川東北地區(qū)表面健康人群抗線粒體M2抗體參考范圍調(diào)查

摘要：目的 建立適合川東北地區(qū)表面健康人群抗線粒體M2抗體（AMA-M2）的參考范圍。方法 體格檢查和相關(guān)的實驗室檢查均無異常的表面健康人群共420例，按性別和年齡分組，采用Alegria全自動酶聯(lián)免疫分析儀和配套的檢測試劑以及檢測參數(shù)檢測血清AMA-M2濃度。結(jié)果 AMA-M2檢測系統(tǒng)的批內(nèi)和天間的檢測精密度良好，其他性能參數(shù)符合臨床使用要求。表面健康人群女性組血清AMA-M2濃度為1.90（1.70～4.50）IU/mL，明顯高于男性組的1.85（1.60-2.70）IU/mL（Z=-2.804，P=0.005）；而<50歲年齡組和≥50歲年齡組血清AMA-M2檢測結(jié)果之間無統(tǒng)計學(xué)差異（Z=-0.317，P=0.751）。血清AMA-M2參考范圍在女性組為0～4.45IU/mL，男性組為0～2.50IU/mL。結(jié)論 AMA-M2參考范圍應(yīng)按性別分別設(shè)定，建立一個適合本地區(qū)人群的AMA-M2參考范圍具有重要的臨床應(yīng)用價值。

關(guān)鍵詞：抗線粒體M2抗體；參考范圍；表面健康人群

原發(fā)性膽汁性肝硬化（Primary biliary cirrhosis，PBC）是一種以肝內(nèi)膽小管進(jìn)行性非化膿性炎癥為特征的慢性膽汁淤積性肝臟疾病，隨著疾病的進(jìn)程逐漸出現(xiàn)肝臟纖維化，并最終導(dǎo)致肝硬化和肝衰竭[1，2]。目前，在全球，PBC的總體發(fā)病率為6.7～400/100萬，主要好發(fā)于中年女性，其男女發(fā)病比例約為1：9[3，4]?？咕€粒體M2抗體（AMA-M2）被認(rèn)為是PBC診斷的最特異的標(biāo)志物，存在于90%以上的PBC患者血清中[2]。

1資料與方法

1.1一般資料

1.1.1參加健康體檢者共420例，年齡23～73歲，平均年齡45歲；其中男性246例，女性174例。經(jīng)檢查，均無明顯心血管、肝、腎疾病，無結(jié)締組織病病史的健康人群。實驗室檢測結(jié)果：AST<40 U/L，ALT<40 U/L，ALP<110 U/L，γ-GT<50 U/L。

1.1.2標(biāo)本采集 符合上述要求的人員安靜狀態(tài)下空腹采集靜脈血3mL，2h內(nèi)以離心速度3800rpm/min離心5min后分離得血清。

1.2儀器和試劑 檢測儀器為德國Orgentec公司生產(chǎn)的Alegria全自動酶聯(lián)免疫分析儀，所有配套AMA-M2檢測試劑盒均購自德國Orgentec公司。

1.3方法

1.3.1用含0.2%吐溫20的PBS對采集的標(biāo)本進(jìn)行40稀釋后，采用間接免疫熒光法對稀釋標(biāo)本進(jìn)行檢測。

1.3.2血清AMA-M2檢測 按儀器SOP對待檢標(biāo)本上機檢測。各項檢測參數(shù)均符合生產(chǎn)廠商要求。

1.3.3不精密度實驗 ①選擇低中高三個不同濃度血清在1天內(nèi)分別連續(xù)測定20次，了解批內(nèi)不精密度，用變異系數(shù)（CV）表示；②選擇不同濃度血清5份，各將其分為20份，并置于-80℃低溫冰箱中。每天各取1份置于室溫中，待完全溶解后上機檢測，連續(xù)檢測20d，了解天間不精密度，并粗略估計該檢測系統(tǒng)CV為10%時的AMA-M2最低檢測限。

1.4統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。由于數(shù)據(jù)呈偏態(tài)分布，所以采用中位數(shù)（范圍）表示；不同性別以及不同性別各年齡組織之間比較采用兩組獨立樣本非參數(shù)檢驗（Mann-Whitney U檢驗），P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。參考范圍的建立采用百分位數(shù)法。

2結(jié)果

2.1間接免疫熒光法檢測結(jié)果 420例標(biāo)本運用間接免疫熒光法檢測，其結(jié)果均為1：40陰性。

2.2不精密度檢測

2.2.1批內(nèi)不精密度 AMA-M2高濃度（125.90 IU/mL）、中濃度（22.30 IU/mL）和低濃度（4.70 IU/mL）的批內(nèi)不精密度的CV分別為3.92%、4.86%和6.83%。

2.2.2天間不精密度 AMA-M2濃度分別為1.94 IU/mL、5.10 IU/mL、22.46 IU/mL、82.20 IU/mL和123.96 IU/mL時，天間不精密度的CV分別為11.87%、7.63%、4.99%、4.56%和4.41%（圖1）。由圖1可見，當(dāng)天間不精密度的CV為10%時，Alegria全自動酶聯(lián)免疫分析儀在本實驗室檢測AMA-M2的最低檢測值約為2.00IU/mL。

2.3不同性別表面健康人群血清AMA-M2水平 對246例男性和174例女性血清AMA-M2檢測數(shù)據(jù)進(jìn)行正態(tài)性檢驗，表明兩組數(shù)據(jù)均呈偏態(tài)分布。表面健康人群女性組血清AMA-M2濃度為1.90（1.70-4.50）IU/mL，明顯高于男性組的1.85（1.60-2.70）IU/mL（Z=-2.804，P=0.005），見表1。

2.4不同年齡表面健康人群血清AMA-M2水平 對302例<50歲人群和118例≥50歲人群血清AMA-M2檢測數(shù)據(jù)進(jìn)行正態(tài)性檢驗，表明兩組數(shù)據(jù)均呈偏態(tài)分布。表面健康人群<50歲年齡組血清AMA-M2濃度為1.90（1.70～4.50）IU/mL，與≥50歲年齡組的1.90（1.60～2.10）IU/mL比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（Z=-0.317，P=0.751），見表2。

2.5表面健康人群血清AMA-M2參考范圍 表面健康人群血清AMA-M2含量與性別相關(guān)，與年齡無關(guān)，故分不同性別來建立血清AMA-M2的參考范圍，其95%表面健康人群血清AMA-M2的參考范圍分別為男性：0～2.50 IU/mL，女性：0～4.45 IU/mL。

3討論

美國肝病學(xué)會（AASLD）和歐洲肝病學(xué)會（EASL）均將AMA-M2的存在作為PBC的3個診斷標(biāo)準(zhǔn)之一[5]。許多的研究也同時表明，AMA-M2能在PBC發(fā)病前10年的無癥狀個體中出現(xiàn)。Metcalf等對無癥狀的血清AMA-M2陽性個體進(jìn)行11～24年的隨訪，發(fā)現(xiàn)有76%的人群最終出現(xiàn)了PBC的癥狀[6]。

在本次實驗中，我們首先對標(biāo)本進(jìn)行1：40稀釋后進(jìn)行間接免疫熒光檢測，主要基于兩方面的考慮：①EASL明確提出AMA-M2的熒光強度>1：40是PBC的診斷標(biāo)準(zhǔn)之一；②血清AMA-M2可早于臨床癥狀出現(xiàn)。通過檢測420份標(biāo)本，其間接免疫熒光結(jié)果均為1：40陰性，同時所有標(biāo)本ALP均小于110 U/L，從而最大程度地排除了實驗對象中可能存在無癥狀PBC個體的可能性，保證了實驗對象的可靠性。

本次實驗檢測結(jié)果提示，血清AMA-M2含量與性別相關(guān)，與年齡無關(guān)，故分不同性別來建立血清AMA-M2的參考范圍，并且各組數(shù)據(jù)均呈偏態(tài)分布，同時對于血清AMA-M2含量來說，其升高才具有臨床意義，因此我們在進(jìn)行參考范圍的建立時，采用第95百分位數(shù)作為95%表面健康人群的參考上限。對Alegria檢測系統(tǒng)進(jìn)行批內(nèi)和天間的精密度檢測，試驗結(jié)果表明，Alegria全自動酶聯(lián)免疫分析儀檢測血清AMA-M2具有良好的重復(fù)性，當(dāng)天間不精密度的CV為10%時，Alegria全自動酶聯(lián)免疫分析儀在本實驗室檢測AMA-M2的最低檢測值約為2.00 IU/mL，該結(jié)果均低于通過試驗得出的男性和女性的參考范圍上限，表明該檢測系統(tǒng)檢測血清AMA-M2具有較好的靈敏度，完全符合臨床應(yīng)用要求。

綜上所述，AMA-M2對于PBC具有很高的診斷價值，進(jìn)行血清AMA-M2檢測也有利于PBC的早期發(fā)現(xiàn)和干預(yù)。因此對體檢人群進(jìn)行該項目的開展具有較高的應(yīng)用價值。另外，不同實驗室由于實驗方法和實驗條件的差異，不同地區(qū)人群生活環(huán)境和生活習(xí)慣的差異，將有必要建立本實驗室本地區(qū)表面健康人群的參考范圍。

參考文獻(xiàn)：

[1]Saito H，Takahashi A，Abe K，et al.Autoantibodies by line immunoassay in patients with primary biliary cirrhosis[J].Fukushima J Med Sci，2012，58（2）：107-156.

[2]Mantaka A，Koulentaki M，Chlouverakis G，et al.Primary biliary cirrhosis in a genetically homogeneous population：disease associations and familial occurrence rates[J].BMC Gastroenterol，2012，12：110.

[3]Smyk DS，Bogdanos DP，Mytilinaiou MG，et al.Rheumatoid arthritis and primary biliary cirrhosis：cause，consequence，or coincidence[J].Arthritis，2012：391567.

[4]Smyk DS，Rigopoulou EI，Pares A，et al.Sex differences associated with primary biliary cirrhosis[J].Clin Dev Immunol，2012，2012：610504.

[5]Lindor KD，Gershwin ME，Poupon R，et al.American Association for study of Liver Disease.Primary biliary cirrhosis[J].Hepatology，2009，50：291-308.

[6]Metcalf JV，Mitchison HC，Palmer JM，et al.Natural history of early primary biliary cirrhosis[J].Lancet，1996，348（9039）：1399-1402.

編輯/丁一