黔產(chǎn)夏枯草石油醚部分的化學(xué)成分研究

摘要：目的 對(duì)黔產(chǎn)夏枯草石油醚部分的化學(xué)成分進(jìn)行研究。方法 采用硅膠、制備薄層、凝膠、半制備高效液相等方法進(jìn)行分離純化，通過(guò)現(xiàn)代波譜解析技術(shù)輔以理化常數(shù)進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果 分離得到7個(gè)化合物，分別為白樺脂酸（1）、β-谷甾醇（2）、β-香樹(shù)脂醇（3）、三十烷酸（4）、齊墩果酸（5）、異落葉松脂素（6）、胡蘿卜苷（7）。結(jié)論 化合物（6）為首次從該屬植物中分離得到，化合物（3）對(duì)結(jié)核桿菌具有一定的抑制活性。

關(guān)鍵詞：夏枯草；化學(xué)成分；抗結(jié)核活性

中圖分類號(hào)：R284.1 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

夏枯草（P.vulgaris Linn）為唇形科（Labiatae）夏枯草屬 （prunella）多年生草本植物[1]。夏枯草在貴州地區(qū)分布廣泛，其干燥果穗和全草均可入藥，味苦、辛，性寒，藥理作用廣泛，具有散結(jié)、清火、明目、消腫、止痛等功效，傳統(tǒng)中歸入清熱藥。夏枯草具有重要的臨床應(yīng)用和開(kāi)發(fā)利用價(jià)值，是一種潛力很強(qiáng)的藥物資源[2]。本人目前已初步確定夏枯草粗提物具有較強(qiáng)體外抑制結(jié)核桿菌活性，本文主要是對(duì)夏枯草中的化學(xué)成分進(jìn)行系統(tǒng)的分離純化和結(jié)構(gòu)鑒定，為并為下一步篩選出抗結(jié)核活性新成分奠定基礎(chǔ)。從夏枯草75%乙醇提取物浸膏的石油醚層經(jīng)過(guò)經(jīng)各種分離材料反復(fù)柱層析和半制備高液分離，波譜和理化性質(zhì)鑒定得到7個(gè)化合物，分別是：白樺脂酸（1）、β-谷甾醇（2）、β-香樹(shù)脂醇（3）、三十烷酸（4）、齊墩果酸（5）、異落葉松脂素（6）、胡蘿卜苷（7），其中化合物（6）為首次從該屬植物中分離得到，化合物（3）對(duì)結(jié)核桿菌具有一定的抑制活性。

1 儀器與材料

1.1儀器 核磁共振波譜儀（美國(guó)Varian公司）：INOVA 400 MHz；氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用 （GC-MS） HP 6890-5975C 型；液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用 （LC-MS） HP1100 MSD型；傅里葉變換紅外光譜儀（德國(guó)Brucker公司）：Brucker Vector 27 FT-IR型；旋光儀（日本Spectroscopic公司）：Horiba SEPA-300；XT-2型顯微熔點(diǎn)測(cè)定儀（溫度計(jì)未校正，北京泰克儀器有限公司）；反相硅膠RP-18（德國(guó)Merck公司）；薄層聚酰胺薄膜（臺(tái)州四甲生化塑料廠）；硅膠H、薄層色譜用硅膠GF254、柱層析硅膠（200～300目、300～400目）（中國(guó)青島海洋化工集團(tuán)公司）；提取和分離所用的有機(jī)溶劑均為工業(yè)級(jí)經(jīng)重蒸處理，其余試劑均為分析純。

1.2材料 實(shí)驗(yàn)所用藥材采集于貴州省龍里縣，由貴陽(yáng)中醫(yī)學(xué)院陳德媛教授鑒定為唇形科夏枯草屬植物夏枯草（P.vulgaris Linn.）的全草，標(biāo)本保存于貴州省中國(guó)科學(xué)院天然產(chǎn)物化學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室。

2 提取與分離

干燥的夏枯草全草約10 kg，粉碎后用75%乙醇加熱回流提取3次每次3～5 h后過(guò)濾，合并濾液，減壓蒸餾濃縮得總浸膏，加入水溶解，用石油醚、乙酸乙酯萃取，減壓蒸餾濃縮得石油醚層（約50 g）、乙酸乙酯得浸膏層（約180 g），其中石油醚層經(jīng)過(guò)經(jīng)各種分離材料反復(fù)柱層析和半制備高液分離，共得到7個(gè)化合物。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

3.1化合物1 白色針狀晶體（氯仿-甲醇），mp 284°C～287°C，Libermann-Burchard反應(yīng)呈陽(yáng)性。EI-MS m/z（%）：456 [M]+，438，423，410，395，248，234，220，207，189，175。1H-NMR （400 MHz，CDCl3-CD3OD） δ 12.06 （1H，brs，COOH），4.72（1H，s，Ha-29），4.60（1H，s，Hb-29），3.15（1H，t，H-3），1.69（3H，s，CH3-30），0.97，0.95，0.93，0.81，0.75（3H，CH3×5）。13C-NMR（100 MHz，CDCl3-CD3OD） δ38.6（C-1），26.8（C-2），78.7（C-3），38.6（C-4），55.1（C-5），18.1（C-6），34.1（C-7），40.5（C-8），50.4（C-9），36.9（C-10），20.7（C-11），25.3（C-12），38.1（C-13），42.3（C-14），29.5（C-15），32.1（C-16），56.1（C-17），46.8（C-18），49.1（C-19），150.6（C-20），30.4（C-21），37.0（C-22），27.7（C-23），15.1（C-24），15.7（C-25），15.9（C-26），14.5（C-27），179.2（C-28），109.3（C-29），19.1（C-30）. 以上光譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[3]對(duì)照，確定為白樺脂酸（betulinic acid）。

3.2化合物2 無(wú)色針狀結(jié)晶（石油醚-丙酮），mp 138°C～147°C。EI-MS m/z（%）： 414 [M]+，382，369，351，329，271，255，

213，159，81，55，43. 1H-NMR（400 MHz，CDCl3） δ5.34（1H，d，J =4.8 Hz，H-6），3.52～3.54（1H，m，H-3），0.68（3H，d，J =7.2 Hz，CH3-21），0.77，0.83，0.84，0.87，1.05（3H，s，CH3×5）。以上光譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[4]對(duì)照，確定為β-谷甾醇（β-sitosterol）。

3.3化合物3 白色針晶（石油醚-乙酸乙酯），mp 196°C～197°C，Liebermann-Burchard 反應(yīng)陽(yáng)性，EI-MS m/z（%）：426 [M]+，408（16），393（15），219（100），203（72），189（62），97（51）.1H-NMR（400 MHz，CDCl3） δ 5.18（1H，t，J=3.4 Hz，H-12），4.51（1H，m，H-3），1.13（3H，s，H-27），0.99（3H，s，H-26），0.97（3H，s，H-25），0.94（3H，s，H-23），0.92（3H，s，H-29），0.87（3H，s，H-24），0.83（3H，s，H-28）.13C-NMR（100 MHz，CDCl3） δ 38.2（C-1），27.2（C-2），79.0（C-3），39.8（C-4），55.1（C-5），19.2（C-6），32.8（C-7），39.5（C-8），47.6 C-9），36.8（C-10），23.5（C-11），124.5（C-12），139.7（C-13），41.6（C-14），26.6（C-15），27.4（C-16），32.8（C-17），47.8（C-18），46.9（C-19），31.4（C-20），34.9（C-21），39.6（C-22），28.2（C-23），15.7（C-24），15.9（C-25），17.0（C-26），26.6（C-27），28.8（C-28），33.6（C-29），23.8（C-30）. 以上光譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[5]對(duì)照，確定為β-香樹(shù)脂醇（β-amyrin）。

3.4化合物4 白色蠟狀粉末（氯仿-甲醇），mp 83°C～87°C，EI-MS m/z（%）：452 [M]+，396，368，340，185，129，97，83，73，57.1H-NMR（400 MHz，CDCl3-CD3OD） 0.88（3H，t，J=5.2 Hz，CH3），1.28（52H，s，2-27-CH2），1.63（2H，m，J=5.2 Hz，28-CH2），2.34（2H，t，J=5.2 Hz，29-CH2），7.26（1H，s，-COOH）. 13C-NMR（100 MHz，CDCl3-CD3OD） δ 178.9（C-1），33.5（C-2），24.7（C-3），29.2（C-4-27），32.0（C-28），22.7（C-29），14.3 （C-30）.以上光譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[6]對(duì)照，確定為三十烷酸（triacontanoic acid）。

3.5化合物5 白色無(wú)定型粉末 （氯仿-甲醇），mp 295°C～297°C，5%硫酸乙醇溶液顯紅色，Liebermann-Burchard反應(yīng)陽(yáng)性，Molish 反應(yīng)陰性。EI-MS m/z（%）：456 [M]+，248，203，189.1H-NMR（400 MHz，CDCl3-CD3OD）5.21（1H，s，H-12），3.16（1H，d，J=6.0Hz，H-3），1.55，1.53，1.08，0.91，0.86，0.85，0.74（3H，s，CH3×7）.13C-NMR（100 MHz，CDCl3-CD3OD）38.4（C-1），26.9（C-2），78.9（C-3），38.5（C-4），55.1（C-5），18.3（C-6），32.6（C-7），38.9（C-8），47.6（C-9），37.0（C-10），22.9（C-11），122.1（C-12），143.6（C-13），41.5（C-14），27.4（C-15），23.1（C-16），46.4（C-17），41.0（C-18），45.6（C-19），30.7（C-20），33.8（C-21），32.1（C-22），28.0（C-23），15.6（C-24），15.1（C-25），16.8（C-26），25.9（C-27），181.2（C-28），33.1（C-29），23.5（C-30）.以上光譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[5]對(duì)照，確定為齊墩果酸（oleanolic acid）。

3.6化合物6 白色無(wú)定形粉末 （甲醇），mp 117°C～119°C，EI-MS m/z（%）：360[M]+，342，311，284，175，103，55.1H-NMR（400 MHz，CD3OD）6.65（1H，d，J=2.4Hz，H-2），6.76（1H，d，J=8.4 Hz，H-5），6.64（1H，dd，J=2.4，8.4Hz，H-6），3.77（1H，d，J=3.6 Hz，H-7），1.81（1H，m，H-8），3.84，3.82（each1H，m，H-9），6.63（1H，s，H-2′），6.18（1H，s，H-5′），2.76（2H，m，H-7′），1.96（1H，m，H-8′），3.71（2H，m，H-9′）.13C-NMR（100MHz，CD3OD）134.1（C-1），113.7（C-2），148.9（C-3），145.8（C-4），115.9（C-5），123.1（C-6），48.0（C-7），47.9（C-8），62.1（C-9），128.9（C-1′），112.3（C-2′），147.1（C-3′），145.8（C-4′），117.3（C-5′），138.6（C-6′），33.6（C-7′），39.9（C-8′），65.9（C-9′），56.3，56.3（each-OCH3）.以上光譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[7]對(duì)照，確定為異落葉松脂素[（-）islarleiresinol]。

3.7化合物7 白色粉末（吡啶），mp287°C～291°C，Lieberman-Burchard反應(yīng)呈陽(yáng)性，Molish反應(yīng)呈陽(yáng)性。EI-MS m/z（%）：576[M]+，414（M-Glu，9），396（100），382（21），313（10），255（19）.1H-NMR（400 MHz，C5D5N）5.35（1H，d，J=5.2 Hz，H-6），4.58（1H，d，J=8.4Hz，H-3），3.68（1H，m，H-2），0.68，0.82，0.87，0.92，0.98（3H，s，CH3×5），0.98（3H，d，J=6.4 Hz，CH3）.13C-NMR（100 MHz，C5D5N）37.4（C-1），30.5（C-2），78.7d（C-3），40.1（C-4），140.8（C-5），122.0（C-6），32.1（C-7），32.2（C-8），50.3（C-9），37.1（C-10），21.3（C-11），39.5（C-12），42.4（C-13），56.8（C-14），24.4（C-15），28.7（C-16），56.2（C-17），12.2（C-18），19.5（C-19），36.4（C-20），19.3（C-21），34.2（C-22），29.5（C-23），46.1（C-24），26.4（C-25），19.0（C-26），20.0（C-27），24.5（C-28），12.0（C-29），102.6（C-1'），75.4（C-2'），78.7（C-3'），71.7（C-4'），78.1（C-5'），62.9（C-6'）.以上光譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[3]對(duì)照，確定為β-胡蘿卜苷（daucosterol）。

4結(jié)果與討論

本實(shí)驗(yàn)對(duì)貴州產(chǎn)夏枯草石油醚部分的化學(xué)成分進(jìn)行了研究，從中分離得到7個(gè)化合物，其中化合物（6）異落葉松脂素為首次從該屬植物中分離得到，同時(shí)利用MTT法對(duì)所有化合物進(jìn)行了抗結(jié)核桿菌實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明，化合物（3）β-香樹(shù)脂醇對(duì)結(jié)核桿菌具有一定的抑制活性。實(shí)驗(yàn)結(jié)果將為進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用中藥夏枯草奠定了物質(zhì)基礎(chǔ)和科學(xué)依據(jù)。

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編輯/肖慧