不同脂肪源對(duì)紅羅非魚稚魚生長(zhǎng)及肌肉脂肪酸組成的影響

■陳 濤 楊 艷 盧 航 姚錦金

（南寧學(xué)院，廣西南寧 530200）

魚油中含有大量的高度不飽和脂肪酸，特別是含有豐富的人體必需脂肪酸EPA和DHA[1]，是配合飼料理想的脂肪源，但隨著魚油價(jià)格不斷攀升，加之世界魚油產(chǎn)量逐年降低，在配合飼料中全部添加魚油已是不太合理的選擇，所以水產(chǎn)行業(yè)急需魚油的替代品來(lái)降低飼料成本[2-3]。

關(guān)于在飼料中添加不同油脂對(duì)魚體生長(zhǎng)及生理指標(biāo)影響的研究已經(jīng)很多，如鯉魚[4]、異育銀鯽[5]、泥鰍[6]、吉富羅非魚[2-3]、奧尼羅非魚[7]等，但還未見(jiàn)飼料中添加不同油脂對(duì)紅羅非魚稚魚生長(zhǎng)及肌肉脂肪酸組成影響的研究。本研究分別選用豬油、豆油和魚油作為脂肪酸，以紅羅非魚為研究對(duì)象，分析飼料中添加不同油脂對(duì)紅羅非魚稚魚生長(zhǎng)及血清生化指標(biāo)的影響，以確定紅羅非魚稚魚飼料中的適宜脂肪源組合，為其人工飼料配方的設(shè)計(jì)提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)魚及飼養(yǎng)

試驗(yàn)用紅羅非魚稚魚購(gòu)自廣西水產(chǎn)引育種中心，魚體健康、活動(dòng)力強(qiáng)，平均體長(zhǎng)(3.05±0.21)cm，平均體質(zhì)量(0.56±0.04)g。選擇體質(zhì)量基本一致的健康稚魚1 800尾，隨機(jī)分為4組，每組設(shè)3個(gè)重復(fù)。

本試驗(yàn)共60 d。試驗(yàn)魚到目的地后先暫養(yǎng)6 d，饑餓24 h，然后移到室外水泥池（1.2 m×2.7 m×0.8 m）中進(jìn)行飼養(yǎng)，水泥池上方安裝鐵棚防雨防曬。每個(gè)池子為一個(gè)試驗(yàn)組，用自制隔網(wǎng)將每個(gè)池子分成三部分，即每組的三個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)放150尾魚。每天投喂飼料兩次，分別為8：00和18：00，試驗(yàn)初期每天的投喂量為魚體重的4%左右，中段投喂量以投喂20 min內(nèi)吃完為宜。試驗(yàn)期間平均水溫29～32℃，DO(6.05±0.35)mg/l，pH值（7.1±0.5），NH3-N(0.05±0.03)mg/l。

1.2 試驗(yàn)飼料

試驗(yàn)日糧分四組，以魚粉、菜粕、豆粕、α-淀粉、面粉為基礎(chǔ)料，添加一定量的膽堿、復(fù)合維生素、復(fù)合礦物質(zhì)、磷酸二氫鈣、食鹽和黏合劑等，最后加入不同油脂配制而成，四組飼料的油脂添加量分別為1組純豬油(4%)、2組純豆油(4%)、3組豆油(2%)+魚油(2%)、4組純魚油(4%)，不設(shè)對(duì)照組。飼料組成及營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表1。

飼料制作：混合好基礎(chǔ)料、添加劑和油脂后，加水?dāng)嚦蓤F(tuán)狀，放入顆粒飼料機(jī)制成條狀飼料（直徑約1～2 mm），放入恒溫箱中60℃經(jīng)8 h烘干，然后制成長(zhǎng)約2 mm左右的顆粒飼料，于0℃冰柜密封保存。

1.3 取樣與測(cè)定

1.3.1 生長(zhǎng)指標(biāo)及魚體營(yíng)養(yǎng)成分的測(cè)定

試驗(yàn)結(jié)束后，計(jì)算存活率、魚體增重率、飼料系數(shù)、肥滿度和肝體比。同時(shí)測(cè)定肌肉中的水分、粗蛋白（凱氏定氮儀）、粗脂肪（索氏抽提法）及粗灰分（馬弗爐高溫灼燒）含量。

存活率(%)=100×終末尾數(shù)/初始尾數(shù)；

增重率(%)＝100×(末均重-初均重)/初均重；

肥滿度(%)=100×體重/體長(zhǎng)3；

飼料系數(shù)=攝食飼料總量/(末重-初重)；

肝體比(%)=100×肝重/體重。

表1 試驗(yàn)飼料組成及營(yíng)養(yǎng)水平(%)

1.3.2 脂肪酸組成的測(cè)定

試驗(yàn)魚肌肉取樣1～2 g，剪碎，加5 ml Folch液于研缽中研磨組織樣。轉(zhuǎn)至圓底燒瓶，再加約15 ml Folch液，55℃水浴鍋中回流2～2.5 h。過(guò)濾殘?jiān)?，其余液體轉(zhuǎn)至25 ml容量瓶并定容，取10 ml試樣放入小圓瓶中，以氮?dú)獯蹈桑∪庵械闹|(zhì)會(huì)附著于瓶底，加入2 ml氫氧化鉀甲醇溶液（0.5 mol/l），充氮?dú)?，?0℃水浴鍋中振搖約3 min，直至油珠消失，冷卻，加2 ml三氟化硼乙醚溶液（10%），輕輕混勻后充氮?dú)猓?0℃水浴鍋中靜置3 min，冷卻后加2 ml的正庚烷，充分振蕩后靜置5 min，用20～25 ml飽和食鹽水淋洗上層清液。取上清液置于1 ml EP管中，同時(shí)加少量無(wú)水硫酸鈉。上層清液進(jìn)行氣相色譜分析肌肉組織脂肪酸種類及相對(duì)含量。

采用氣相色譜法測(cè)定魚體脂肪酸組成。使用美國(guó)Sigma公司的脂肪酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)品（純度98%以上）。色譜條件：澳大利亞SGE公司的BPX70石英毛細(xì)管柱(60 m×0.25 mm)，采用程序升溫，220～240 ℃；汽化室和FID溫度290℃；氣體流速：載氣為氮?dú)?，流?0 ml/min，H260 ml/min，空氣 600 ml/min，尾吹氣50 ml/min；檢測(cè)器為氫離子火焰檢測(cè)器；進(jìn)樣量l μl，分流比100∶1。標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照并結(jié)合ECLT值對(duì)照定性，峰面積歸一化法定量。飼料中脂肪酸組成的測(cè)定方法與肌肉中脂肪酸的測(cè)定方法相同。

1.4 數(shù)據(jù)處理

原始試驗(yàn)數(shù)據(jù)錄入Excel表格初步整理，用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行單因子方差分析，試驗(yàn)結(jié)果用“平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，采用Duncan's法多重比較分析平均數(shù)的差異顯著性(P＜0.05)。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同油脂飼料對(duì)紅羅非魚稚魚生長(zhǎng)的影響（見(jiàn)表2）

表2 不同油脂飼料對(duì)紅羅非魚稚魚生長(zhǎng)指標(biāo)的影響

由表2可見(jiàn)，各試驗(yàn)組間魚體初重和存活率無(wú)顯著性差異（P＞0.05）。紅羅非魚末均體重和增重率均以2組最高，3組次之，2、3組顯著高于1組(P＜0.05)。飼料系數(shù)以1組最高（1.46），并顯著高于其他三組（P＜0.05）。各組魚肥滿度以1組最低（1.42%），顯著低于其他各組（P＜0.05）。肝體比在各組間無(wú)顯著性差異（P＞0.05）。

2.2 不同油脂飼料對(duì)紅羅非魚稚魚魚體營(yíng)養(yǎng)成分的影響（見(jiàn)表3）

表3 不同油脂飼料對(duì)紅羅非魚稚魚魚體營(yíng)養(yǎng)成分的影響(%)

由表3可知，魚體肌肉各營(yíng)養(yǎng)成分在各組間均無(wú)顯著性差異（P＞0.05）。其中2組水分最高，3組水分最低；肌肉脂肪含量以2組最高（3.87%），1組最低（3.19%）；肌肉蛋白則是4組最高，3組次之，1組最低；肌肉灰分含量2組最高，3組最低。

2.3 不同油脂飼料對(duì)紅羅非魚稚魚肌肉脂肪酸組成的影響（見(jiàn)表4與表5）

表4 各組飼料的脂肪酸組成

2.3.1 紅羅非魚稚魚飼料和組織中脂肪酸組成的相關(guān)性

由表4可知，在紅羅非魚稚魚肌肉組織中共檢測(cè)到了15種脂肪酸，各試驗(yàn)組魚體的肌肉組織中，大類脂肪酸的相對(duì)含量均是∑SFA＞∑MUFA＞∑PUFA＞∑HUFA（僅4組肌肉中是∑MUFA＞∑SFA＞∑PUFA＞∑HUFA）。C16：0是相對(duì)含量最高的SFA，而C18∶1n9是含量最高的MUFA，C18∶2n6是主要的PUFA（4組的主要的PUFA是C18∶2n6和C22∶6n3），主要的HUFA是C22∶6n3。

由表4和表5可知，各組魚體脂肪酸組成和飼料脂肪酸組成有很大的相關(guān)性。1組飼料中的SFA和MUFA相對(duì)含量均明顯高于其它各組，PUFA和HUFA相對(duì)含量均明顯低于其它各組，而1組紅羅非魚肌肉組織中的SFA和MUFA相對(duì)含量亦顯著高于其它各組（P＜0.05），PUFA和HUFA相對(duì)含量亦顯著低于其它各組（P＜0.05）。魚油組飼料中的HUFA相對(duì)含量最高，而魚油組紅羅非魚肌肉中的HUFA相對(duì)含量亦顯著高于其他各組（P＜0.05）。魚油組飼料中的EPA與DHA含量最高，魚油組紅羅非魚肌肉中的EPA與DHA含量亦達(dá)最高，即隨著飼料中EPA和DHA的升高，紅羅非魚肌肉組織中的EPA和DHA也升高。除魚油組飼料外，各組飼料的n-3/n-6均小于1，而魚油組紅羅非魚魚體的n-3/n-6大于1，顯著高于其他各組（其他各組均小于1）。

2.3.2 紅羅非魚飼料和組織中脂肪酸組成的差異性

魚體肌肉組織中的脂肪酸大類與飼料中的相比，肌肉組織中的SFA、MUFA相對(duì)含量高于相應(yīng)飼料中SFA、MUFA的相對(duì)含量，各組紅羅非魚肌肉中的C16∶0、C18∶1n9相對(duì)含量均比飼料中的高，C20∶0含量則均低于相應(yīng)的飼料組。

表5 不同油脂各飼料組紅羅非魚稚魚肌肉脂肪酸組成

各組魚體肌肉組織中的PUFA相對(duì)含量低于相應(yīng)飼料中PUFA的相對(duì)含量，其中肌肉組織中C18∶2n6的相對(duì)含量均比飼料中的低。

值得注意的是，各組魚體肌肉中C22∶6n3(DHA)相對(duì)含量均比相應(yīng)飼料中C22∶6n3的相對(duì)含量高，而3、4兩組的C20∶5n3（EPA）的相對(duì)含量均比相應(yīng)飼料中的低，可能是因?yàn)镃20∶5n3在向C22∶6n3轉(zhuǎn)化。2.3.3 紅羅非魚飼料和肌肉組織中各種脂肪酸相對(duì)含量的比較

比較各組紅羅非魚肌肉的脂肪酸相對(duì)含量，發(fā)現(xiàn)3組的C14∶0含量最高（3.05%），并顯著高于其他三組（P＜0.05）；C16∶0含量在各組中差異不顯著，1組最高（29.01%）；C16∶1n7則是4組最高（4.88%），顯著高于其他三組（P＜0.05），2組最低（1.03%），顯著低于其他三組（P＜0.05），1、3組間差異不顯著（P＞0.05）；C18∶0含量則是1組最高（13.19%），顯著高于其他三組（P＜0.05），4組最低，顯著低于其他三組（P＜0.05），2、3組之間差異不顯著（P＞0.05）；C18∶1n9則是1組最高（40.36%），顯著高于其他三組（P＜0.05）；C18∶2n6為2組最高（21.75%），顯著高于其他三組（P＜0.05），3組顯著高于1、4組（P＜0.05），1、4組之間差異不顯著（P＞0.05）；C18∶3n3為2、3組顯著高于1組（P＜0.05），4組未檢測(cè)到；C20∶4n6為1組（0.52%）顯著低于其他三組（P＜0.05），其他三組之間差異不顯著（P＞0.05）；C20∶5n3在1組中未檢測(cè)到，4組顯著高于2、3組（P＜0.05），3組顯著高于2組（P＜0.05）；C22∶6n3在四個(gè)組之間差異顯著（P＜0.05），4組最高（13.28%）、3組次之（6.85%）、2組第三（1.77%）、1組最低（0.36%）。

比較大類脂肪酸，∑SFA、∑MUFA以1組最高，顯著高于其他三組（P＜0.05）；∑PUFA以1組最低，顯著低于其他三組（P＜0.05）；∑HUFA及∑n-3 PUFA在四組間差異顯著（P＜0.05），其中4組最高，3組次之，2組第三，1組最低；∑n-6 PUFA則以2組最高（22.98%），顯著高于其他三組（P＜0.05），3組次之，顯著高于1、4組（P＜0.05）；n-3/n-6在各組間差異顯著（P＜0.05），4組最高，1組最低。

3 討論

3.1 不同油脂對(duì)紅羅非魚稚魚生長(zhǎng)性能的影響

研究表明，不同油脂對(duì)魚類生長(zhǎng)產(chǎn)生的各種影響主要源于這些油脂的脂肪酸組成不同，而不同魚類對(duì)同一種油脂的消化吸收能力也不同[7]。雍文岳[8]報(bào)道，亞油酸是羅非魚的必需脂肪酸之一，添加富含亞油酸的植物油更有利于羅非魚生長(zhǎng)。李新等[9]對(duì)于吉富羅非魚的油脂營(yíng)養(yǎng)研究亦表明，以植物油特別是菜籽油或豆油為脂肪源飼喂羅非魚，能提高羅非魚的生長(zhǎng)指標(biāo)，同時(shí)不影響其機(jī)體健康。宋益貞等[3]的研究表明，飼料中添加雞油能提高吉富羅非魚的生長(zhǎng)性能及飼料利用率，降低飼料成本。本試驗(yàn)中，各組紅羅非魚肝體比差異不顯著，其中1組最高，可能是豬油增加了肝臟負(fù)擔(dān)，導(dǎo)致肝臟變化；2組及3混合組紅羅非魚的增重率顯著高于1組(P＜0.05)；飼料系數(shù)則是1組顯著高于其他三組(P＜0.05)，魚體肥滿度則是1組顯著低于其他三組(P＜0.05)，而2組最高，表明2組紅羅非魚的生長(zhǎng)性能顯著高于1組和4組(P＜0.05)，魚體健康狀況也較好，說(shuō)明以豆油替代魚油有利于紅羅非魚的生長(zhǎng)。這可能跟大豆油中富含淡水魚類所必需的C18∶2n6和C18∶3n3，能夠滿足魚類對(duì)必需脂肪酸的需要有關(guān)。本試驗(yàn)中3組紅羅非魚也表現(xiàn)出比較好的生長(zhǎng)狀況，這可能是因?yàn)?組魚體各種脂肪酸比例相對(duì)均衡,更有利于紅羅非魚的生長(zhǎng)。

對(duì)于其他品種魚類的研究結(jié)果也說(shuō)明了豆油對(duì)魚類生長(zhǎng)的促進(jìn)作用[10-12]。國(guó)內(nèi)學(xué)者中，劉瑋等[13]在草魚稚魚飼料中分別添加相同含量的魚肝油、豆油、菜油、豬油、混合油等進(jìn)行飼喂試驗(yàn)，結(jié)果表明魚肝油和混合油組草魚生長(zhǎng)性能最好，豆油和豬油組其次，菜油組最差。成永旭等[14]采用不同油脂飼喂草魚，認(rèn)為在增重率方面豆油脂源好于豬油脂源，可能是豆油基本上能滿足草魚對(duì)必需脂肪酸的需求。王吉橋等[15]報(bào)道以豆油作為脂肪源飼喂七彩神仙魚時(shí)獲得最高的魚體特定生長(zhǎng)率。

3.2 不同油脂對(duì)紅羅非魚稚魚肌肉營(yíng)養(yǎng)成分的影響

本試驗(yàn)表明，不同油脂對(duì)紅羅非魚稚魚肌肉營(yíng)養(yǎng)成分均沒(méi)有影響。紅羅非魚稚魚肌肉粗脂肪含量以2組最高，4組其次，1組最低，這與成永旭等[14]的研究結(jié)果剛好相反，成永旭研究得出豬油組草魚肌肉脂肪含量最高，可能是魚的不同種類所致；與馮健等[16]的試驗(yàn)結(jié)果一致，馮健等以豆油為脂肪源飼養(yǎng)的太平洋鮭肌肉脂肪含量稍高于以魚油為脂肪源的肌脂含量，但無(wú)顯著差異。王驥騰等[17]用大豆油、魚油、菜籽油和亞麻油配制的飼料飼喂軍曹魚幼魚，經(jīng)分析得出，魚油組軍曹魚的腹肌蛋白含量均顯著高于3個(gè)植物油組。本試驗(yàn)中，紅羅非魚稚魚肌肉粗蛋白含量則是1組稍低于其他三組，4組最高，3組次之，可能是魚油中豐富的必需脂肪酸提高了飼料營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，促進(jìn)了蛋白質(zhì)積累，有利于魚體生長(zhǎng)。肌肉灰分含量以3組最低，2組最高。

3.3 不同油脂對(duì)紅羅非魚肌肉脂肪酸組成的影響

3.3.1 紅羅非魚稚魚肌肉脂肪酸組成和飼料脂肪酸組成之間的相關(guān)性

魚體獲取必需脂肪酸的重要途徑是從飼料脂肪中攝取，所以飼料中脂肪酸的組成一定會(huì)對(duì)魚體脂肪酸組成產(chǎn)生影響，即魚體脂肪酸組成能反映出飼料脂肪酸組成[18-20]。本試驗(yàn)的結(jié)果也說(shuō)明了這一點(diǎn)，如隨著飼料中大類脂肪酸MUFA、HUFA及各類脂肪酸EPA、DHA、C16∶0、C18∶1n9、C18∶2n6和C18∶3n3等相對(duì)含量的升高，紅羅非魚肌肉組織中相同種類的脂肪酸其含量也相應(yīng)地升高。魚體中C18：0及SFA的相對(duì)含量雖然不是完全隨著飼料的變化而變化，但變化的大體趨勢(shì)相同。

3.3.2 紅羅非魚稚魚肌肉脂肪酸組成和飼料脂肪酸組成之間的差異性

本試驗(yàn)中，魚體肌肉中的大類脂肪酸與飼料相比，其SFA、MUFA相對(duì)含量高于相應(yīng)飼料，這與劉飛[21]的結(jié)果略有不同，劉飛使用不同油脂飼料飼喂黃顙魚，結(jié)果表明，魚體肌肉中的SFA相對(duì)含量低于飼料，而MUFA含量則高于飼料，認(rèn)為黃顙魚有將SFA去飽和并轉(zhuǎn)化成MUFA的能力，而紅羅非魚可能不具備這種轉(zhuǎn)化飽和脂肪酸的能力。

王利華等[22]研究，C18∶2n6和C18∶3n3分別是n6和n3系列脂肪酸的前體，在體內(nèi)經(jīng)碳鏈延長(zhǎng)及去飽和過(guò)程，能轉(zhuǎn)化成其它PUFA。本試驗(yàn)中紅羅非魚肌肉中C18∶2n6及C18∶3n3的相對(duì)含量均比飼料中的低，而肌肉DHA的含量比飼料高，可能也發(fā)生了類似的轉(zhuǎn)化；至于各組魚體肌肉DHA相對(duì)含量高于相應(yīng)飼料，而EPA的相對(duì)含量低于相應(yīng)飼料，可能是因?yàn)榧t羅非魚肌肉中的EPA在向DHA轉(zhuǎn)化。

3.3.3 各組紅羅非魚稚魚肌肉中脂肪酸組成的比較

綜合各項(xiàng)生長(zhǎng)指標(biāo)，發(fā)現(xiàn)2組紅羅非魚稚魚生長(zhǎng)性能最好，3組其次，這可能跟2、3組飼料中富含C18：2n6和C18∶3n3有關(guān)，相應(yīng)的2、3組魚體肌肉中亦富含C18∶2n6和C18∶3n3，尤其是肌肉的C18∶2n6相對(duì)含量高達(dá)14.49%～21.75%，顯著高于1、4組。有研究表明，n-6 PUFA其實(shí)是羅非魚正常生長(zhǎng)、繁殖所必需的脂肪酸[23-25]，而當(dāng)飼料中同時(shí)也添加C18∶3n-3時(shí),則羅非魚對(duì)C18∶2n-6的需求量下降[26]。3、4組紅羅非魚稚魚肌肉中富含EPA及DHA，其生長(zhǎng)性能比1組強(qiáng)，但沒(méi)有2組好，說(shuō)明富含HUFA的飼料可能對(duì)魚體生長(zhǎng)有一定的促進(jìn)作用，而富含PUFA的飼料更能促進(jìn)魚體的生長(zhǎng)。實(shí)質(zhì)上羅非魚對(duì)n-6 PUFA脂肪酸的需求量遠(yuǎn)大于n-3 PUFA[24]。關(guān)勇[27]用n-3/n-6為0.30、0.40、0.50、0.60的飼料飼喂吉富羅非魚，認(rèn)為吉富羅非魚飼料中最適n-3/n-6水平為0.50。本試驗(yàn)中各組紅羅非魚稚魚其n-3/n-6范圍為0.06～1.60，其中1組最低，達(dá)0.06，4組最高，為1.60，都不是羅非魚對(duì)n-3/n-6的最適宜要求，只有生長(zhǎng)性能較好的2、3組魚的n-3/n-6分別為0.19和0.74，比較接近0.5的水平。