配對(duì)盒基因2和CD44基因在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)及意義

王肅靜陸香鳳黃炳臣++陳慧峰李建湘蔣軍松

【摘要】目的探討配對(duì)盒基因2（PAX2）和CD44基因在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)及臨床意義。

方法采用免疫組化法（SP）檢測(cè)25例正常子宮內(nèi)膜組織、51例子宮內(nèi)膜癌組織中PAX2與CD44的表達(dá)情況，并結(jié)合臨床病理特征進(jìn)行分析。

結(jié)果PAX2在子宮內(nèi)膜癌陽性表達(dá)顯著少于正常子宮內(nèi)膜組織（P<0.01），其表達(dá)缺失與子宮內(nèi)膜腺癌肌層浸潤深度、病理組織學(xué)分級(jí)有關(guān)（P<0.05）；CD44在子宮內(nèi)膜癌陽性表達(dá)率顯著高于正常子宮內(nèi)膜（P<0.01），CD44在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)與臨床病理特征無顯著相關(guān)性（P>0.05）。

結(jié)論P(yáng)AX2和CD44蛋白的異常表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生相關(guān)，有望成為診斷子宮內(nèi)膜組織早期癌變的有用指標(biāo)。

【關(guān)鍵詞】子宮內(nèi)膜癌；PAX2；CD44；免疫組化

中圖分類號(hào)：R737.33文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：ADOI：10.3969/j.issn.10031383.2016.04.006

子宮內(nèi)膜癌是女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤之一，近年來發(fā)病率逐年上升，其發(fā)生發(fā)展與遺傳、區(qū)域、環(huán)境等諸多因素相關(guān)。配對(duì)盒基因2（Paired box gene2，PAX2）是PAX基因家族的一員，編碼核轉(zhuǎn)錄因子，目前研究發(fā)現(xiàn)，PAX2基因與人類多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后密切相關(guān)。CD44基因是腫瘤干細(xì)胞標(biāo)志物，具有多種功能的活性黏附分子，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖、分化、轉(zhuǎn)移和凋亡。本研究應(yīng)用免疫組織化學(xué)SP法檢測(cè)人正常子宮內(nèi)膜和子宮內(nèi)膜癌中PAX2和CD44表達(dá)情況，并分析其與臨床病理特征的相關(guān)性。

1資料與方法

1.1一般資料

收集河池市人民醫(yī)院病理科2014年1月～2015年12月經(jīng)病理證實(shí)的手術(shù)切除的子宮內(nèi)膜癌存檔蠟塊51例，年齡32～72歲，平均（5051±7.78）歲。根據(jù)國際婦產(chǎn)科聯(lián)合會(huì)（International Federation of Gynecology and Obstetrics，F(xiàn)IGO）標(biāo)準(zhǔn)：Ⅰ期36例，Ⅱ期7例，Ⅲ期6例，Ⅳ期2例；病理組織學(xué)分級(jí)：G1、G2級(jí)39例，G3級(jí)12例；肌層浸潤<1/2者26例，≥1/2者25例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移8例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移43例。另選取同期因其他良性疾病手術(shù)的正常子宮內(nèi)膜患者25例作為對(duì)照組，年齡26～71歲，平均（49.20±11.92）歲。

1.2病例入選和排除標(biāo)準(zhǔn)

入選標(biāo)準(zhǔn)：經(jīng)病理科確診為子宮內(nèi)膜癌患者。排除標(biāo)準(zhǔn)：術(shù)前接受激素治療或放化療的子宮內(nèi)膜癌患者，合并高血壓、糖尿病、高血脂及其他器官惡性腫瘤者。

1.3研究方法

1.3.1所用試劑及檢測(cè)方法

即用型兔抗人PAX2多克隆抗體、即用型鼠抗人CD44單克隆抗體、SP免疫組化試劑盒及DAB顯色劑均購自福州邁新試劑生物技術(shù)開發(fā)公司。采用鏈霉菌抗生物素蛋白過氧化物酶連結(jié)法（SP法）進(jìn)行染色，所有組織均以4 μm切片進(jìn)行染色，染色步驟嚴(yán)格按照試劑盒說明進(jìn)行。用磷酸緩沖液（PBS）代替一抗作陰性對(duì)照，用已知陽性切片作陽性對(duì)照，PAX2陽性表達(dá)定位于細(xì)胞核，呈淡黃、棕黃、棕褐色。CD44陽性主要定位于細(xì)胞膜。

1.3.2結(jié)果評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)

采用半定量計(jì)分方法，根據(jù)染色陽性細(xì)胞占腫瘤細(xì)胞總數(shù)百分比和染色強(qiáng)度相加計(jì)分。在顯微鏡高倍視野下，隨機(jī)選擇5個(gè)視野，每個(gè)視野計(jì)數(shù)100個(gè)腫瘤細(xì)胞，共計(jì)數(shù)500個(gè)細(xì)胞。根據(jù)陽性染色程度計(jì)分：無著色為0分，淡黃色1分，棕黃色2分，棕褐色3分；按陽性細(xì)胞所占腫瘤細(xì)胞百分比評(píng)分：無陽性細(xì)胞為0分，陽性細(xì)胞<25%為1分，陽性細(xì)胞26%～50%為2分，陽性細(xì)胞51%～75%為3分，陽性細(xì)胞>75%為4分。兩項(xiàng)評(píng)分相加<3為陰性，≥3為陽性。

1.3.3觀察項(xiàng)目

對(duì)比觀察PAX2與CD44在正常子宮內(nèi)膜組和子宮內(nèi)膜癌組中的陽性表達(dá)率，并分析子宮內(nèi)膜癌組中PAX2與CD44的表達(dá)情況與臨床病理及二者的相關(guān)性。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

數(shù)據(jù)均采用SPSS 17.0軟件進(jìn)行處理， 計(jì)數(shù)資料以百分率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，兩者之間相關(guān)性分析應(yīng)用Spearman等級(jí)相關(guān)分析，檢驗(yàn)水準(zhǔn)：α=0.05。

2結(jié)果

2.1PAX2、CD44在正常子宮內(nèi)膜組織和子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)

PAX2在正常子宮內(nèi)膜組織中陽性表達(dá)率為80%（20/25），陽性定位于內(nèi)膜腺上皮細(xì)胞核，呈棕黃、棕褐色，同時(shí)亦表達(dá)于內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞的細(xì)胞核（圖1A）；PAX2在子宮內(nèi)膜組中陽性表達(dá)率為43.1%（22/51），癌細(xì)胞核呈淡黃、黃色、棕黃、棕褐色表達(dá)（圖1B）；PAX2在子宮內(nèi)膜癌表達(dá)顯著少于正常子宮內(nèi)膜，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。CD44在正常子宮內(nèi)膜組織中無陽性表達(dá)（0/25），在子宮內(nèi)膜癌中陽性表達(dá)率為62.7%（32/51），陽性定位于細(xì)胞膜（圖1C），與正常子宮內(nèi)膜差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。見表1。

A：增生期正常子宮內(nèi)膜，PAX2在子宮內(nèi)膜腺上皮細(xì)胞核強(qiáng)陽性表達(dá)，SP法；B：高分化子宮內(nèi)膜腺癌組織，PAX2在腫瘤性腺上皮細(xì)胞弱陽性表達(dá)，SP法；C：CD44在高分化子宮內(nèi)膜癌組織腺體細(xì)胞表面陽性表達(dá)，SP法。

2.2PAX2和CD44的表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系

在51例子宮內(nèi)膜癌組織中PAX2的陽性表達(dá)率為43.1%。PAX2的表達(dá)與腫瘤的病理組織學(xué)分級(jí)、肌層浸潤深度有關(guān)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期、年齡無關(guān)（P>0.05）；CD44的陽性表達(dá)率為62.7%， CD44表達(dá)與臨床病理參數(shù)均無明顯相關(guān)性（P>0.05）。見表2。

2.3PAX2與CD44在子宮內(nèi)膜癌中表達(dá)的相關(guān)性

在CD44陽性表達(dá)的子宮內(nèi)膜癌組織中有13例PAX2陽性表達(dá)，而在CD44陰性的癌組織中，有9例PAX2陽性表達(dá)，CD44陽性而PAX2陰性的19例，CD44和PAX2均陰性10例。Spearman 等級(jí)相關(guān)分析，二者表達(dá)無相關(guān)性（r=0.066，P=0.646）。

3討論

PAX2基因位于染色體10q24，包含12個(gè)外顯子，PAX2編碼的轉(zhuǎn)錄因子含有一個(gè)DNA 結(jié)合域和一個(gè)反式激活域，與其他核蛋白相互作用，PAX2可通過WT1、CJun等信號(hào)途徑的調(diào)控影響細(xì)胞增殖、分化，其表達(dá)異常參與人類乳腺癌、甲狀腺癌、腎癌、膀胱癌、卵巢癌等腫瘤的發(fā)生發(fā)展[1～2]。Rabban 等[3]通過對(duì)宮頸內(nèi)的腺體和中腎管殘留增殖的腺體研究發(fā)現(xiàn)，PAX2表達(dá)越強(qiáng)，診斷惡性的可能性就越小，提示其表達(dá)缺失與子宮頸癌的發(fā)生有關(guān)。而PAX2在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)結(jié)果不一，袁雪芹等[4]研究發(fā)現(xiàn)，PAX2在增殖期、子宮內(nèi)膜增生癥和子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)缺失率逐步增高，劉淑玉等[5]研究結(jié)果則相反，認(rèn)為PAX2在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)顯著高于子宮內(nèi)膜不典型增生和正常子宮內(nèi)膜。本研究發(fā)現(xiàn)PAX2在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)明顯少于其在正常子宮內(nèi)膜中的表達(dá)，與Allison[6]及張彤等人[7]的研究結(jié)果一致。進(jìn)一步觀察發(fā)現(xiàn)，PAX2在正常子宮內(nèi)膜功能層、基底層腺上皮細(xì)胞核及子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞核、平滑肌細(xì)胞核均呈陽性表達(dá)，推測(cè)PAX2在正常的子宮內(nèi)膜組織陽性表達(dá)可能與子宮內(nèi)膜具有不斷的增生修復(fù)有關(guān)。PAX2在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)缺失提示其參與子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生，其機(jī)制可能為子宮內(nèi)膜是苗勒器官源性組織，PAX2在維持苗勒器官發(fā)育成熟過程至關(guān)重要，子宮內(nèi)膜又具有周期性脫落、再生修復(fù)的特征，需要PAX2誘導(dǎo)調(diào)控，PAX2的表達(dá)缺失導(dǎo)致正常子宮內(nèi)膜生長、分化的調(diào)控的異常而導(dǎo)致癌的發(fā)生。本研究還發(fā)現(xiàn)，PAX2在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)隨著浸潤肌層深度的加深而表達(dá)顯著減少，且在低分化癌組中的表達(dá)缺失顯著高于中高分化腺癌組，提示PAX2表達(dá)缺失可能參與子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生、分化、侵襲和轉(zhuǎn)移，檢測(cè)PAX2在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)，有可能成為子宮內(nèi)膜癌預(yù)后判斷的潛在生物學(xué)指標(biāo)。

腫瘤干細(xì)胞是腫瘤組織中具有自我更新和多向分化潛能的細(xì)胞，與腫瘤自我更新、演進(jìn)、復(fù)發(fā)、耐藥等密切相關(guān)。CD44是一類重要的黏附分子，廣泛分布于細(xì)胞表面，許多正常細(xì)胞表面CD44處于相對(duì)靜止?fàn)顟B(tài)，而許多腫瘤細(xì)胞表面CD44處于高度活化狀態(tài)，是人類多種實(shí)體瘤如胃癌、結(jié)直腸癌、肺癌、前列腺癌等多種腫瘤干細(xì)胞的標(biāo)志物，能與其主要配體HA結(jié)合，介導(dǎo)細(xì)胞與細(xì)胞、細(xì)胞與細(xì)胞基質(zhì)間的相互作用，參與腫瘤細(xì)胞生長、分化、遷移等過程[8～9]。研究發(fā)現(xiàn)，CD44在頭頸部鱗癌、肝母細(xì)胞瘤、卵巢癌、乳腺癌等腫瘤的異常表達(dá)促進(jìn)腫瘤的浸潤、轉(zhuǎn)移[10～12]。本研究結(jié)果顯示，CD44在正常子宮內(nèi)膜不表達(dá)，而子宮內(nèi)膜癌則呈現(xiàn)異常表達(dá)，與Wojciechowski等人[13]研究結(jié)果相似。提示CD44可能參與子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生，由于子宮內(nèi)膜癌尤其是高分化子宮內(nèi)膜癌的早期診斷仍然是病理診斷的難點(diǎn)，CD44可能成為臨床判斷高分化子宮內(nèi)膜癌的有用分子生物學(xué)指標(biāo)。本研究并未發(fā)現(xiàn)CD44在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)與腫瘤分化、浸潤、轉(zhuǎn)移等臨床病理特征有顯著相關(guān)性，是否與本研究樣本量較小有關(guān)，有待進(jìn)一步研究。本研究還發(fā)現(xiàn)，PAX2和CD44在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)無顯著相關(guān)性，提示二者在子宮內(nèi)膜癌中可能通過不同途徑影響子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生發(fā)展。

綜上，聯(lián)合檢測(cè)子宮內(nèi)膜癌中PAX2和CD44的表達(dá)，可作為臨床早期診斷子宮內(nèi)膜癌的參考指標(biāo)，并為臨床治療和預(yù)后判斷提供依據(jù)，其機(jī)制有待深入研究。

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（收稿日期：2016-06-08修回日期：2016-08-31）

（編輯：梁明佩）