判斷標(biāo)準(zhǔn) 通過(guò)以下標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行判定[5]：若相似度在0.900以上，則判定為優(yōu)質(zhì)藥材；若相似度在0.800～0.900之間，則判定為藥材質(zhì)量一般；若相似度低于0.800，則判定為偽品。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件分析。數(shù)據(jù)比較采用χ2檢驗(yàn)。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 4個(gè)組別相似度比較 杭白芷20120305(重慶萬(wàn)州)、滇白芷20120307(云南)為偽品，其余批次品質(zhì)為一般或優(yōu)，其中禹白芷2個(gè)批次品質(zhì)均為優(yōu)，優(yōu)于其他組別的批次。

表2 4個(gè)組別各批次相似度及品質(zhì)結(jié)果比較

2.2 4個(gè)組別共有特征峰相對(duì)峰面積比較 與2.1中藥材品質(zhì)相對(duì)應(yīng)，偽品的2個(gè)批次種特征峰面積較小，與其他組別差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，優(yōu)質(zhì)品與一般品特征峰面積差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

表3 2個(gè)組別共有指紋峰相對(duì)峰面積的RSD

3 討論

白芷因其藥材來(lái)源、種屬的不同，采收、炮制的差異，生長(zhǎng)環(huán)境的差異，不同產(chǎn)地的白芷必然存在顯著的差異。白芷根據(jù)其種屬不同可分為四大類(lèi)，因此需要建立起一種有效的質(zhì)量控制方法以區(qū)別不同產(chǎn)品白芷的品質(zhì)。白芷藥材指紋圖譜的建立及檢測(cè)效果顯著，方法穩(wěn)定，具有重復(fù)性，在檢測(cè)白芷質(zhì)量方面有積極作用[8]。目前，由于白芷在藥劑制作上的需求較多，多種多樣的白芷開(kāi)始出現(xiàn)在市場(chǎng)上。杭白芷為白芷商品藥材的主流品種，其數(shù)量約占白芷產(chǎn)量的70%。四大類(lèi)白芷雖然杭白芷產(chǎn)量最大，但是否品質(zhì)最佳，含有效成分較高，這亟待分析[7]。

我們通過(guò)建立完整的白芷藥材高效液相色譜指紋圖譜對(duì)不同產(chǎn)地、種屬的白芷進(jìn)行分析和評(píng)價(jià)，發(fā)現(xiàn)指紋圖譜具有較高的精準(zhǔn)度。這與TabitCE等人[9-10]的報(bào)道相一致，表明指紋圖譜分析方法穩(wěn)定，可靠，能直觀(guān)地反映出白芷的有效成分，符合張慧等人[8]的報(bào)道，表明指紋圖譜檢測(cè)具有見(jiàn)較高的重復(fù)性以及穩(wěn)定性[11-12]。通過(guò)對(duì)特征指紋峰分析及相似度分析，不難看出河南地區(qū)白芷質(zhì)量最佳，其次為河北地區(qū)，雖然杭白芷產(chǎn)量較高，但重慶地區(qū)所產(chǎn)白芷因其有效成分含量遠(yuǎn)低于其他種屬，應(yīng)為偽品，滇白芷也不應(yīng)入藥。

我們認(rèn)為指紋圖譜根據(jù)產(chǎn)地不同，選擇的共有模式結(jié)合系統(tǒng)聚類(lèi)分析結(jié)果，保證了共有模式建立的代表性和科學(xué)性，導(dǎo)致指紋圖譜檢測(cè)結(jié)果清晰可信，為多批次同科屬藥材的分析提供了客觀(guān)科學(xué)的方法。

綜上所述，白芷藥材指紋圖譜的建立可以對(duì)藥材有效成分進(jìn)行精準(zhǔn)測(cè)量，該方法穩(wěn)定性高，重現(xiàn)性好，對(duì)不同產(chǎn)地的白芷品質(zhì)辨識(shí)提供有利的方法，達(dá)到快速、準(zhǔn)確評(píng)價(jià)藥材質(zhì)量的目的，值得推薦。

[1]陸洋，白潔，王玥，等.正交試驗(yàn)結(jié)合藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)優(yōu)選復(fù)方南星止痛膏處方提取工藝[J].中國(guó)中醫(yī)雜志，2013,38(16)：2590-2593.

[2]趙亮，曹紅.白芷有效成分提取工藝的優(yōu)化及其中藥材質(zhì)量研究[J].現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2011,11(14)：2759-2766.

[3]鄭光雅，米小琴，郭沛琳，等.白芷提取物的HPLC指紋圖譜研究[J].華西藥學(xué)雜志，2013,28(4)：398-400.

[4]張翠珍，陳雅民.牽正散治療面癱誤區(qū)探析[J].河北中醫(yī)，2012,34(1)：57-58.

[5]李玲，鄧才富，羅川，等.渝產(chǎn)白芷質(zhì)量綜合分析和評(píng)價(jià)[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2013,24(10)：2515-2516.

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(2016-08-26收稿 責(zé)任編輯：洪志強(qiáng))

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Determination of Effective Ingredient and Fingerprint of Dahurian Angelica Root

Xi Mei1,Wang Xin2,Lu Yan3

(1AffiliatedBeijingChineseMedicineHospital,CapitalMedicalUniversity,Beijing100010,China; 2Guang′anmenHospital,ChinaAcademyofChinesemedicalScience,Beijing100053,China; 3ExperimentalTeachingCenterofCollegeofPharmacyatPekingUniversity,Beijing100191,China)

Objective:To determinate the effective ingredient and fingerprint of Dahurian Angelica Root.Methods:A total of 7 batches of Dahurian Angelica Root purchased in May 2012 in our hospital were divided into 4 major groups based on its batches. The effective ingredients were determined by high performance liquid chromatography and established HPLC fingerprint according to the principle of characteristic peaks of Dahurian Angelica Root. The 7 batches were determined by fingerprint and four peaks were determined and compared to evaluate Dahurian Angelica Root′s quality.Results:Hang Dahurian Angelica Root (Chongqing Wanzhou) and Dian Dahurian Angelica Root (Yunnan) were fake the other batches were average or had good quality. Two batches of Yu Dahurian Angelica Root had better quality than the others.Conclusion:The result of the fingerprint detection can make accurate measurement of the effective components of medicinal materials, with high stability, good reproducibility, which is a reliable method on the quality of identification of Dahurian Angelica Root from different habitats. Its rapid and accurate evaluation of the quality of Chinese medicine is recommended.

Dahurian Angelica Root; Content determination; Fingerprint; Characteristic peaks

R284.1

A

10.3969/j.issn.1673-7202.2016.11.060