慢性乙型肝炎患者血清肝纖維化指標(biāo)與肝組織病理學(xué)改變的相關(guān)性分析

摘要：目的 探討慢性乙型肝炎患者肝纖維化指標(biāo)與肝組織纖維化分期及炎癥分級(jí)的關(guān)系，尋找能夠較好地反映肝臟組織學(xué)損傷的無(wú)創(chuàng)檢查指標(biāo)。方法 我們對(duì)144例慢性乙型肝炎患者進(jìn)行肝穿刺活檢，并采集靜脈血檢測(cè)透明質(zhì)酸（HA）、層粘連蛋白（LN）、Ⅳ型膠原（CⅣ）和Ⅲ型前膠原N端肽（PⅢNP），分別對(duì)這4項(xiàng)指標(biāo)與肝組織纖維化分期及炎癥分級(jí)進(jìn)行相關(guān)性分析。結(jié)果 肝組織纖維化分期及炎癥分級(jí)與HA、LN、CⅣ和PⅢNP均存在明顯正相關(guān)（r分別為0.627，0.365，0.531，0.435及0.679， 0.358，0.582，0.583，P值均<0.05）。結(jié)論 透明質(zhì)酸、層粘連蛋白、Ⅳ型膠原和Ⅲ型前膠原N端肽對(duì)于預(yù)測(cè)慢性乙型肝炎患者的肝組織損傷有一定的臨床意義。

關(guān)鍵詞：慢性乙型肝炎；肝臟組織學(xué)；肝纖維化指標(biāo)

Abstract：Objective To explore the relationship between serum fibrosis indexes and liver fibrosis stages / inflammation grades in patients with chronic hepatitis B， and to find the better noninvasive indexes for liver histological damage. Methods The liver fibrosis stages / inflammation grades in 144 CHB patients were confirmed by pathological examination using biopsy tissues. The serum fibrosis indexes （hyaluronic acid， laminin， collagen type Ⅳ， Collagen Type Ⅲ N-peptide） were tested in the patients. The correlation analysis was made between the aforementioned 4 indexes and liver fibrosis stages/inflammation grades. Results However， significant positive correlations were found between the liver fibrosis stages / inflammation grades and liver fibrosis indexes（Spearman r for HA， LN， CⅣand PⅢNP were 0.627，0.365，0.531，0.435 and 0.679，0.358，0.582，0.583， respectively， all P<0.05）. Conclusion Hyaluronic acid ，laminin，Collagen type Ⅳ and Collagen Type Ⅲ N-peptide may be used as an noninvasive markers for liver injuries in CHB patients.

Key words：Chronic hepatitis B； Liver pathology； Liver fibrosis indexes

肝纖維化是一個(gè)病理生理過(guò)程，是指由各種致病因子所致的肝內(nèi)結(jié)締組織異常增生，是慢性乙型病毒性肝炎發(fā)展成為肝硬化的前期過(guò)程，不是一個(gè)獨(dú)立的疾病[1]。肝組織病理學(xué)檢查是反映肝臟損傷的客觀指標(biāo) ，而外周血血清中透明質(zhì)酸（hyaluronic acid，HA）、層粘連蛋白（laminin，LN）、Ⅳ型膠原（collagen type Ⅳ，CⅣ）和Ⅲ型前膠原N端肽（collagen type ⅢN-peptide，PⅢNP）是臨床常見(jiàn)的檢測(cè)指標(biāo)。我們對(duì)144例慢性乙型肝炎（Chronic hepatitis B，CHB）住院患者進(jìn)行肝穿刺活組織檢查，并對(duì)其肝纖維化分期及炎癥分級(jí)與這四項(xiàng)指標(biāo)進(jìn)行相關(guān)性分析研究，現(xiàn)做如下報(bào)道。

1 資料與方法

1.1一般資料 2014年9月～2015年6月在天津市第二人民醫(yī)院住院的慢性乙型肝炎患者144例，其中男性88例，女性56例，年齡16～66歲，平均年齡（37.5±12）歲。該診斷符合中華醫(yī)學(xué)會(huì)制定的《慢性乙型肝炎防治指南》標(biāo)準(zhǔn)（2010版）[2]，所有患者均除外甲型、丙型、丁型、戊型肝炎和其他病毒感染、結(jié)核病、風(fēng)濕病等所致的肝臟疾病以及酒精肝，脂肪肝等；還有肝活檢不符合標(biāo)準(zhǔn)的患者。

1.2方法 所有患者在肝穿刺前，采集靜脈血4 ml送檢并離心分離血清。采用化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)HA、LN、CⅣ、PⅢNP，試劑由鄭州安圖生物工程股份有限公司提供。LUMO型化學(xué)發(fā)光儀為鄭州安圖生物工程公司的產(chǎn)品，并由專人嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)操作。

1.3病理學(xué)檢測(cè) 在彩超引導(dǎo)下，采用16G穿刺槍進(jìn)行準(zhǔn)確而快速地肝穿刺活組織檢測(cè)，取得肝組織長(zhǎng)度在1.5～2.5 cm范圍，然后立即置于10%中性福爾馬林液中固定，常規(guī)脫水，石蠟包埋，4 um連續(xù)切片，并依次對(duì)其進(jìn)行蘇木素-伊紅（HE）染色、Masson染色、嗜銀網(wǎng)狀纖維染色。最后由同一位醫(yī)生進(jìn)行病理讀片分析，參照2000年《病毒性肝炎防治方案》制定的標(biāo)準(zhǔn)[3]，將肝臟纖維化程度分為S0-S4期，肝臟炎癥活動(dòng)度分為G1-G4級(jí)。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 我們使用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行分析計(jì)算，計(jì)量資料以（x±s）表示，采用Spearman等級(jí)相關(guān)分析，以及t檢驗(yàn)，P<0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1慢性乙肝患者肝組織纖維化分期與血清HA、LN、CⅣ、PⅢNP四項(xiàng)指標(biāo)的相關(guān)性 結(jié)果顯示：肝組織纖維化分期與HA、LN、CⅣ、PⅢNP均存在明顯正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)r分別為0.627，0.365，0.531，0.435，P值均<0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見(jiàn)表1。

2.2慢性乙肝患者肝組織炎癥分級(jí)與血清HA、LN、CⅣ、PⅢNP四項(xiàng)指標(biāo)的相關(guān)性 結(jié)果顯示：肝組織炎癥分級(jí)與HA、LN、CⅣ、PⅢNP之間存在明顯正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)r分別為0.679，0.358，0.582，0.583，P值均<0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見(jiàn)表2。

3 討論

任何肝損傷在肝臟修復(fù)愈合的過(guò)程中都有肝纖維化的形成，如果損傷因素長(zhǎng)期不能去除，肝纖維化的過(guò)程長(zhǎng)期持續(xù)就會(huì)發(fā)展成為肝硬化，這是慢性肝炎向肝硬化發(fā)展的必經(jīng)階段。肝纖維化的早期診斷可為肝硬化的預(yù)防、治療和預(yù)后判斷提供有價(jià)值的參考[4]。目前評(píng)價(jià)肝纖維化程度及其活動(dòng)度的指標(biāo)，最可靠的仍是肝活檢樣本的組織學(xué)檢查，被稱為診斷肝纖維化的“金標(biāo)準(zhǔn)”。但肝活檢屬于創(chuàng)傷性檢查，不僅有明顯的取材差異，而且對(duì)患者的病情發(fā)展難以進(jìn)行動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)[5]，因此肝纖維化指標(biāo)的血清學(xué)檢測(cè)簡(jiǎn)便易行并能對(duì)肝組織纖維化不同階段做出相對(duì)準(zhǔn)確的診斷而逐漸受到重視。

HA 廣泛存在于細(xì)胞外基質(zhì)中，由肝臟間質(zhì)細(xì)胞合成，經(jīng)內(nèi)皮細(xì)胞攝取及降解，可較靈敏地反映肝內(nèi)已生成的纖維量及肝細(xì)胞受損狀況，是診斷肝纖維化和肝硬化的敏感指標(biāo)[6]。HA有助于評(píng)估肝病的發(fā)展趨勢(shì)，在肝炎到肝硬化的病情發(fā)展中，血清HA逐步優(yōu)于其他肝硬化的診斷指標(biāo)，在中、重癥患者的診斷中具有較高的應(yīng)用價(jià)值[7]。LN為基底膜中特有的非膠原性結(jié)構(gòu)蛋白，正常肝臟間質(zhì)含少量LN，在肝纖維化和肝硬化時(shí)，肌成纖維細(xì)胞增多，導(dǎo)致肝竇中大量合成和分泌Ⅳ型膠原、LN等間質(zhì)成分并過(guò)度沉積，從而形成完整的基底膜（肝竇毛細(xì)血管化）。肝竇毛細(xì)血管化是肝硬化的特征性病理改變，導(dǎo)致肝細(xì)胞功能障礙，形成門靜脈高壓。LN與門靜脈高壓成正相關(guān)，能夠反映肝纖維化的程度[8]。PⅢNP反映肝內(nèi)Ⅲ型膠原的合成，與肝纖維化的活動(dòng)程度密切相關(guān)，但無(wú)特異性，當(dāng)其他器官纖維化時(shí)，PⅢNP也可升高。血清PⅢNP作為活動(dòng)性肝纖維化的指標(biāo)，在肝纖維化早期即可升高，而慢性肝炎患者PⅢNP持續(xù)升高提示病情向肝硬化的形成發(fā)展，說(shuō)明PⅢNP在肝纖維化早期診斷上有一定價(jià)值，是反映慢性肝纖維化活動(dòng)性和程度的指標(biāo)。血清PⅢNP水平在晚期合成減慢，陳舊性肝硬化和部分晚期肝硬化、肝萎縮患者血清PⅢNP不一定增高[9-10]。同時(shí)其水平降低也可預(yù)示肝纖維化程度的減輕[11]。CⅣ是基底膜的主要組成部分，反映基底膜膠原的更新率，在肝纖維化時(shí)出現(xiàn)最早，是肝纖維化的早期標(biāo)志物之一[12]。肝損傷時(shí)CⅣ可敏感地反映肝炎向肝硬化發(fā)展的進(jìn)程和程度，隨著病程的加重，CⅣ含量逐步升高[13]。

本研究144例慢性乙型肝炎患者，血清HA、LN、CⅣ、PⅢNP指標(biāo)水平隨著肝組織纖維化分期和炎癥分級(jí)的加重而逐漸升高，呈明顯的正相關(guān)（P<0.05）。病理分析顯示，血清HA、LN、CⅣ及PⅢNP在肝纖維化S4期和炎癥G4級(jí)時(shí)水平最高。而且肝組織纖維化程度高、炎癥壞死重的患者，這四項(xiàng)指標(biāo)明顯高于纖維化程度低、炎癥壞死輕的患者。表明血清HA、LN、CⅣ及PⅢNP水平與肝組織纖維化分期和炎癥分級(jí)基本一致，反映了肝臟纖維化的發(fā)展變化情況，可以成為肝纖維化診斷的參考指標(biāo)之一。

綜上所述，血清肝纖維化指標(biāo)作為一種非創(chuàng)傷性檢查指標(biāo)，對(duì)肝纖維化的早期診斷及動(dòng)態(tài)觀察具有一定的參考意義。然而，血清肝纖維化指標(biāo)因受肝臟炎癥的影響較大，特異性不高，還無(wú)法替代肝活檢。因此，仍需結(jié)合臨床指征和現(xiàn)代影像學(xué)手段，如B型超聲、CT與磁共振成像（MRI）等，以及與其他血清學(xué)指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)，從而提高其對(duì)肝纖維化的早期診斷和抗纖維化治療的臨床效果。

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編輯/翟辰萬(wàn)