常規(guī)運動生化血液分析儀輔助校準方法的建立

李鵬飛，馮葆欣，張衛(wèi)英，楊星雅

常規(guī)運動生化血液分析儀輔助校準方法的建立

李鵬飛，馮葆欣，張衛(wèi)英，楊星雅

目的：使用運動員定值新鮮血建立常規(guī)血細胞分析儀和血生化分析儀的輔助校準方法。方法：根據(jù)比較實驗的不同，總計采集213例(男155，女58)健將級及以上級別男、女運動員靜脈血，取抗凝新鮮全血和混合血清。1)采血2 h內(nèi)以參加全國室間質(zhì)評工作的DIFF2血細胞分析儀作為參考儀器，給運動員抗凝新鮮全血定值，用新鮮抗凝全血輔助校準GEN.S血細胞分析儀，并通過重復(fù)性檢驗、偏差檢驗和離群值檢驗與參考儀器比對WBC、RBC、HGB、HCT、PLT等5個血細胞參數(shù)；2)取血4 h內(nèi)以參加全國室間質(zhì)評工作的7020生化分析儀作為參比儀器，把7020生化分析儀校準品的量值傳遞給1份混合運動員血清(由10份運動員新鮮血清等量混合而成)，用新鮮混合血清輔助校準MD-100生化分析儀，并通過重復(fù)性檢驗、偏差檢驗和線性范圍檢驗與參比儀器比較血清BUN、CK參數(shù)。結(jié)果：1)使用定值的新鮮抗凝全血輔助校準GEN.S血細胞分析儀后，重復(fù)性比對實驗的5個血細胞參數(shù)的CV%值分別為1.4、0.6、0.4、0.6、2.3，符合測試精密度范圍要求；偏差比對實驗的5個血細胞參數(shù)的偏倚值(靶值±%)分別為-0.4、-0.5、1.8、-0.7、-4.1(男)和1.3、-0.8、1.5、-0.8、-4.2(女)，遠小于血細胞分析儀的最大允許誤差范圍；離群值比對實驗顯示，5個血細胞參數(shù)的異常高值離群值和異常低值離群值與參考儀器相比，沒有出現(xiàn)顯著差異(P>0.01)和偏離正態(tài)分布；2)使用定值的新鮮混合血清輔助校準MD-100血生化分析儀后，重復(fù)性比對實驗的血清BUN、CK參數(shù)的CV%值分別為0.92、1.22，符合測試精密度范圍要求；偏差比對實驗的血清BUN參數(shù)的偏倚值(靶值±%)為0.2，血清CK參數(shù)的偏倚值(靶值±%)為0.9(男)、3.5(女)，遠小于血生化分析儀的最大允許誤差范圍；線性范圍比對實驗顯示，與參考儀器比較，血清CK高值的非線性拐點在1 000 U/L附近。結(jié)論：1)使用控制時間的定值新鮮抗凝全血是建立運動生化常規(guī)血細胞分析儀輔助校準的可靠方法；2)使用控制時間的運動員新鮮混合血清是建立常規(guī)血生化分析儀輔助校準的可靠方法。建議：1)在GEN.S輔助校準后，對高水平運動員血細胞參數(shù)離群值的甄別還需擴大檢測范圍，并結(jié)合個體運動訓(xùn)練背景進行綜合判斷；2)對MD-100輔助校準后，對高水平運動員大于1 000 U/L的血清CK高值的檢測可以采用樣本倍比稀釋使數(shù)值回落在線性范圍內(nèi)的方法。

運動生化；血液分析儀；校準方法

1 研究目的

實驗室常用DIFF2和GEN.S血細胞分析儀檢測運動員血細胞指標反映攜氧和恢復(fù)能力，常用7020和MD-100生化分析儀檢測運動員血清肌酸激酶(CK)和尿素氮(BUN)指標反饋訓(xùn)練負荷強度和負荷量。上述部分儀器有推薦的校準品，但普遍存在有效期短、進口試劑價格昂貴、預(yù)訂和運輸時間長等問題，而且,在非奧運會備戰(zhàn)周期沒有大量測試任務(wù)但又必須保證每日常規(guī)儀器間比對的嚴格質(zhì)量控制時，建立其他輔助的、可信賴的校準方法顯得尤為迫切、重要。

綜合國際血液學(xué)標準化委員會(ICSH)新推薦指南和實驗室前期實踐探索，一般認為，定值新鮮血是生化實驗室校準多系統(tǒng)、多儀器的最佳輔助校準品。因此，本研究擬通過使用運動員定值新鮮血建立常規(guī)運動生化血液分析儀的輔助校準方法。

2 研究對象與方法

2.1 研究對象

健將級及以上級別運動員，男155人，年齡23±3歲，身高176±4.28 cm，體重71±5.10 kg。女58人，年齡21±3歲，身高166.5±2.69 cm，體重61.4±4.98 kg(由于測試參數(shù)不同，各實驗的統(tǒng)計樣本量并不完全一致)。

2.2 實驗方法

2.2.1 儀器

貝克曼庫爾特公司DIFF2血細胞分析儀、貝克曼庫爾特公司GEN.S血細胞分析儀、日立公司7020生化分析儀、美國MD公司MD-100生化分析儀。

2.2.2 試劑

貝克曼庫爾特4C-ES細胞質(zhì)控品、上海榮盛公司BUN試劑、科華公司CK試劑、羅氏C.F.A.S質(zhì)控及校準品、EDTAK2 4 mL和2 mL真空抗凝管、3ml真空促凝管。

2.2.3 質(zhì)量控制

1.操作規(guī)程

嚴格按照“質(zhì)控和校準品準備、開機前檢查、測試前保養(yǎng)、質(zhì)控和校準、常規(guī)操作、測試后維護、關(guān)機程序”的標準程序進行實驗。

2.測試人員

儀器固定人員，熟練掌握操作流程和評價規(guī)則，實驗中任一校準方法確保為同一人開展取血和上機操作。

3.EQA控制

參比儀器連續(xù)8年獲得衛(wèi)生部臨床檢驗中心組織的室間質(zhì)量評價證書以確保系統(tǒng)誤差可檢驗。

4.時間控制

分為血細胞分析儀的時間控制和血生化分析儀的時間控制。

2.2.4 方法

1.常規(guī)血細胞分析儀輔助校準方法的建立

以參加全國室間質(zhì)評(external quality assessment，EQA)的DIFF2血細胞分析儀作為參考儀器，控制時間內(nèi)給運動員抗凝新鮮全血定值，以新鮮全血輔助校準GEN.S血細胞分析儀，并通過重復(fù)性檢驗、偏差檢驗和離群值檢驗與參考儀器比對白細胞(WBC)、紅細胞(RBC)、血紅蛋白(HGB)、紅細胞壓積(HCT)、血小板(PLT)等5個血細胞參數(shù)。

DIFF2血細胞分析儀的質(zhì)控：選擇貝克曼DIFF2血細胞分析儀作為參考儀器，使用配套貝克曼4C-ES細胞質(zhì)控品進行低、中、高3個水平的室內(nèi)質(zhì)量控制。定期參加衛(wèi)生部臨檢中心的血常規(guī)項目EQA工作，確保儀器測試結(jié)果的精密度。

血細胞分析儀的時間控制：取一份靜脈血4 mL置于EDTAK2真空抗凝管中并混勻，分別于采血后室溫0.5 h、2 h、4 h、6 h、8 h、10 h、12 h在血細胞分析上重復(fù)測定WBC、RBC、HGB、HCT、PLT 5個參數(shù)，每個時間點重復(fù)5次，總計35次。觀察變化規(guī)律并結(jié)合文獻，確定下面血細胞分析儀輔助校準方法的各項各次實驗均控制在采血后2 h內(nèi)完成。

2.常規(guī)血生化分析儀輔助校準方法的建立

以參加全國室間質(zhì)評的7020生化分析儀作為參考儀器，控制時間內(nèi)把7020生化分析儀C.F.A.S校準品的量值傳遞給1份混合運動員血清(由10份運動員新鮮血清等量混合而成)，以此輔助校準MD-100生化分析儀，并通過重復(fù)性檢驗、偏差檢驗和線性范圍檢驗與參考儀器比對血清BUN、CK參數(shù)。

7020生化分析儀的校準及質(zhì)控：按儀器操作程序進行7020生化分析儀的維護、保養(yǎng)工作，開機自檢儀器處于良好狀態(tài)后，采用羅氏公司的C.F.A.S校準品和質(zhì)控品進行儀器的校準、質(zhì)控工作。定期參加衛(wèi)生部臨檢中心的血BUN、CK項目EQA工作，確保儀器測試結(jié)果的精密度。

血生化分析儀的時間控制：在血細胞分析儀時間控制的同時取一份靜脈血3 mL置于真空促凝管中并離心，分別于取血后室溫7個時間點在血生化分析上重復(fù)測定血尿素(BUN)和血肌酸激酶(CK)35次。觀察變化規(guī)律并結(jié)合文獻，確定以下血生化分析儀輔助校準方法的各項、各次實驗均控制在取血后4 h內(nèi)完成。

輔助校準的線性范圍檢驗：以7020測定結(jié)果為橫坐標，MD-100測定結(jié)果為縱坐標做散點圖和直線回歸，對運動員特殊群體高值CK測定結(jié)果進行線性范圍檢驗。

2.2.5 統(tǒng)計方法

3 結(jié)果

3.1 常規(guī)血細胞分析儀輔助校準方法的建立

3.1.1 DIFF2血細胞分析儀參加EQA的結(jié)果

圖1顯示，2013年實驗室DIFF2血細胞分析儀血細胞項目參加室間質(zhì)評的性能評價為滿意和成功。

圖 1 DIFF2血細胞分析儀參加室間質(zhì)評的結(jié)果(2013)示意圖

3.1.2 血細胞分析儀的時間控制

圖2顯示，采血后7個時間點在血細胞分析上重復(fù)測定WBC、RBC、HGB、HCT、PLT 5個參數(shù)，各參數(shù)變化規(guī)律不盡相同。有臨床文獻報道了時間溫度控制對血細胞分析儀檢測結(jié)果的影響并闡述原因，因?qū)嶒炇覘l件迥異各研究結(jié)論不盡相同。由于沒有離心等步驟，以圖2并參考文獻，下文建立血細胞分析儀輔助校準方法的各項各次實驗都嚴格控制在采血后2 h內(nèi)完成。

3.1.3 新鮮抗凝全血重復(fù)性檢驗

DIFF2和輔助校準后的GEN.S測定同一份新鮮抗凝全血的重復(fù)性檢驗結(jié)果見圖3、表1。

圖 2 血細胞分析儀的時間控制結(jié)果曲線圖

圖 3 DIFF2和輔助校準后的GEN.S測定同一份新鮮抗凝全血5項血細胞參數(shù)的比較結(jié)果曲線圖

DIFF2GEN．SX±SDCV%X±SDCV%WBC(×109/L)5．60±0．101．05．70±0．101．4RBC(×1012/L)4．48±0．061．24．53±0．030．6HGB(g/L)140．00±1．000．8145．00±1．000．4HCT(%)42．30±0．601．442．60±0．300．6PLT(×109/L)141．00±4．003．0149．00±3．002．3

血細胞分析儀廠家有規(guī)定的各血細胞參數(shù)精密度值(表2)。圖3、表1的結(jié)果和表2相比，DIFF2和校準后的GEN.S各參數(shù)的變異系數(shù)均在廠家規(guī)定的范圍內(nèi)，表明輔助校準后兩種儀器的測試準確度一致，具備了進行比對驗證的必要條件。另外，PLT參數(shù)由于自動分析過程中受影響因素較多，因此變異系數(shù)范圍變化較大。

3.1.4 男子運動員血細胞各參數(shù)偏差檢驗

DIFF2和輔助校準后的GEN.S測定男子運動員血細胞各參數(shù)的偏差檢驗結(jié)果見圖4～圖8、表3。

表 2 血細胞分析儀各參數(shù)精密度值

3.1.5 女子運動員血細胞各參數(shù)偏差檢驗

DIFF2和輔助校準后的GEN.S測定女子運動員血細胞各參數(shù)的偏差檢驗結(jié)果見圖9～圖13、表4。

血細胞分析儀的美國CLIA'88能力比對檢驗的分析質(zhì)量要求，如表5所示。圖4～圖13、表3、表4的結(jié)果和表5相比，DIFF2和校準后的GEN.S各血細胞參數(shù)的偏差值遠低于規(guī)定的最大允許誤差范圍，表明輔助校準后兩種儀器的測試正確度一致，滿足了比對驗證的質(zhì)量要求。另外，PLT參數(shù)允許范圍變化較大，說明保證不同系列血液分析儀PLT測定結(jié)果一致性具有一定難度。

圖 4 DIFF2和輔助校準后的GEN.S測定男子運動員白細胞的比對結(jié)果柱狀圖

圖 5 DIFF2和輔助校準后的GEN.S測定男子運動員紅細胞的比對結(jié)果柱狀圖

圖 6 DIFF2和輔助校準后的GEN.S測定男子運動員血紅蛋白的比對結(jié)果柱狀圖

圖 7 DIFF2和輔助校準后的GEN.S測定男子運動員紅細胞壓積的比對結(jié)果柱狀圖

圖 8 DIFF2和輔助校準后的GEN.S測定男子運動員血小板的比對結(jié)果

血細胞參數(shù)DIFF2(X±SD)GEN．S(X±SD)偏差%rWBC(×109/L)6．51±1．326．48±1．29-0．40．99RBC(×1012/L)4．95±0．314．93±0．33-0．50．98HGB(g/L)153．00±10．00155．00±9．001．80．97HCT(%)45．90±2．1045．60±2．30-0．70．96PLT(×109/L)222．00±44．00213．00±40．00-4．10．94

圖 9 DIFF2和輔助校準后的GEN.S測定女子運動員白細胞的比對結(jié)果柱狀圖

圖 10 DIFF2和輔助校準后的GEN.S測定女子運動員紅細胞的比對結(jié)果柱狀圖

圖 11 DIFF2和輔助校準后的GEN.S測定女子運動員血紅蛋白的比對結(jié)果柱狀圖

圖 12 DIFF2和輔助校準后的GEN.S測定女子運動員紅細胞壓積的比對結(jié)果柱狀圖

圖 13 DIFF2和輔助校準后的GEN.S測定女子運動員血小板的比對結(jié)果柱狀圖

血細胞參數(shù)DIFF2(X±SD)GEN．S(X±SD)偏差%rWBC(×109/L)5．73±1．285．81±1．301．30．99RBC(×1012/L)4．31±0．284．28±0．27-0．80．98HGB(g/L)131±8133±71．50．97HCT(%)39．9±2．539．6±2．3-0．80．98PLT(×109/L)218±45209±41-4．20．95

表 5 美國CLIA'88能力比對檢驗的分析質(zhì)量要求

3.1.6 運動員5項血細胞參數(shù)離群檢驗

表 6 兩種血細胞分析儀測定運動員5項血細胞參數(shù)的離群值檢驗

3.1.7 小結(jié)

本實驗結(jié)果顯示，采血2 h內(nèi)，使用定值的新鮮抗凝全血輔助校準GEN.S血細胞分析儀后，重復(fù)性比對實驗的5個血細胞參數(shù)的CV%值分別為1.4、0.6、0.4、0.6、2.3，符合測試精密度范圍要求。偏差比對實驗的5個血細胞參數(shù)偏倚值(靶值±%)分別為：男子運動員-0.4、-0.5、1.8、-0.7、-4.1；女子運動員1.3、-0.8、1.5、-0.8、-4.2(女)，遠小于血細胞分析儀的最大允許誤差范圍。離群值比對實驗顯示，5個血細胞參數(shù)的異常高值離群值和異常低值離群值與參考儀器DIFF2相比，沒有出現(xiàn)顯著差異(P>0.01)和偏離正態(tài)分布。

表 7 血細胞參數(shù)的臨床參考區(qū)間

3.2 常規(guī)血生化分析儀輔助校準方法的建立

3.2.1 7020血生化分析儀參加EQA的結(jié)果

圖14顯示，2013年測試中心7020血生化分析儀尿素和肌酸激酶項目參加室間質(zhì)評的性能評價為通過。

圖 14 7020血生化分析儀參加室間質(zhì)評的結(jié)果(2013)示意圖

3.2.2 血生化分析儀的時間控制

圖15顯示，取血后7個時間點在血生化分析上重復(fù)測定BUN/CK參數(shù)，8 h后CK活性呈現(xiàn)明顯下降趨勢。血樣本放置時間和方式對不同生化指標檢測結(jié)果的影響也有大樣本臨床報道和原因分析，雖然測試儀器不同不利于統(tǒng)一評定，但一般傾向于審慎觀點，本文不在此重點討論。由于增加離心等步驟，以圖15并結(jié)合文獻，建立血生化分析儀輔助校準方法的各項、各次實驗都嚴格控制在取血后4 h內(nèi)完成。

3.2.3 新鮮混合血清重復(fù)性檢驗

7020和輔助校準后的MD-100測定同一份新鮮混合血清的重復(fù)性檢驗結(jié)果見圖16、表8。

圖 15 本研究血生化分析儀的時間控制結(jié)果曲線圖

圖 16 7020和輔助校準后的MD-100測定同一份新鮮混合血清BUN、CK的比較結(jié)果曲線圖

7020MD-100X±SDCV%X±SDCV%BUN(mmol/L)6．16±0．060．986．19±0．060．92CK(U/L)164±2．121．29168±2．041．22

血生化分析儀廠家有規(guī)定的血清BUN、CK參數(shù)精密度值(表9)。表8的結(jié)果和表9相比，7020和校準后的MD-100血清BUN、CK的變異系數(shù)均在廠家規(guī)定的范圍內(nèi)，表明輔助校準后兩種儀器的測試準確度一致，具備了進行比對驗證的必要條件。

3.2.4 運動員血清尿素氮偏差檢驗

7020和輔助校準后的MD-100測定運動員血清BUN的偏差檢驗結(jié)果見圖17、表10。

3.2.5 男、女運動員血清肌酸激酶偏差檢驗

7020和輔助校準后的MD-100測定男、女運動員血清CK的偏差檢驗結(jié)果見圖18、圖19和表10。

表 9 血生化分析儀BUN、CK參數(shù)精密度值

圖 17 7020和輔助校準后的MD-100測定運動員血清BUN的比對結(jié)果柱狀圖

7020(X±SD)MD?100(X±SD)偏差%rBUN(mmol/L)5．89±1．575．90±1．610．20．9967CK(U/L，男)485．82±380．06490．19±379．280．90．9981CK(U/L，女)200．31±199．66207．36±200．443．50．9992

圖 18 7020和輔助校準后的MD-100測定男子運動員血清CK的比對結(jié)果柱狀圖

圖 19 7020和輔助校準后的MD-100測定女子運動員血清CK的比對結(jié)果柱狀圖

血生化分析儀的美國CLIA'88能力比對檢驗的分析質(zhì)量要求如表11所示。圖17～圖19、表10的結(jié)果和表11相比，7020和校準后的MD-100 測定血清BUN、CK的偏差值遠低于規(guī)定的最大允許誤差范圍，表明輔助校準后兩種儀器的測試正確度一致，滿足了比對驗證的質(zhì)量要求。

表 11 美國CLIA'88能力比對檢驗的分析質(zhì)量要求

3.2.6 男、女運動員血清肌酸激酶線性范圍檢驗

7020和輔助校準后的MD-100測定男、女運動員血清CK的線性范圍檢驗結(jié)果見圖20、21。血清酶比色法BUN和CK的線性范圍及相關(guān)系數(shù)要求如表12所示。表10的結(jié)果和表12相比，BUN測定范圍在線性范圍內(nèi)，不再作散點圖和線性回歸分析。如圖20、圖21顯示，7020和校準后的MD-100測定運動員血清CK在1 000 U/L左右有偏離線性關(guān)系的趨勢，這可能和CK>1 000 U/L以上的測定數(shù)值例數(shù)較少(男6例，女1例)有關(guān)，但也可初步看出，輔助校準后的MD-100測定CK的線性范圍較窄。

圖 20 7020和輔助校準后的MD-100測定男子運動員血清CK的線性范圍檢驗示意圖

圖 21 7020和輔助校準后的MD-100測定女子運動員血清CK的線性范圍檢驗示意圖

血清參數(shù)線性范圍相關(guān)系數(shù)BUN(mmol/L)0～50．0≥0．990CK(U/L，37℃)0～2000≥0．990

3.2.7 小結(jié)

本實驗結(jié)果顯示，取血4 h內(nèi)，使用賦值的新鮮混合血清輔助校準MD-100血生化分析儀后，重復(fù)性比對實驗的血清BUN、CK參數(shù)的CV%值分別為0.92、1.22，符合測試精密度范圍要求。偏差比對實驗的血清BUN參數(shù)的偏倚值(靶值±%)為0.2，血清CK參數(shù)的偏倚值(靶值±%)為0.9(男)、3.5(女)，遠小于血生化分析儀的最大允許誤差范圍。線性范圍比對實驗顯示，與參考儀器7020相比，血清CK高值的非線性拐點在1 000 U/L附近。

4 討論

運動生化血液分析儀的校準品是用于校準血液分析儀的物質(zhì)，應(yīng)具有穩(wěn)定且可溯源的特點，以保證檢測結(jié)果的正確性，通常使用與儀器配套的商品化校準品。對于校準品定值的來源，應(yīng)由新鮮血經(jīng)參考測量系統(tǒng)傳遞賦值，而且，最好是使用有溯源性的國際公認參考方法標定的健康人新鮮血，或按說明書要求用廠家的配套標準物進行校準，不應(yīng)由前批號的校準品或其他廠商的校準品傳遞。不同廠家或型號不配套的非新鮮血校準物不能混用，更不能用全血質(zhì)控物校準儀器。

4.1 常規(guī)血細胞分析儀輔助校準方法的建立

血細胞分析儀具有操作簡單、測定迅速、重復(fù)性高的特點而得到廣泛應(yīng)用。但有研究表明，在我國血細胞分析儀校準方面存在的問題仍很突出，許多血細胞分析儀因沒有配套校準物，而無法保證測試結(jié)果的準確性。為保證檢驗質(zhì)量，ICSH對血細胞分析儀的考核，在細胞計數(shù)、血紅蛋白測定方面，要評價儀器測試樣本的變異率、可比性和準確性等；在白細胞方面，要評價重復(fù)性、準確性和對異常細胞的靈敏度；而血小板自動化分析過程中受影響因素較多，保證不同血細胞分析儀血小板測試結(jié)果一致相對具有難度。DIFF2血細胞分析儀配套校準品4C-CAL和質(zhì)控品4C-ES，用該儀器定值的新鮮全血可以對其他血細胞分析儀進行輔助校準。

本實驗結(jié)果表明，輔助校準后的血細胞分析儀，WBC、RBC、HGB、HCT、PLT 5個常規(guī)血細胞參數(shù)符合重復(fù)性檢驗、偏差檢驗和離群值檢驗的比對要求，使用控制時間的運動員定值新鮮抗凝全血是建立血細胞分析儀輔助校準的可靠方法。

4.2 常規(guī)血生化分析儀輔助校準方法的建立

檢測準確度是ICSH評價血生化分析儀最重要的性能指標，包含正確度和精密度，由檢測儀器、試劑、校準品等共同組成的檢測系統(tǒng)決定。7020生化分析儀，吸樣、吸試劑、混合、去干擾物、保溫、比色、檢測、結(jié)果計算和報告等實驗操作步驟全部由儀器獨立完成，實現(xiàn)自動化，只需預(yù)先裝入樣品和試劑，通知儀器要檢測的項目即可。而MD-100生化儀，在比色之前的步驟(吸樣、吸試劑、混和)必須由人工完成，由于存有樣品和試劑的流動比色池難以清洗，導(dǎo)致檢測的準確性和精密度可能不如前者高，在測試結(jié)果上可能會產(chǎn)生一定差異。在使用多臺分析設(shè)備的常規(guī)實驗室內(nèi)部，ICSH推薦可指定其中一臺儀器為“校準器”或參比儀器，并用其對人新鮮血樣本進行定值，再利用定值后的人血樣本校準其他儀器，以保證結(jié)果的一致性和溯源性。

7020儀器配套羅氏校準品的組合，測定結(jié)果具有可溯源性，是目前公認較好的血生化檢測系統(tǒng)之一。用該系統(tǒng)量值傳遞后的新鮮血清的結(jié)果再去校準其他檢測系統(tǒng)，從實驗結(jié)果來看，能明顯改善某些酶的測定結(jié)果差異。一般認為，新鮮混合血清是校準系統(tǒng)的最佳校準品。但是，新鮮混合血清作為臨時酶校準品基質(zhì)效應(yīng)雖然最小，但并非完全沒有。特別是多項酶類測定時，由于影響因素眾多，最好在使用前先進行臨時校準品的多項檢驗，避免盲目應(yīng)用影響測定的準確度和正確度。同時在酶類測定時，還應(yīng)充分認識校準品與檢測系統(tǒng)配套的重要性，才能真正獲得滿意的測定結(jié)果。

本實驗結(jié)果表明，輔助校準后的血生化分析儀，BUN和CK兩個常規(guī)運動生化血清參數(shù)符合重復(fù)性檢驗、偏差檢驗和離群值檢驗的比對要求。因此，使用控制時間的運動員定值新鮮混合血清是建立血生化分析儀輔助校準的可靠方法。

5 結(jié)論與建議

從室間質(zhì)評到重復(fù)性檢驗、再到偏差檢驗，完成儀器輔助校準的同時證明了測試數(shù)據(jù)的可溯源性、可比對性。其中，室間質(zhì)評的高性能是輔助校準方法的充分條件；重復(fù)性準確度檢驗的高性能是輔助校準方法的必要條件；而偏差正確度檢驗的高性能滿足了輔助校準方法的質(zhì)量要求；并且離群值和線性范圍檢驗的高性能，滿足了輔助校準方法對于測試運動員特殊群體參數(shù)異常高、低值的質(zhì)量要求。

結(jié)論1：使用控制時間的定值新鮮抗凝全血是建立運動生化常規(guī)血細胞分析儀輔助校準的可靠方法。

結(jié)論2：使用控制時間的運動員新鮮混合血清是建立常規(guī)血生化分析儀輔助校準的可靠方法。

建議1：在GEN.S輔助校準后，對高水平運動員血細胞參數(shù)離群值的甄別還需擴大檢測范圍，并結(jié)合個體運動訓(xùn)練背景進行綜合判斷。

建議2：對MD-100輔助校準后，對高水平運動員大于1 000 U/L的血清CK高值的檢測可以采用樣本倍比稀釋使數(shù)值回落在線性范圍內(nèi)的方法。

[1]段秋林，殷海燕，樊超英，等.新鮮全血標本在多臺血細胞分析儀間室內(nèi)質(zhì)控中的應(yīng)用[J].國際檢驗醫(yī)學(xué)雜志,2010,31(2):187-188.

[2]馮連世,李開剛.運動員機能評定常用生理生化指標測試方法及應(yīng)用[M].北京:人民體育出版社,2002:144-153.

[3]顧國龍,謝智光,梁景云，等.經(jīng)日立-羅氏檢測系統(tǒng)量值傳遞后的新鮮混合血清作臨時酶校準品的可行性[J].現(xiàn)代檢驗醫(yī)學(xué)雜志,2007,22(3):113-114.

[4]黃海燕,李雪宏,張淑，等.抗凝新鮮血在血細胞分析儀校準和比對中的應(yīng)用探討[J].檢驗醫(yī)學(xué)與臨床,2011,8(12):1452-1454.

[5]李鵬飛,馮葆欣,宗丕芳，等.指血與靜脈血BUN、CK3種測試方法的比較實驗研究[J].體育科學(xué),2010,30(1):80-85.

[6]李衛(wèi)寧,吳志.不同生化試劑檢測結(jié)果的比較研究[J].現(xiàn)代檢驗醫(yī)學(xué)雜志,2006,21(2):56-57.

[7]美國醫(yī)療機構(gòu)評審聯(lián)合委員會國際部.臨床實驗室評審標準[M].申子瑜,譯.北京:科學(xué)技術(shù)文獻出版社, 2009:95-100.

[8]彭海維,方宗君,楊容，等.血標本放置時間和方式對9項生化指標檢測結(jié)果的影響[J].中國全科醫(yī)學(xué),2010,13(30):3427-3428.

[9]彭黎明,鄧瑞雪.血細胞自動分析校準的溯源[J].中華檢驗醫(yī)學(xué)雜志,2005,28(5):475.

[10]彭明婷，谷小林，王文麗，等.不同方法校準血液分析儀的結(jié)果比較[J].中華檢驗醫(yī)學(xué)雜志,2000,23(1):37.

[11]任碧瓊,徐飛,蔣衛(wèi)平，等.采用新鮮全血比對控制ADVIA2120五分類血液分析儀質(zhì)量的方法探討[J].重慶醫(yī)學(xué),2011,40(28):2854-2858.

[12]邵大祥.標本保存時間及溫度對血液生化檢測結(jié)果的影響分析[J].國際檢驗醫(yī)學(xué)雜志,2013，34(21)：2896-2997.

[13]王治國. 臨床檢驗質(zhì)量控制技術(shù)[M].2版.北京:人民衛(wèi)生出版社, 2008:263-270.

[14]楊彬,黃繁嬙. 新鮮血生化室間質(zhì)評調(diào)查結(jié)果分析[J].現(xiàn)代檢驗醫(yī)學(xué)雜志, 2002, 17(3):43.

[15]展鳳霞,王謙,楊曉靜,等.新鮮全血代替校準物在多系列血液分析儀上的應(yīng)用[J].臨床檢驗雜志, 2003,21(3):167.

[16]朱文元,劉芹,王莉,等. 抗凝全血標本存放條件對血細胞參數(shù)穩(wěn)定性的影響[J].國際檢驗醫(yī)學(xué)雜志, 2011, 32(4):439-441.

[17]宗丕芳.采用定值新鮮血校準CISF-820血細胞分析儀[J].中國運動醫(yī)學(xué)雜志, 2006, 25(6):703-705.

The Building of an Aided Calibration Method for Routine Sports Biochemistry Blood Analyzers

LI Peng-fei，F(xiàn)ENG Bao-xin，ZHANG Wei-ying，YANG Xing-ya

Objective：To build an aided calibration method for routine hematology analyzers and biochemistry analyzers by fresh blood specimens from athletes.Methods：1) Sample of fresh whole blood from athlete was measured in 2 hours by DIFF2 hematology analyzer,an reference instrument participating the EQA program,then used to calibrate GEN.S hematology analyzer.The RBC,HGB,HCT,MCV and PLT counting of 155 male athletes and 58 female athletes were compared between the two hematology analyzers on repeatability test,bias test and outlier test.2) A pooled serum from balanced mix of ten athletes fresh serum was measured in 4 hours by 7020 biochemistry analyzer,an reference instrument participating the EQA program,then used to calibrate MD-100 biochemistry analyzer.The serum level of BUN & CK of 100 male athletes and 26 female athletes were compared between the two biochemistry analyzers on repeatability test,bias test and linearity range test.Results：1) After the aided calibration for DIFF2 hematology analyzer,the repeatability test showed that the coefficients of variation (CV)% of five hematological parameters were 1.4,0.6,0.4,0.6 and 2.3,beyond the degree of precision.The bias test showed that the bias value of five hematological parameters were respectively 0.4 minus,0.5,1.8,0.7 minus and 4.1 minus in male group and 1.3,0.8,1.5,0.8 minus,4.2 minus in female group，lower than the maximum permissible error.The outlier test showed that there was no significant difference in abnormally low or high value of five hematological parameters between the two hematology analyzers.2) After the aided calibration for MD-100 biochemistry analyzer,the repeatability test showed that the CV% of the serum level of BUN & CK were 0.92 and 1.22,beyond the degree of precision.The bias test showed that the bias value of the serum level of BUN was 0.2,and that of the serum level of CK was respectively 0.9 in male group and 3.5 in female group,lower than the maximum permissible error.The linearity range test showed that inflection point of the serum level of CK was 1000U/L.Conclusion：1) Application of athletes fresh whole blood for aided calibration of hematology analyzers is a reliable method.2) Application of athletes fresh pooled serum for aided calibration of biochemistry analyzers is a reliable method.It is proposed that the calibration method for hematology analyzers may be more helpful for the detecting athlete outliers in consideration of individual training background and that the calibration method for biochemistry analyzers can be more feasible to test the serum level of CK from athletes with sample dilution.

sportsbiochemistry；bloodanalyzer；calibrationmethod

1002-9826(2016)05-0136-10

10.16470/j.csst.201605019

2015-10-19；

2016-06-21

國家體育總局體育科學(xué)研究所基本科研業(yè)務(wù)費項目(基本13-27)。

李鵬飛(1977-)，男，山西晉城人，高級實驗師，碩士，主要研究方向為體育重點實驗室測試,Tel：(010)87182539，E-mail：lipengfei@ciss.cn。

國家體育總局體育科學(xué)研究所，北京 100061 China Institute of Sport Science，Beijing 100061，China.

G804.7

A