DEC1 和HIF—1α在喉咽部鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)及意義

摘要：目的 探討分化型胚胎軟骨發(fā)育基因1（Differentiated embryo–chondrocyte expressed gene 1，DEC1）和低氧誘導(dǎo)因子-1α（hypoxia inducible factor-1α，HIF-1α）在喉咽部鱗狀細(xì)胞癌組織中的表達(dá)及臨床意義。方法 運(yùn)用免疫組織化學(xué)法檢測60例喉咽部鱗癌組織和相應(yīng)癌旁正常黏膜中DEC1和HIF-1α表達(dá)情況，分析它們的臨床意義。結(jié)果 DEC1和HIF-lα在癌中的陽性表達(dá)率分別為88.33%和63.33%，相應(yīng)癌旁正常上皮分別為3.33%和0%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（兩者P<0.05）。DEC1表達(dá)在高與中低分化，Ⅰ+Ⅱ期與Ⅲ+Ⅳ期，有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移間差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（全部P<0.05）且與中低分化、臨床分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)關(guān)系（全部P<0.05）。HIF-lα與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)（P<0.05）。結(jié)論 DEC1和HIF-lα可能參與喉咽部鱗狀細(xì)胞癌的發(fā)生和發(fā)展，并與腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移密切密切相關(guān)。

關(guān)鍵詞：喉咽部鱗狀細(xì)胞癌；分化型胚胎軟骨發(fā)育基因1；低氧誘導(dǎo)因子-1α

中圖分類號：R780.2 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A

喉咽部鱗狀細(xì)胞癌是具有明顯的局部浸潤、容易發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)傾向。研究其侵襲和轉(zhuǎn)移的機(jī)制具有重要臨床意義。DEC1被證實(shí)參與調(diào)控細(xì)胞分化、增殖、凋亡、低氧、免疫應(yīng)答和生物節(jié)律，并且在多種腫瘤的形成和演進(jìn)具有重要作用[1-2]。HIF-1α與細(xì)胞缺氧誘導(dǎo)產(chǎn)生的轉(zhuǎn)錄活化密切相關(guān)，在促進(jìn)腫瘤增殖、轉(zhuǎn)移中具有重要作用[3]。有研究顯示DEC1和HIF-1α具有密切調(diào)節(jié)關(guān)系[4]，目前DEC1和HIF-1α在喉咽部鱗狀細(xì)胞癌中的研究甚少，本文采用免疫組織化學(xué)法檢測DEC1和HIF-1α在60例喉咽部鱗狀細(xì)胞癌的表達(dá)，探討DEC1和HIF-1α在喉咽部鱗狀細(xì)胞癌中的臨床意義。

1 資料與方法

1.1一般資料 60例喉咽部鱗狀細(xì)胞癌及相應(yīng)癌旁正常黏膜石蠟組織，來自廣州市增城區(qū)人民醫(yī)院耳鼻喉科2010年9月～2014年12月期間診治的患者，全部病例結(jié)果病理確診。男性41例，女性19例，年齡38～67歲，年齡≤50歲19例，>50歲41例，高分化23例，中分化31例，低分化6例，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移20例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移40例，根據(jù)WHO臨床分期標(biāo)準(zhǔn)分I期15例，II期22例，III期18例，IV期5例。所有標(biāo)本均來自手術(shù)患者，患者術(shù)前均未進(jìn)行放、化療。組織4%中性緩沖甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋，DEC1和HIF-1α一抗購自美國Sigma，快捷型酶標(biāo)羊抗鼠/兔IgG聚合物，DAB顯色試劑盒，檸檬酸鹽抗原修復(fù)液，PBS粉劑均購自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司。

1.2免疫組織化學(xué) 石蠟組織3 μm厚切片，免疫組織化學(xué)采用EnvisionTM法進(jìn)行檢測DEC1表達(dá)。切片經(jīng)過檸檬酸鹽液高壓鍋抗原修復(fù)，DEC1和HIF-1α分別以1∶500和1∶100濃度稀釋使用，37℃孵育1h，快捷型酶標(biāo)羊抗鼠/兔IgG聚合物孵育15 min，DAB鏡下控色，蘇木素復(fù)染細(xì)胞核，常規(guī)封片。

1.3結(jié)果判斷 DEC1陽性表達(dá)主要定位在細(xì)胞漿，顯示為棕黃色顆粒沉淀。所有結(jié)果由兩位高年資病理醫(yī)師進(jìn)行獨(dú)立雙盲觀察，判斷標(biāo)準(zhǔn)參照文獻(xiàn)[5]。HIF-1α陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)：細(xì)胞核呈棕黃或棕褐色著色，染色評分參照文獻(xiàn)[6]。

1.4統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，DEC1表達(dá)情況與喉咽部鱗狀細(xì)胞癌臨床病理特征的關(guān)系采用Pearson χ2檢驗(yàn)分析，相關(guān)性分析采用Spearman's等級相關(guān)分析，P<0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 DEC1和HIF-1α在喉咽部鱗癌中的表達(dá)DEC1和HIF-1α在60例喉咽部鱗狀細(xì)胞癌中分別有53例和38例陽性表達(dá)，見圖1和圖2，陽性率分別是88.33%和63.33%，DEC1在喉咽部正常黏膜上皮中絕大部分呈陰性表達(dá)，僅有2例呈弱陽性表達(dá)，陽性表達(dá)率3.33%，HIF-1α在正常黏膜上皮全部陰性表達(dá)，DEC1和HIF-1α在癌和正常上皮之間的表達(dá)差異具有統(tǒng)意義（兩者P<0.05）。

2.2 DEC1和HIF-1α與臨床病理參數(shù)的關(guān)系 DEC1陽性表達(dá)率在喉咽部鱗狀細(xì)胞癌高分化與中低分化，Ⅰ+Ⅱ期與Ⅲ+Ⅳ期，有與無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移間差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（全部P<0.05），而與年齡、性別、腫瘤大小間的差異不具有統(tǒng)計學(xué)意義（全部P>0.05），相關(guān)性分析顯示DEC1與中低分化、臨床分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)關(guān)系（全部P<0.05）。HIF-1α與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切正相關(guān)（P<0.05），與年齡、性別、腫瘤大小、臨床分期、分化程度無關(guān)（全部P>0.05）。

3 討論

DEC1蛋白由412個氨基酸組成，通過其磷酸化位點(diǎn)的激活發(fā)揮生理調(diào)節(jié)功能。DEC1在正常組織如肝臟、腸道和軟骨等有廣泛的表達(dá)，在機(jī)體中發(fā)揮著重要的生理功能，例如免疫應(yīng)答、神經(jīng)發(fā)育、生物鐘調(diào)控和細(xì)胞分化等[7]。在腫瘤發(fā)生機(jī)制中，DEC1在不同組織類型和來源的功能有所不同，所起的作用可能存在差異。例如在結(jié)腸癌中DEC1呈高表達(dá)[8]；但在肺癌中，有關(guān)DEC1的表達(dá)的報道存在兩種相反的結(jié) 論[9-10]，這說明DEC1在腫瘤中的作用機(jī)制尚待深入研究。

目前DEC1在喉咽部鱗狀細(xì)胞癌中的研究罕見。本研究結(jié)果顯示DEC1在喉咽部鱗狀細(xì)胞癌的陽性表達(dá)率88.33%，明顯高于癌旁正常黏膜中的3.33%，這提示DEC1表達(dá)與腫瘤的發(fā)生有關(guān)。并且中低分化的陽性表達(dá)明顯高于高分化病例，Ⅲ+Ⅳ期病例表達(dá)明顯高于Ⅰ+Ⅱ期，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移病例的DEC1表達(dá)明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。進(jìn)一步相關(guān)性分析顯示DEC1與中低分化、臨床分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)關(guān)系，DEC1與年齡、性別、腫瘤大小無關(guān)，這些提示DEC1不受性別、年齡和腫瘤大小等影響，而與腫瘤的侵襲、轉(zhuǎn)移能力有關(guān)。

腫瘤的惡性快速增殖往往導(dǎo)致腫瘤局部處于缺氧狀態(tài)， HIF-1α屬于重要的缺氧標(biāo)記物，它多種惡性腫瘤中表達(dá)增高，激活后可以調(diào)控下游多種靶基因的轉(zhuǎn)錄，維持腫瘤細(xì)胞的無氧代謝，促進(jìn)新生血管形成，會促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移[11]。本研究中HIF-1α在癌中的表達(dá)高于正常黏膜上皮，并且與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，提示HIF-1α在喉咽部鱗狀細(xì)胞癌的發(fā)生、侵襲和轉(zhuǎn)移起到重要作用。分析全文可以推測DEC1和HIF-lα可能參與喉咽部鱗狀細(xì)胞癌的發(fā)生和發(fā)展，并與腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移密切密切相關(guān)。進(jìn)一步研究它們在喉咽部鱗狀細(xì)胞癌中的作用及相互關(guān)系，可能對喉咽部鱗狀細(xì)胞癌的防治具有潛在重要價值。

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編輯/肖慧