人胃癌組織Ki—67蛋白的表達(dá)與患者預(yù)后的關(guān)系

摘要：目的 探討Ki-67的表達(dá)與胃癌臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系。方法 采用免疫組織化學(xué)技術(shù)，檢測(cè)326例胃腺癌組織及相應(yīng)326例正常胃粘膜組織中Ki-67蛋白的表達(dá)情況，應(yīng)用χ2檢驗(yàn)、Kaplan-Meier生存分析及COX回歸分析分析其與患者臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系。結(jié)果 胃癌組織中Ki-67蛋白明顯高于正常胃粘膜組織（P<0.05）。Kaplan-Meier生存分析顯示Ki-67蛋白表達(dá)與胃癌患者的預(yù)后密切相關(guān)（χ2=8.086，P=0.005），COX回歸分析顯示Ki-67為胃癌患者預(yù)后的獨(dú)立因素（P=0.002）。結(jié)論 Ki-67的表達(dá)與胃癌預(yù)后密切相關(guān)，為胃癌患者預(yù)后的獨(dú)立因素。

關(guān)鍵詞：胃癌；Ki-67；臨床病理特征；預(yù)后

胃癌（gastric cancer，GC）為消化道腫瘤中發(fā)病率最高的惡性腫瘤。我國(guó)每年胃癌新發(fā)病例占全世界新發(fā)病例數(shù)的42%，發(fā)病率、死亡率為全球平均水平2倍。Ki-67是較為肯定的與細(xì)胞周期相關(guān)的核增殖標(biāo)志物，僅僅存在于增殖細(xì)胞的細(xì)胞核內(nèi)[1]，其表達(dá)隨細(xì)胞周期的進(jìn)展而增加，為反應(yīng)細(xì)胞增殖活性的重要指標(biāo)，廣泛用于腫瘤細(xì)胞的增殖評(píng)估。

1資料與方法

1.1組織標(biāo)本來源 選取收集2005年3月～2010年3月于安陽(yáng)市腫瘤醫(yī)院接受胃癌根治術(shù)治療的326例胃癌患者的手術(shù)標(biāo)本，入組患者術(shù)前均排除遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，均未接受放化療、免疫治療，術(shù)后均經(jīng)過病理確診。標(biāo)本應(yīng)用多聚甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋，連續(xù)切片，分別用于HE染色及免疫組織化學(xué)染色。正常胃粘膜組織：取自手術(shù)標(biāo)本中距癌組織邊緣5cm以上的手術(shù)切緣，均經(jīng)病理學(xué)證實(shí)為正常的胃粘膜組織。

1.2免疫組化

1.2.1方法 免疫組織化學(xué)方法采用鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶連結(jié)法技術(shù)（streptavidin-perosidase，SP技術(shù)），染色步驟嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行；

1.2.2結(jié)果判定 采用雙評(píng)分半定量積分法，對(duì)Ki-67的免疫組化結(jié)果進(jìn)行分析。以出現(xiàn)棕黃色或棕色顆粒的細(xì)胞作為陽(yáng)性細(xì)胞，Ki-67抗原陽(yáng)性表達(dá)為細(xì)胞核呈棕褐色顆粒，在高倍鏡下（400倍高倍鏡下視野），隨機(jī)選取5個(gè)視野（每個(gè)視野計(jì)數(shù)的細(xì)胞數(shù)不少于200個(gè)）。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 17.0軟件進(jìn)行。免疫組化結(jié)果相關(guān)分析采用χ2檢驗(yàn)。生存根據(jù)Kaplan-Meier方法進(jìn)行分析，采用log-rank檢驗(yàn)（Mantel-Cox）。以α=0.05為顯著性水準(zhǔn)。

2結(jié)果

2.1 Ki-67蛋白在胃癌組織與正常胃粘膜組織中的表達(dá) 應(yīng)用免疫組織化學(xué)技術(shù)（SP）檢測(cè)326例胃癌及相應(yīng)的正常胃黏膜組織中Ki-67蛋白的表達(dá)。結(jié)果顯示，Ki-67蛋白主要表達(dá)于癌細(xì)胞胞核，呈棕黃色顆粒。在326例胃癌組織中，有204例Ki-67表達(dá)陽(yáng)性，陽(yáng)性表達(dá)率為62.57%。顯著高于正常胃黏膜組織（11.96%），胃癌組與正常胃粘膜組Ki-67的陽(yáng)性表達(dá)率有顯著性差異（χ2=178.602，P=0.000）。

2.2 Ki-67與胃癌臨床病理學(xué)的關(guān)系 應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件分別從性別、年齡、TNM分期、組織分化程度和有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等方面分析Ki-67蛋白表達(dá)與胃癌臨床病理學(xué)之間的關(guān)系，進(jìn)一步研究Ki-67蛋白在胃癌發(fā)生發(fā)展過程中的可能作用。

2.3 Ki-67 蛋白表達(dá)與胃癌患者預(yù)后之間的關(guān)系

2.3.1預(yù)后單因素分析 應(yīng)用Kaplan-Meier生存曲線分析Ki-67蛋白表達(dá)與胃癌患者存活時(shí)間之間的關(guān)系。入組的326例胃癌患者均具有完整的隨訪資料，術(shù)后第1年每3個(gè)月隨訪1次，以后每半年隨訪1次。隨訪形式以門診復(fù)查為主，其次為電話方式。隨訪時(shí)間3～87個(gè)月，中位隨訪時(shí)間為36.5個(gè)月。將326例胃癌患者的病理學(xué)資料：腫瘤分化、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及Ki-67蛋白表達(dá)情況進(jìn)行單因素分析，結(jié)果顯示，Ki-67蛋白表達(dá)與胃癌患者的預(yù)后密切相關(guān)（χ2=8.086，P=0.005）。同時(shí)發(fā)現(xiàn)TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤分化程度對(duì)胃癌患者的預(yù)后具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。

2.3.2預(yù)后多因素分析 為進(jìn)一步明確Ki-67蛋白表達(dá)的獨(dú)立性預(yù)后價(jià)值，應(yīng)用COX模型對(duì)單因素分析中有顯著意義的4個(gè)變量進(jìn)行多因素分析，COX回歸分析顯示Ki-67、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及TNM分期為胃癌患者預(yù)后的獨(dú)立因素（P<0.05），而腫瘤分化程度雖然在單因素分析中與胃癌患者預(yù)后相關(guān)，但經(jīng)COX回歸分析，無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，并非影響胃癌患者預(yù)后的獨(dú)立因素。

3討論

Ki-67是較為肯定的與細(xì)胞周期相關(guān)的核增值標(biāo)志物，僅僅存在于增值細(xì)胞的細(xì)胞核內(nèi)[1]，所編碼的基因位于第10號(hào)染色體上，其表達(dá)隨細(xì)胞周期的進(jìn)展而增加，細(xì)胞分裂周期中，G0期不表達(dá)，G1后期開始表達(dá)，S和G2逐漸升高，M期達(dá)到高峰，細(xì)胞分裂結(jié)束后迅速降解消失，為反應(yīng)細(xì)胞增值活性的重要指標(biāo)，廣泛用于腫瘤細(xì)胞的增殖評(píng)估[2]。

進(jìn)一步分析Ki-67蛋白表達(dá)與胃癌患者預(yù)后的關(guān)系。應(yīng)用Kaplan-Meier生存曲線分析Ki-67蛋白表達(dá)與胃癌患者存活時(shí)間之間的關(guān)系。將326例胃癌患者的病理學(xué)資料：腫瘤分化、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及Ki-67蛋白表達(dá)情況進(jìn)行單因素分析，結(jié)果顯示，Ki-67蛋白表達(dá)與胃癌患者的預(yù)后密切相關(guān)（χ2=8.086，P=0.005）。同時(shí)發(fā)現(xiàn)TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤分化程度對(duì)胃癌患者的預(yù)后具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。

參考文獻(xiàn)：

[1]Nowieki M，Ostalska，Nowieka D，Miskowiak B，et al.Prognostic significance of Ki-67 negative blaste cell clone in the high risk group of children treated for acute myeloid leukaemi[J].Folia Histochem Cytobiol，2006，44（1）：49-52.

[2]Gerdes J，Lemke H，Baisch H，Wacker HH，Schwab U，Stein H.Cell cycle analysis of a cell proliferation.associated humannuclear antigen defined by the monoclonal antibody Ki-67[J].J Immunol，1984，133：1710-1715.編輯/丁一