醬油中環(huán)己基氨基磺酸鈉的測(cè)定

醬油中環(huán)己基氨基磺酸鈉的測(cè)定

仁紹坤 西雙版納州食品藥品檢驗(yàn)所

環(huán)己基氨基磺酸鈉，又稱為甜蜜素，是食品生產(chǎn)中常用的添加劑。甜蜜素是一種常用甜味劑，其甜度是蔗糖的30～40倍。但消費(fèi)者如果經(jīng)常食用甜蜜素含量超標(biāo)的飲料或其他食品，會(huì)因攝入過(guò)量對(duì)人體的肝臟和神經(jīng)系統(tǒng)造成危害，特別是對(duì)代謝排毒的能力較弱的老人、孕婦、小孩，其危害更明顯。

國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)《食品中環(huán)己基氨基磺酸鈉測(cè)定方法》（GB/T 5009.97-2003）中規(guī)定，環(huán)己基氨基磺酸鈉檢測(cè)的第一法為氣相色譜法，其液體試樣處理方法為，稱取20.0 g試樣于100 mL帶塞比色管，置冰浴中。加入5 mL 50 g/L亞硝酸鈉溶液，5 mL 100 g/L硫酸溶液，搖勻，在冰浴中放置30 min，并經(jīng)常搖動(dòng)，然后準(zhǔn)確加入10 mL正己烷，5 g氯化鈉，搖勻后置旋渦混合器上振動(dòng)1 min或振搖80次，待靜止分層后吸出己烷層于10 mL帶塞離心管中進(jìn)行離心分離，將標(biāo)準(zhǔn)提取液進(jìn)樣1～5 μL于氣相色譜儀中。測(cè)得響應(yīng)值，從標(biāo)準(zhǔn)曲線圖中查出相應(yīng)含量。

醬油樣品按國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)方法處理，在冰浴、加入正己烷提取過(guò)程、振搖時(shí)，會(huì)產(chǎn)生大量的泡沫，導(dǎo)致環(huán)己基氨基磺酸鈉轉(zhuǎn)換和提取不徹底，嚴(yán)重影響最終結(jié)果?；诖?，本文研究幾種方法，通過(guò)比較后，選取一種較好的方法處理樣品，消除泡沫的影響，確保檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確。

試劑

正己烷，氯化鈉，50 g/L亞硝酸鈉溶液，100 g/L硫酸溶液，亞鐵氰化鉀，乙酸鋅，43 g/L氫氧化鈉溶液。本標(biāo)準(zhǔn)中所用試劑，凡未指明規(guī)格者，均為分析純（AR），水為一級(jí)水。

環(huán)己基氨基磺酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液（含環(huán)己基氨基磺酸鈉＞98%）：精確稱取1.000 0 g環(huán)己基氨基磺酸鈉，加水溶解并定容至100 mL，環(huán)己基氨基磺酸鈉濃度為10 mg/mL。

儀器

Agilent7890A氣相色譜儀附氫火焰離子化檢測(cè)器，旋渦混合器，離心機(jī)。

色譜條件

色譜柱

Agilent HP-5，30 m×0.32 m× 0.5 μm。

測(cè)定條件

柱溫：70 ℃保持1 min，以5 ℃/min的速率升到100 ℃，以40 ℃ /min的速率升到220 ℃；汽化溫度：180 ℃；檢測(cè)溫度：230 ℃；流速：柱恒流1 mL/min；氫 氣30 mL/min； 空 氣300 mL/min；分流比：15∶1。

測(cè)定方法

標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

準(zhǔn)確吸取1.00 mL環(huán)己基氨基磺酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液于100 mL帶塞比色管中，加水20 mL，置冰浴中，加入5 mL 50g/L亞硝酸鈉溶液，5 mL 100 g/L硫酸溶液，搖勻，在冰浴中放置30 min，并經(jīng)常搖動(dòng)，然后準(zhǔn)確加入10 mL正己烷，5 g氯化鈉，搖勻后置旋渦混合器上振動(dòng)1 min或振搖80次，待靜止分層后吸出己烷層，加入43 g/L NaOH調(diào)節(jié)pH至9～10，于10 mL帶塞離心管中進(jìn)行離心分離，每mL正已烷提取液相當(dāng)1 mg環(huán)己基氨基磺酸鈉，將標(biāo)準(zhǔn)提取液進(jìn)樣1～5 μL于氣相色譜儀中，根據(jù)響應(yīng)值繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

加標(biāo)方式

同時(shí)稱取4份醬油樣品，2份不加標(biāo)直接處理，另外2份分別加入1 mL濃度為10.003 mg/mL的甜蜜素標(biāo)準(zhǔn)溶液后再處理，同時(shí)取標(biāo)準(zhǔn)溶液1 mL按方法步驟處理后測(cè)定相應(yīng)的濃度。

處理方法

離心法去除泡沫

稱取20.0 g試樣于100 mL帶塞比色管，置冰浴中。加入5 mL 50g/L亞硝酸鈉溶液，5 Ml 100 g/L硫酸溶液，搖勻，在冰浴中放置30 min，并經(jīng)常搖動(dòng)，每振動(dòng)1次就離心去除泡沫，然后準(zhǔn)確加入10 mL正己烷，5 g氯化鈉，搖勻后置旋渦混合器上振動(dòng)1 min或振搖80次，每振搖10次就離心去除泡沫，待靜止分層后吸出己烷層于10 mL帶塞離心管中進(jìn)行離心分離，將標(biāo)準(zhǔn)提取液進(jìn)樣1～5 μL于氣相色譜儀中。測(cè)得響應(yīng)值，從標(biāo)準(zhǔn)曲線圖中查出相應(yīng)含量，測(cè)定數(shù)據(jù)見(jiàn)表1。由表1可看出，離心雖可消除泡沫影響，達(dá)到一定的效果，但處理樣品過(guò)程中產(chǎn)生的泡沫仍對(duì)轉(zhuǎn)換和提取有很大的影響，導(dǎo)致回收率偏低，只達(dá)到60.59%。

增大接觸面積，加入沉淀劑消除泡沫的影響

稱取20.0 g試樣于100 mL帶塞錐形瓶中，加入蛋白沉淀劑亞鐵氰化鉀和乙酸鋅后產(chǎn)生黃褐色沉淀，呈糊狀，置冰浴中。加入5 mL 50 g/L亞硝酸鈉溶液，5 mL100 g/L硫酸溶液，搖勻，在冰浴中放置30 min，并經(jīng)常搖動(dòng)，然后準(zhǔn)確加入10 mL正己烷，5 g氯化鈉，搖勻后置旋渦混合器上振動(dòng)1 min或振搖80次，待靜止分層后吸出己烷層于10 mL帶塞離心管中進(jìn)行離心分離，將標(biāo)準(zhǔn)提取液進(jìn)樣1～5 μL于氣相色譜儀中。測(cè)得響應(yīng)值，從標(biāo)準(zhǔn)曲線圖中查出相應(yīng)含量，測(cè)定的數(shù)據(jù)見(jiàn)表2。由表2可看出，加入沉淀劑后，雖消除泡沫的影響，得到透亮溶液，但回收率僅為43.5%，仍未達(dá)到要求，說(shuō)明加入的沉淀劑對(duì)結(jié)果影響很大。

表1 離心法對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響

表2 加入沉淀劑對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響

表3 調(diào)節(jié)pH對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響

減少取樣量，調(diào)節(jié)pH為堿性

稱取5.0～10 g（5～10 mL）樣品于容量瓶中，加水定容至25 mL，搖勻，從容量瓶中準(zhǔn)確吸取20 mL溶液（或全部轉(zhuǎn)移）于250 mL帶塞錐形瓶中，置冰浴中。依次分別加入5 Ml 50 g/L亞硝酸鈉溶液和100 g/L硫酸溶液，調(diào)節(jié)pH為1～2，搖勻后在冰浴中放置30 min，并經(jīng)常搖動(dòng)。分別準(zhǔn)確加入10 mL正己烷，5 g氯化鈉，搖勻后置于渦漩混合器上振動(dòng)1 min，用吸管取出上層正己烷于離心管中，加入43 g/L NaOH調(diào)節(jié)pH為9～10，以4 000 r/min離心10 min，供氣相色譜分析。用此方法處理，再振搖的過(guò)程中幾乎沒(méi)有泡沫的產(chǎn)生，可消除泡沫對(duì)結(jié)果的影響。測(cè)定數(shù)據(jù)見(jiàn)表3。由表3可看出，按5.3方法對(duì)醬油樣品進(jìn)行處理，處理過(guò)程中基本消除泡沫，使轉(zhuǎn)換和提取比較完全，加入堿后使轉(zhuǎn)換的物質(zhì)更加穩(wěn)定，且回收率達(dá)到97.3%，此方法可運(yùn)用于醬油環(huán)己基氨基磺酸鈉的檢測(cè)。

結(jié)論

用離心的方法可去除大部分的泡沫，但處理過(guò)程中產(chǎn)生大量的泡沫減少樣品和液體的接觸面，即使是離心也未能達(dá)到良好的效果，樣品轉(zhuǎn)換不充分，提取不完全，導(dǎo)致測(cè)定結(jié)果不準(zhǔn)確。采用第二種方法，把比色管換為帶賽的錐形瓶中增大接觸面積法，雖有效增大了樣品的接觸面積，可使樣品在處理中轉(zhuǎn)換和提取比較好，可回收率仍然低于50%，說(shuō)明加入的蛋白沉淀劑亞鐵氰化鉀和乙酸鋅雖然能消除泡沫，但影響環(huán)己基氨基磺酸鈉的轉(zhuǎn)換和提取，使測(cè)定結(jié)果嚴(yán)重偏低。采用第三種方法，減少取樣量，調(diào)節(jié)pH為堿性方法測(cè)定醬油中環(huán)己基氨基磺酸鈉，回收率達(dá)到97.3%，可見(jiàn)此法在處理過(guò)程中可有效消除泡沫的干擾，使測(cè)定結(jié)果達(dá)到要求。