酶解雞骨蛋白粉對(duì)大菱鲆幼魚(yú)生長(zhǎng)、體組成和消化酶活性的影響

■胡苗峰 陳京華車景青 于 晨

(青島農(nóng)業(yè)大學(xué)海洋科學(xué)與工程學(xué)院水生動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)與飼料實(shí)驗(yàn)室，山東青島 266109)

魚(yú)粉以其蛋白質(zhì)含量高、必需氨基酸平衡、易被水產(chǎn)動(dòng)物消化吸收等優(yōu)點(diǎn)，一直是水產(chǎn)飼料首選蛋白源。但隨著水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的迅猛發(fā)展，水產(chǎn)飼料的需求量不斷提高，對(duì)魚(yú)粉的需求量也隨之增加，造成了魚(yú)粉資源的供應(yīng)緊張和價(jià)格上漲。為降低飼料成本和緩解魚(yú)粉供需矛盾，選擇新型蛋白源替代魚(yú)粉已成為飼料學(xué)研究的熱點(diǎn)[1]。

2014年中國(guó)專業(yè)型肉雞出欄量為1 345萬(wàn)噸[2]，按雞骨占比15%推算，年產(chǎn)雞骨201萬(wàn)噸。雞骨與豬、牛、羊等家畜骨相比，蛋白質(zhì)和脂肪含量更高，雞骨中粗蛋白質(zhì)和粗脂肪含量分別占鮮骨的16.3%和14.5%，且含有豐富的鈣、磷等礦物元素[3]。雞骨蛋白主要為膠原蛋白，具有穩(wěn)定的三股超螺旋結(jié)構(gòu)，常規(guī)加熱處理不能使其分解。隨著酶制劑工業(yè)發(fā)展，人們發(fā)現(xiàn)用酶解方法可以打開(kāi)膠原蛋白的穩(wěn)定結(jié)構(gòu)，將其分解為可消化的多肽和游離氨基酸[4]。膠原蛋白粉替代飼料中50%魚(yú)粉不影響蛋雞的生長(zhǎng)和產(chǎn)蛋率[5]。但其在水產(chǎn)飼料中應(yīng)用的研究較少，膠原蛋白粉替代飼料中2%和4%的魚(yú)粉，不會(huì)降低異育銀鯽的生長(zhǎng)速度[6]。

大菱鲆(Scophthalmus maximus L.)是北方沿海重要的海水養(yǎng)殖魚(yú)類之一[1]。目前尚未有大菱鲆飼料中添加酶解雞骨蛋白粉的研究報(bào)道。筆者在大菱鲆飼料中添加不同比例的酶解雞骨蛋白粉，研究其對(duì)大菱鲆生長(zhǎng)、魚(yú)體成分和消化酶活力的影響，以期為酶解雞骨蛋白粉在大菱鲆飼料中應(yīng)用提供參考。

1 材料和方法

1.1 飼料配制

共配制5種飼料(表1)，對(duì)照飼料主要以魚(yú)粉和豆粕作為蛋白源，試驗(yàn)飼料以酶解雞骨蛋白粉分別替代10%、20%、40%和60%魚(yú)粉。試驗(yàn)用酶解雞骨蛋白粉由青島貝爾特生物科技有限公司提供，白色粉末狀，水分含量2.8%，粗脂肪含量2.0%，粗蛋白質(zhì)含量82.0%，粗灰分含量13.0%。

表1 試驗(yàn)飼料配方及營(yíng)養(yǎng)成分(干物質(zhì)基礎(chǔ)，%)

1.2 養(yǎng)殖管理

試驗(yàn)于2015年8～11月在青島國(guó)家海洋科學(xué)研究中心循環(huán)水養(yǎng)殖系統(tǒng)中進(jìn)行，實(shí)驗(yàn)容器為300 L的玻璃鋼桶，使用地下海水，水溫(18.0±0.5)℃，鹽度為29.0，水流量為2.0 L/min。大菱鲆幼魚(yú)初始體重為(96.75±0.03)g。設(shè)5個(gè)處理，每處理3個(gè)重復(fù)，每桶25尾魚(yú)。試驗(yàn)周期為10周，每日飽食投喂2次（08:30和17:00）。

1.3 樣品采集

養(yǎng)殖試驗(yàn)結(jié)束后將魚(yú)饑餓24 h。稱量平均體重，測(cè)定平均體長(zhǎng)，計(jì)算肥滿度指數(shù)。每桶隨機(jī)取5尾魚(yú)，解剖后用吸水紙吸干內(nèi)臟水分后稱量?jī)?nèi)臟總重，測(cè)定內(nèi)臟指數(shù)和肝體比，并取其肝臟、胃和腸道，參照陳超等[7-8]的方法測(cè)定消化酶活力。每桶隨機(jī)取5尾魚(yú)測(cè)定魚(yú)體常規(guī)成分。

1.4 計(jì)算分析

大菱鲆的增重率、日攝食率、飼料效率、肥滿度指數(shù)、內(nèi)臟指數(shù)和肝體比按如下公式計(jì)算。

增重率(%)=(Wt-W0)/Wt×100；

日攝食率(%)=Wf/[(Wt+W0)/2]/t×100；

飼料效率=(Wt-W0)/Wf；

肥滿度指數(shù)(%)=Wt/(Lt)3×100；

內(nèi)臟指數(shù)(%)=Wv/Wt×100；

肝體比(%)=(WL/Wt)×100。

式中：Wt——大菱鲆終末平均體重(g)；

W0——大菱鲆初始平均體重(g)；

Wf——攝食飼料干重(g)；

Lt——大菱鲆終末體長(zhǎng)(cm)；

Wv——大菱鲆終末內(nèi)臟重量(g)；

WL——大菱鲆終末肝臟重量(g)；

t——試驗(yàn)天數(shù)(d)。

試驗(yàn)數(shù)據(jù)(平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)誤)用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差分析，當(dāng)差異顯著時(shí)(P＜0.05)，進(jìn)行Duncan's法多重比較。

2 結(jié)果

2.1 酶解雞骨蛋白粉替代魚(yú)粉對(duì)大菱鲆攝食和生長(zhǎng)的影響（見(jiàn)表2）

表2 酶解雞骨蛋白粉替代魚(yú)粉對(duì)大菱鲆增重率、日攝食率和飼料效率的影響(平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)誤)

由表2可知，10周的試驗(yàn)過(guò)程中，大菱鲆未出現(xiàn)死亡，各處理組魚(yú)的成活率為100%。隨著飼料中酶解雞骨蛋白粉替代魚(yú)粉比例的升高，魚(yú)的增重率不斷下降(見(jiàn)表2)，10%替代組魚(yú)的增重率與對(duì)照組差異不顯著(P＞0.05)。與對(duì)照組相比，20%～60%替代組魚(yú)的增重率顯著降低(P＜0.05)，60%替代組魚(yú)的增重率顯著低于10%替代組(P＜0.05)；40%和60%替代組魚(yú)的日攝食率顯著降低(P＜0.05)；20%～60%替代組的飼料效率顯著降低(P＜0.05)。

2.2 酶解雞骨蛋白粉替代魚(yú)粉對(duì)大菱鲆魚(yú)體常規(guī)成分、肥滿度指數(shù)、內(nèi)臟指數(shù)和肝體比的影響（見(jiàn)表3）

表3 酶解雞骨蛋白粉替代魚(yú)粉對(duì)大菱鲆魚(yú)體常規(guī)成分、肥滿度指數(shù)、內(nèi)臟指數(shù)和肝體比的影響(平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)誤)(%)

各替代組與對(duì)照組的魚(yú)體水分含量、粗蛋白質(zhì)含量、粗灰分含量、肥滿度指數(shù)、內(nèi)臟指數(shù)和肝體比無(wú)顯著差異（P＞0.05，見(jiàn)表3）；各替代組顯著降低魚(yú)體的粗脂肪含量（P＜0.05）。

2.3 酶解雞骨蛋白粉替代魚(yú)粉對(duì)大菱鲆肝胃腸蛋白酶、脂肪酶和淀粉酶活力的影響（見(jiàn)表4）

表4 酶解雞骨蛋白粉替代魚(yú)粉對(duì)大菱鲆肝、胃、腸蛋白酶活力，肝脂肪酶活力和肝淀粉酶活力的影響(平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)誤)(U/mg)

從表4中可知，隨著酶解雞骨蛋白粉替代水平的升高，大菱鲆肝、胃、腸的蛋白酶活力均呈下降趨勢(shì)，10%～60%替代組顯著降低肝蛋白酶活力和胃蛋白酶活力(P＜0.05)，20%～60%替代組顯著降低腸蛋白酶活力(P＜0.05)。

隨著酶解雞骨蛋白粉替代水平的升高，大菱鲆肝脂肪酶活力和淀粉酶活力不斷下降。20%～60%替代組魚(yú)的肝脂肪酶活力顯著低于對(duì)照組和10%替代組(P＜0.05)，10%替代組魚(yú)的肝脂肪酶活力與對(duì)照組無(wú)顯著差異(P＞0.05)。10%～60%替代組魚(yú)的肝淀粉酶活力顯著低于對(duì)照組(P＜0.05)，10%替代組魚(yú)的肝淀粉酶活力顯著高于20%～60%替代組(P＜0.05)。

3 討論

3.1 酶解雞骨蛋白粉替代魚(yú)粉對(duì)大菱鲆攝食與生長(zhǎng)的影響

陸生動(dòng)物蛋白源因適口性差和氨基酸不平衡等因素，影響魚(yú)類對(duì)其采食和消化吸收，因此不能完全替代魚(yú)粉。Turker等[9]用雞肉粉替代魚(yú)粉對(duì)黑海菱鲆進(jìn)行飼養(yǎng)試驗(yàn)，結(jié)論為雞肉粉替代魚(yú)粉的最適水平為25%。劉運(yùn)正等[10]報(bào)道酶解動(dòng)物軟骨蛋白粉能替代大菱鲆幼魚(yú)飼料中40%魚(yú)粉。水解膠原蛋白粉替代魚(yú)粉比例超過(guò)8%時(shí)，顯著降低育肥豬的日增重率和飼料轉(zhuǎn)化率[11]。本研究發(fā)現(xiàn)用酶解雞骨蛋白粉替代10%魚(yú)粉不會(huì)顯著降低大菱鲆的增重率和飼料效率，隨著酶解雞骨蛋白粉替代魚(yú)粉含量的升高，魚(yú)體的增重率逐漸降低，這與已有報(bào)道基本一致[6]。本研究中所用酶解雞骨蛋白粉的適口性不如魚(yú)粉，隨著添加量的升高會(huì)顯著降低大菱鲆的日攝食率，進(jìn)而影響魚(yú)的生長(zhǎng)[12-14]。因此，替代比例不高的主要因素是酶解雞骨蛋白粉的適口性差和必需氨基酸不平衡[7]。

3.2 酶解雞骨蛋白粉替代魚(yú)粉對(duì)大菱鲆魚(yú)體常規(guī)成分、肥滿度指數(shù)、內(nèi)臟指數(shù)和肝體比的影響

有關(guān)動(dòng)植物性蛋白源替代魚(yú)粉對(duì)魚(yú)體成分影響的研究尚未有統(tǒng)一的結(jié)論[12-16]。劉運(yùn)正等[10]和董純等[14]研究發(fā)現(xiàn)，用新型復(fù)合動(dòng)植物蛋白源替代大菱鲆飼料中不同水平的魚(yú)粉不影響魚(yú)體常規(guī)成分。梅琳等[12]用蛹肽蛋白替代飼料中的魚(yú)粉，大菱鲆幼魚(yú)水分和灰分含量逐漸升高，粗蛋白質(zhì)和粗脂肪含量逐漸降低，肝體比和肥滿度差異不顯著。徐奇友等[15]報(bào)道肉骨粉替代10%的魚(yú)粉顯著提高虹鱒魚(yú)體粗脂肪含量。復(fù)合動(dòng)物蛋白替代全部的魚(yú)粉，對(duì)西伯利亞鱘的體組成無(wú)顯著影響[16]。本試驗(yàn)中用酶解雞骨蛋白粉替代魚(yú)粉對(duì)魚(yú)體的水分、粗蛋白質(zhì)含量、粗灰分含量無(wú)顯著影響，但顯著降低魚(yú)體的粗脂肪含量，表明隨著酶解雞骨蛋白粉替代魚(yú)粉比例的升高，影響了飼料脂肪的利用和魚(yú)體脂肪的沉積[17-18]。

3.3 酶解雞骨蛋白粉替代魚(yú)粉對(duì)大菱鲆蛋白酶、脂肪酶與淀粉酶活力的影響

鄧君明[19]研究發(fā)現(xiàn)動(dòng)植物復(fù)合蛋白替代魚(yú)粉顯著降低牙鲆消化道的蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶活力。梅琳等[12]發(fā)現(xiàn)隨著蛹肽蛋白替代魚(yú)粉水平的升高，蛋白酶、脂肪酶與淀粉酶活力顯著降低，且淀粉酶活力在75%替代水平時(shí)大幅度降低。目前尚無(wú)酶解雞骨蛋白粉對(duì)魚(yú)類消化酶活力影響的報(bào)道。本試驗(yàn)中隨著酶解雞骨蛋白粉替代魚(yú)粉水平的升高，大菱鲆肝、胃和腸蛋白酶活力、肝脂肪酶活力和淀粉酶活力逐漸降低，消化酶活力的下降趨勢(shì)與大菱鲆生長(zhǎng)速度和飼料效率降低的趨勢(shì)一致，表明隨著酶解雞骨蛋白粉替代魚(yú)粉水平的升高，降低了大菱鲆對(duì)飼料的消化能力，進(jìn)而影響了魚(yú)的生長(zhǎng)和飼料利用率。

4 結(jié)論

酶解雞骨蛋白粉可替代大菱鲆飼料中10%魚(yú)粉而不影響其生長(zhǎng)和飼料效率。