HPLC測定痛瀉寧顆粒中芍藥苷的含量

摘要：目的 本實驗為了建立痛瀉寧顆粒中芍藥苷的測定方法。方法 采用高效液相色譜法測定，采用依利特 SinoChrom ODS-BP（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：乙腈-0.1%磷酸（15∶85）；體積流量：1.0 ml·min-1；檢測波長：230 nm；柱溫：25 ℃；進樣量10 μl。結果 芍藥苷進樣量在0.248～2.480 μg呈良好的線性關系（r=0.9998），平均回收率為98.52%，RSD值為1.43%（n=6）。結論 實驗表明本研究方法專屬性強，靈敏度高，簡便、準確、重現(xiàn)性好，可用于痛瀉寧顆粒中芍藥苷的測定。

關鍵詞：痛瀉寧顆粒；芍藥苷；高效液相色譜

Abstract：Objective To establish a method for the determination of paeoniflorin in Tongxiening Granule. Methods The content of paeoniflorin was determined by HPLC，Elite SinoChrom ODS-BP column （250 mm × 4.6 mm， 5 μm） was used with acetonitrile-0.1% orthophosphoric acid （15∶85） as the mobile phase at the flow rate of 1.0 mL·min-1. The detection wavelength was set at 230 nm and the column temperature was 25℃. The injection volume was 10 μl. Results The linear range of paeoniflorin was 0.248～2.480 μg （r=0.999 8） with an average recovery of 98.52% （RSD=1.43%， n=6）. Conclusion The established method is specific， sensitive， simple， accurate， reproducible， and suitable for the quality control of paeoniflorin in Tongxiening Granule.

Key words：Tongxiening granule；Paeoniflorin；HPLC

痛瀉寧顆粒是由白芍、青皮、白術 、薤白四味藥組成的中藥復方制劑，具有柔肝緩急、疏肝行氣、理脾運濕的功效，用于肝氣犯脾所致的腹痛、腹瀉、腹脹、腹部不適等癥，腸易激綜合征（腹瀉型）等見上述證候者。方中白芍為君藥，具有養(yǎng)血調經(jīng)，斂陰止汗，柔肝止痛的功效，用于血虛萎黃，月經(jīng)不調，自汗，盜汗，脅痛，腹痛，四肢攣痛，頭痛眩暈[1]，其主要活性成分是芍藥苷。現(xiàn)代藥理研究表明芍藥苷具有鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛、抗炎、解痙等藥理活性[2]。作者采用HPLC測定了痛瀉寧顆粒中芍藥苷的含量，為建立該制劑完善的質量標準提供依據(jù)。

1儀器與試藥

美國Waters 高效液相色譜儀，512 HPLC 泵，486紫外檢測器，Chromeleon色譜工作站；Sartorius BT 25S電子天平。

芍藥苷對照品（中國藥品食品檢定研究院，批號110726-201236）；痛瀉寧顆粒購自華佗藥房，5 g/袋，批號20141001、20141002、20141003；試劑乙腈（色譜純，F(xiàn)isher chemical），水為純化水，其余試劑均為分析純。

2方法與結果

2.1色譜條件 色譜柱：依利特 SinoChrom ODS-BP（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：乙腈-0.1%磷酸（15∶85）；體積流量：1.0 ml·min-1；檢測波長：230 nm；柱溫：25 ℃；進樣量10 μl。

2.2對照品溶液的制備 精密稱取芍藥苷對照品約6.2 mg，置25 ml量瓶中，用甲醇超聲溶解并加至刻度，搖勻，精密量取1 ml，置10 ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得（每1 ml中含芍藥苷24.8 μg）。

2.3供試品溶液的制備 取痛瀉寧顆粒1.0 g，精密稱定，置于50 ml量瓶中，加甲醇40 ml超聲提取40min，取出，冷卻后用甲醇溶解并加至刻度，搖勻，經(jīng)0.45 μm濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.4陰性對照溶液的制備 取不含白芍的陰性制劑，按供試品溶液的制備項下方法制成陰性溶液。

2.5專屬性試驗 取芍藥苷對照品溶液、痛瀉寧顆粒供試品溶液和陰性對照溶液各10 μl進樣測定，結果在上述色譜條件下，陰性對照無干擾，色譜圖見圖1。

2.6線性關系考察 分別精密吸取0.2480 mg/ml芍藥苷對照品儲備液1.0，2.0，4.0，6.0，8.0，10.0 ml，置10 ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，分別精密吸取10 μl進樣，在選定的色譜條件下進行測定。以芍藥苷進樣量對峰面積進行回歸分析，繪制標準曲線，結果芍藥苷在0.248～2.480 μg呈良好的線性關系?；貧w方程Y=38682X-8792，r=0.999 8。

2.7精密度試驗 精密量取同一份供試品溶液，每次10 μl，連續(xù)進樣6次，芍藥苷峰面積積分值RSD為0.75%，表明儀器精密度良好。

2.8穩(wěn)定性試驗 取同一對照品溶液10 μl，按上述色譜條件分別在0、2、4、8、12、24 h進樣測定6次，測定芍藥苷峰面積，結果RSD 值為1.02%（n=6），表明供試品溶液在24 h內穩(wěn)定。

2.9重現(xiàn)性試驗 取同一批號的供試品6份，依法制成供試品溶液進行測定，計算芍藥苷的質量分數(shù)，其RSD 值為1.08%。

2.10加樣回收率試驗 取痛瀉寧顆粒樣品6 份，每份約1.0 g，精密稱定，分別精密加入芍藥苷對照品0.256 mg，照2.3項下操作，制備供試品溶液，按色譜條件測定含量，計算得芍藥苷的加樣回收率為98.52%，RSD 值為1.43%。

2.11樣品測定 取3個批號的痛瀉寧顆粒樣品各2 份，按2.3制備供試品溶液，分別精密吸取10 μl進樣，按色譜條件測定峰面積，用外標法計算痛瀉寧顆粒中芍藥苷的質量分數(shù)，見表1。

3討論

3.1流動相的選擇 參考了較多研究芍藥苷含量的文獻，有各種流動相，主要包括乙腈-0.1%磷酸（12∶88）、甲醇-水（30∶70）等不同體系[3-6]。通過比較各種流動相對測定的影響，結果采用乙腈-0.1%磷酸（15∶85）作為流動相芍藥苷的峰與雜質峰分離較好，分離度大于1.5，樣品中芍藥苷的色譜峰被有效地分離，其他成分對芍藥苷的測定無干擾。

3.2提取條件的選擇 通過參考各類文獻報道[7-9]對供試品溶液的的制備方法，考察了提取溶劑（甲醇、80%甲醇、60%甲醇、95%乙醇、60%乙醇）和超聲提取時間（20、40、60 min），結果顯示使用甲醇作為溶劑超聲提取40 min得到的芍藥苷峰形好，雜質含量低。

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