細(xì)胞采集器聯(lián)合液基制片在尿液脫落細(xì)胞學(xué)中的應(yīng)用

摘要：目的 對尿液標(biāo)本作細(xì)胞采集器聯(lián)合液基制片，以提高尿液細(xì)胞學(xué)診斷陽性率。方法 采用一次性細(xì)胞采集器聯(lián)合液基法對60例有活檢對照尿液標(biāo)本制片并與離心沉淀法、單用細(xì)胞采集器法對照。結(jié)果 60例中離心沉淀法檢出陽性數(shù)27例（陽性檢出率45.00%），細(xì)胞采集器法檢出陽性數(shù)38例（陽性檢出率63.33%），細(xì)胞采集器聯(lián)合液基制片法檢出陽性數(shù)52例（陽性檢出率86.67%）。后兩組結(jié)果經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)比較具有差異（P<0.05）。結(jié)論 細(xì)胞采集器聯(lián)合液基制片能在濃縮尿液中的有效細(xì)胞成分后，去除紅細(xì)胞干擾并固定腫瘤細(xì)胞形態(tài)，對提高尿液脫落細(xì)胞學(xué)診斷的陽性率有較大應(yīng)用價(jià)值。

關(guān)鍵詞：細(xì)胞采集器；液基；尿；細(xì)胞學(xué)診斷

中圖分類號：R730.21 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A

尿路上皮性腫瘤為泌尿生殖系最常見的腫瘤，由于膀胱鏡和輸尿管鏡檢查的觀察范圍有限并為有創(chuàng)的檢查，可能會遺漏位于難以窺視部位的腫瘤；影像學(xué)檢查包括超聲、X光、CT和MRI，雖能顯示整個(gè)尿路的情況但不能明確病灶性質(zhì)；腫瘤細(xì)胞代謝旺盛，即使在發(fā)病早期仍可有較多的癌細(xì)胞從病灶表面脫落，尿脫落細(xì)胞學(xué)檢查是篩查泌尿系統(tǒng)腫瘤的一項(xiàng)重要方法，且不受腫瘤部位的限制，作者對60例尿液標(biāo)本作細(xì)胞采集器聯(lián)合液基制片以提高尿液細(xì)胞學(xué)腫瘤的陽性檢出率，現(xiàn)報(bào)告如下：

1 資料與方法

1.1一般資料 收集2012～2014年我院門診和住院患者尿液標(biāo)本60例，其中男43例，女17例；年齡40～82歲，平均年齡64.15歲；所有病例均有不同程度血尿和（或）尿頻、尿痛的癥狀；經(jīng)手術(shù)及膀胱鏡組織病理學(xué)證實(shí)為惡性腫瘤（膀胱：尿路上皮癌29例、低分化癌1例；腎：腎細(xì)胞癌4例、尿路上皮癌15例；輸尿管：尿路上皮癌11例）。

1.2儀器與試劑 北京志恒達(dá)科技公司生產(chǎn)的一次性病變細(xì)胞采集器，液基制片試劑（廈門邁威）。

1.3方法

1.3.1囑患者收集清晨新鮮尿液500ml以上，2h內(nèi)送檢；將每次尿液標(biāo)本分為3份，1份按傳統(tǒng)離心沉淀法制片，1份用細(xì)胞采集器法制片，1份用細(xì)胞采集器聯(lián)合液基制片。

1.3.2離心沉淀法：將20ml標(biāo)本置于離心管中，離心10min（3000r/min），棄上清液，用吸管吸取尿沉渣均勻涂片，潮干后置于95%乙醇固定15min，HE染色，閱片。

1.3.3細(xì)胞采集器法：將采集器的入液管插入200ml尿液，排除管置于大于標(biāo)本量的空容器中進(jìn)行抽吸與排液，反復(fù)多次抽吸排液至全部尿液排空可將直徑>8μm的細(xì)胞滯留于濾膜上，而流體及大部分紅細(xì)胞則被濾過，此時(shí)再順時(shí)針打開濃縮器取出濾過膜涂片，95%乙醇固定15min，HE染色，閱片。

1.3.4聯(lián)合方法：方法與步驟置1.3.3相同，取出濾過膜放入液基保存液中，行液基制片，HE染色，閱片。

2 結(jié)果

2.1 60例尿液脫落細(xì)胞學(xué)結(jié)果 傳統(tǒng)離心法檢出陽性數(shù)27例，陽性檢出率45.00%；細(xì)胞采集器制片法檢出陽性數(shù)38例，陽性檢出率63.33%；聯(lián)合方法檢出陽性數(shù)52例，陽性檢出率86.67%；細(xì)胞采集器聯(lián)合液基制片陽性檢出率高于單用細(xì)胞采集器法，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見表1。

2.2不同方法檢出腫瘤細(xì)胞的形態(tài) ①離心沉淀法：細(xì)胞少而分散，背景不干凈有大量紅細(xì)胞干擾（見圖1）。②細(xì)胞采集器法：細(xì)胞較多且集中，有輕度退變，背景較干凈有少許紅細(xì)胞（見圖2）。③聯(lián)合方法：細(xì)胞多并且分布均勻，背景干凈除腫瘤細(xì)胞外還可見到尿液中的桿菌（見圖3）。

圖1 傳統(tǒng)離心法 HE×10 圖2 細(xì)胞采集器法 HE×10

圖3 聯(lián)合方法 HE×10

3 討論

膀胱癌是泌尿系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤，位居世界腫瘤第7位，發(fā)病率占癌癥總數(shù)的3.2%，男性患者多于女性（男：女約為3.5：1），在60歲以上老年人中高發(fā)[1]，近年來有增加趨勢，且早期診斷比較困難，膀胱鏡檢查為有創(chuàng)的侵入性操作，可能會引起尿路感染及血尿，并且在腎臟及上段輸尿管腫瘤中意義不大。作者通過尿脫落細(xì)胞檢查對60例不同部位的泌尿系統(tǒng)腫瘤的診斷認(rèn)為：若正確留取足量的標(biāo)本，及時(shí)規(guī)范收集細(xì)胞，不僅在膀胱腫瘤還是泌尿系統(tǒng)的其它部位腫瘤中都可顯著提高尿脫落細(xì)胞學(xué)診斷的陽性率。

從三種不同制片方法比較來看：傳統(tǒng)離心沉淀法取量少，特別在血尿的沉淀物涂片中有效細(xì)胞成分不僅少且背景中有大量紅細(xì)胞干擾，容易漏診。細(xì)胞采集器法現(xiàn)開展較成熟[2]，可將送檢的尿液全部濾過，收集送檢尿液中的所有細(xì)胞成分，濾過大量的紅細(xì)胞，彌補(bǔ)了離心沉降法中標(biāo)本浪費(fèi)、細(xì)胞量流失及紅細(xì)胞干擾的不足，但仍有不足之處：①若血尿標(biāo)本中紅細(xì)胞成分較多時(shí)亦可大量停留在濾過膜上影響診斷；②濾過膜較薄，很難將濾過膜上的細(xì)胞全部涂在玻片上；③在涂片的過程中涂片未干立即固定容易掉片，待涂片干燥后固定又易導(dǎo)致細(xì)胞退變影響診斷。細(xì)胞采集器聯(lián)合液基制片法在尿液細(xì)胞學(xué)中體現(xiàn)出優(yōu)越性，它建立在細(xì)胞采集器法基礎(chǔ)上將送檢尿液中所有有效細(xì)胞成分收集在濾過膜上，再通過液基制片的方法將濾過膜上的紅細(xì)胞去除，使有效細(xì)胞成分保存并使細(xì)胞在液體中固定避免空氣干燥造成的細(xì)胞退變[3]，并且液基制片使細(xì)胞在涂片中分布集中、均勻、無重疊、遮擋，縮小了閱片的范圍，節(jié)省了閱片時(shí)間，減少漏診，提高工作效率。

提高尿液脫離細(xì)胞學(xué)檢查的陽性檢出率，除了制片方法的選擇外還應(yīng)注意以下幾點(diǎn)：①因?yàn)闊o痛性血尿是膀胱癌的主要征兆，應(yīng)囑患者盡可能的在血尿期留取標(biāo)本，留取量約多越好并及時(shí)送檢，如不能及時(shí)送檢應(yīng)放至于4℃冰箱中防止尿液中細(xì)胞退變；②注意尿液標(biāo)本的留取方式，因?qū)蚩蓳p傷尿路上皮導(dǎo)致尿液標(biāo)本中出現(xiàn)正常的成團(tuán)脫落的上皮細(xì)胞，故對于導(dǎo)尿標(biāo)本中的細(xì)胞應(yīng)該認(rèn)真鑒別；③制片過程中使用免疫組化防脫載玻片可以有效的使細(xì)胞黏附于玻片上，避免細(xì)胞在染色過程中的流失。

綜上所述，正確留取足量的尿液標(biāo)本，應(yīng)用細(xì)胞采集器聯(lián)合液基制片的方法可以最大限度的保留有效細(xì)胞成分并且去除紅細(xì)胞等干擾因素，不僅在膀胱腫瘤還是泌尿系統(tǒng)的其它部位腫瘤中都可顯著提高尿脫落細(xì)胞學(xué)診斷的陽性率。

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