三白通絡(luò)膠囊急性毒性與長期毒性試驗(yàn)研究

摘要：目的 通過研究三白通絡(luò)膠囊的急性毒性與長期毒性反應(yīng)，確定三白通絡(luò)膠囊的安全性，為臨床用藥提供科學(xué)依據(jù)，保證用藥安全。方法 以高劑量組100g/kg，中劑量組40g/kg，低劑量組10g/kg 給大鼠連續(xù)灌服12w，分別測量大鼠體重，三白通絡(luò)膠囊測定血液學(xué)和血液生化學(xué)指標(biāo)，并作組織病理學(xué)檢查。結(jié)果 試驗(yàn)結(jié)果表明，三白通絡(luò)膠囊各劑量組動物的觀測指標(biāo)與空白對照組比較，均無顯著性差異。病理檢查各臟器組織均未見藥物中毒性病理形態(tài)學(xué)改變。停藥后也未見藥物延遲性毒性反應(yīng)。結(jié)論 三白通絡(luò)膠囊無急性毒性，耐受量大，臨床用此藥將是安全的。

關(guān)鍵詞：三白通絡(luò)膠囊；急性毒性；長期毒性；耐受量

三白通絡(luò)膠囊為我院一中藥制劑，具疏風(fēng)化痰，活血通絡(luò)之功效，用于風(fēng)痰淤阻所致的口眼喎斜。周圍面神經(jīng)麻痹見上述癥候者。為確保其安全性，為臨床用藥提供科學(xué)依據(jù)，我們進(jìn)行了動物試驗(yàn)。

1 材料與方法

1.1受試動物及藥物 健康瑞士小白鼠，沈陽中國醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物部；健康Wistar大白鼠，中國醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物部。受試藥物三白通絡(luò)膠囊（豐南區(qū)中醫(yī)醫(yī)院制劑室，冀藥制字Z20051609 批號150523）。

1.2方法

1.2.1小鼠急性毒性試驗(yàn) 健康瑞士小白鼠100只，體重在18～22g，雌雄各半，鼠料塊正常飼養(yǎng)，給水及青菜，室溫22℃左右，試驗(yàn)前禁水禁食12h備用。①為計(jì)算出半數(shù)致死劑量（LD50）對試驗(yàn)小白鼠進(jìn)行0%-100%致死量范圍的預(yù)試驗(yàn)，取小白鼠70只，雌雄各半，隨機(jī)分為七組，1～7組每組10只。逐組依法酌情進(jìn)行。首先第1組給以配制之50%三白通絡(luò)膠囊內(nèi)容物水溶液0.4ml/10g體重，一次性灌胃給藥，觀察7d無不良反應(yīng)無死亡時(shí)，再以同樣方法增大劑量，觀察100%直至600%三白通絡(luò)膠囊內(nèi)容物水溶液，直至濃度不能再增加為止。②根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，采用最大耐受劑量（MTD）實(shí)驗(yàn)法，取小白鼠40只，雌雄各半，隨機(jī)分成三組。第1組10只為對照組。第2組10只為給藥1組：給以600%三白通絡(luò)膠囊內(nèi)容物水溶液0.4ml/10g體重，一次性灌胃給藥[1]。第3組20只為給藥2組，以同樣藥物濃度，同樣劑量在第1次給藥后4h再給藥1次。對照組以水代之，觀察7d，觀察小白鼠有無明顯毒性反應(yīng)及死亡情況。

1.2.2小鼠長期毒性試驗(yàn) 運(yùn)用中國醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物部培育的健康Wistar大白鼠，體重在90～110g，雌雄各半，共80只，按體重性別隨機(jī)分為四組，即對照組、低劑量組、中劑量組和高劑量組，每組20只。以中國醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物部生產(chǎn)之鼠類飼料塊和青菜飼養(yǎng)。正常飼養(yǎng)1w后進(jìn)行試驗(yàn)。劑量及給藥途徑：將其沖劑以溫開水溶解后經(jīng) 灌胃給藥。低劑量組：1次/d，每次灌胃100%三白通絡(luò)膠囊劑（每1ml含1.0g生藥下同）2.0ml，即每日10g/kg，此量稍大于臨床成人等效量。中劑量組：1次/d，每次灌胃400%三白通絡(luò)膠囊劑2.0ml/只，即每日40g/kg。高劑量組：2次/d，每次灌胃400%三白通絡(luò)膠囊劑2.5ml/只，即每日100g/kg。對照組：1次/d，每次灌胃生理水2.0ml/只。各組均連續(xù)給藥12w。

1.3觀測指標(biāo) 給藥后注意觀察大白鼠精神狀態(tài)、活動、食欲變化、飲水、大小便性狀及皮膚毛發(fā)等一般體征。每兩周測體重一次。實(shí)驗(yàn)前和給藥后第6、12w末由尾靜脈取血進(jìn)行行血細(xì)胞學(xué)和生化學(xué)檢查。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后各組取50%的大白鼠以乙醚全麻處死進(jìn)行病理解剖學(xué)檢查。其余大白鼠停藥飼養(yǎng)觀察2w后各組再取其50%大白鼠以乙醚全麻處死，進(jìn)行病理解剖學(xué)檢查。每次病理解剖首先注意各臟器肉眼變化，并將所有臟器以10%福爾馬林水溶液固定，再取材、脫水、浸臘等病理學(xué)常規(guī)制片，H、E染色，肝加蘇丹III脂肪染色，光學(xué)顯微鏡觀察。

2 結(jié)果

2.1小鼠急性毒性試驗(yàn) 由表1和表2可以看出，配制成最大濃度為100%直至600%的三白通絡(luò)膠囊內(nèi)容物水溶液，對小鼠進(jìn)行一次性灌胃，未測出其半數(shù)致死量，說明本制劑無急性毒性作用。使用最大濃度對小鼠做進(jìn)一步觀察，觀察7d小鼠無不良反應(yīng)，無1例死亡。其最大耐受量為臨床患者用藥量的280倍。

2.2大鼠長期毒性試驗(yàn)

2.2.1對大鼠一般指標(biāo)的影響 給藥后各給藥組和對照組動物由于食欲好，體重逐漸增加，且各組間無顯著性差異，見表3。

2.2.2對大鼠血常規(guī)指標(biāo)的影響 以三白通絡(luò)膠囊內(nèi)容物混懸液，高、中、低不同劑量連續(xù)灌胃給藥12w，樣品各組雌性、雄性大鼠的血紅蛋白、紅細(xì)胞、血小板、白細(xì)胞總數(shù)及其分類與對照組比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），表明該樣品對大鼠的血常規(guī)指標(biāo)無明顯影響，見表4。

2.2.3對大鼠血液生化指標(biāo)的影響 以三白通絡(luò)膠囊內(nèi)容物混懸液，高、中、低不同劑量連續(xù)灌胃給藥12w，樣品各組雌性、雄性大鼠的血清總蛋白、血清白蛋白、血清球蛋白、谷丙轉(zhuǎn)氨酶、尿素氮與對照組比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），表明該樣品對大鼠的血液生化指標(biāo)無明顯影響，見表5。

2.2.4對大鼠出血時(shí)間的影響 出血時(shí)間的測定：利用斷尾出血法測之，每次以溫水40～50℃水浴鼠尾2～3min，擦干后剪之，首次距尾末端0.5cm處剪之，以后每次距末端0.2～0.3cm 剪之。結(jié)果用藥后各組大鼠出血時(shí)間縮短，見表6。

2.2.5對大鼠凝血時(shí)間的影響 凝血時(shí)間測定：利用斷尾取血時(shí)，首先將尾部以40～50℃溫水浴之。然后切斷尾末端以毛細(xì)玻璃管吸之。然后定時(shí)折斷毛細(xì)玻璃管以觀察有無血纖維絲出現(xiàn)，計(jì)算凝血時(shí)間。結(jié)果各給藥組凝血時(shí)間明顯縮短，見表7。

2.2.6對大鼠臟器的影響 對大鼠的臟器進(jìn)行病理解剖學(xué)檢查。

2.2.6.1肉眼觀察 給藥各組和對照組大白鼠發(fā)育正常、營養(yǎng)良好、毛色光澤好、皮膚呈淺粉紅色，口腔、鼻腔、肛門和外陰部無出血或異常分泌物。皮下脂肪層較厚。胸腔、腹腔、心包腔無積液，漿膜光滑，無粘連。心、肺、肝、脾、胰、腎、消化道、胸腺和腎上腺、卵巢、子宮、睪丸和大腦等均未見異狀。延期觀察各組動物亦無異常發(fā)現(xiàn)。

2.2.6.2鏡下觀察 對各組所有動物之心、肝、腎、肺、脾、腦、內(nèi)分泌腺等均制片觀查，觀查結(jié)果如下：①心：給藥組和對照組心肌纖維精細(xì)均勻、橫紋清楚、排列整齊。胞核內(nèi)脂褐素未見增多，亦未見變性、壞死或炎性反應(yīng)。間質(zhì)無充血或炎性細(xì)胞浸潤。心內(nèi)膜和心外膜亦無異常變化。②肺：給藥各組和對照組肺泡大小較均勻一致，肺泡壁薄，內(nèi)無充血或炎性細(xì)胞浸潤。肺泡腔無炎性細(xì)胞滲出，亦未見水腫液。支氣管周圍未見明顯炎性反應(yīng)。③肝：給藥組和對照組肝組織結(jié)構(gòu)完整，肝細(xì)胞大小均勻一致，肝素排列整齊，未見肝細(xì)胞變性或壞死，亦無炎性細(xì)胞浸潤。肝竇清楚，竇內(nèi)皮細(xì)胞無明顯增生或肥大。匯管區(qū)小膽管和纖維組織未見增生，亦無炎性細(xì)胞浸潤。肝蘇丹III染色陰性。④脾：包膜光滑，脾組織無明顯增生，脾竇輕度擴(kuò)張充血。⑤胰：腺體及胰島未見病變。⑥胃、腸：腸、胃各層結(jié)構(gòu)清晰，無變性壞死樣改變。⑦腎：各給藥組和對照組雙腎皮質(zhì)與髓質(zhì)分界清楚，腎小球大小一致，分布均勻。腎小球內(nèi)未見增生、充血或炎性細(xì)胞浸潤。腎曲管上皮無變性或壞死，未見管型。間質(zhì)內(nèi)無充血或炎性細(xì)胞浸潤。⑧內(nèi)分泌腺：各組之胸腺、腎上腺、睪丸和卵巢均未見異常。⑨大腦：腦皮質(zhì)和髓質(zhì)結(jié)構(gòu)清楚。腦內(nèi)神經(jīng)細(xì)胞未見變性或壞死，膠質(zhì)細(xì)胞無明顯增生，亦未見腦組織軟化現(xiàn)象。

此外，對子宮組織學(xué)檢查亦無異常改變。

實(shí)驗(yàn)結(jié)束次日，各組取50%大白鼠用乙醚全麻處死，進(jìn)行病理解剖觀察。2w后再取各組余下大白鼠的50%，亦用乙醚全麻處死，進(jìn)行病理解剖觀察。4w后將各組余下的大白鼠用乙醚全麻處死，進(jìn)行病理解剖觀察。各次解剖之大白鼠主要臟器均以10%福爾馬林水溶液固定，取材，病理常規(guī)制片檢查。首次處死大白鼠各臟器未中毒病變。各延長期處死的大白鼠無論大小劑量組的心、肺、肝、脾、胃、腦、消化管和內(nèi)分泌腺均未見中毒性改變。

結(jié)果可見，對照組及個(gè)給藥組動物各臟器組織均未見藥物中毒性病理心態(tài)學(xué)改變。

3 結(jié)論

急性毒性試驗(yàn)中并未測出LD50，最大耐受試驗(yàn)標(biāo)兵，在7d的觀察期內(nèi)，小鼠近視、排便、活動正常，未見任何中毒表現(xiàn)，無小鼠死亡。

長期毒性試驗(yàn)，三白通絡(luò)膠囊內(nèi)容物經(jīng)水溶解制成溶液，按低、中、高不同劑量連續(xù)給大白鼠灌胃12w，給藥各組和對照組在生長發(fā)育方面無明顯差異，對血液細(xì)胞學(xué)和血液生化學(xué)無明顯影響。對心、肝、腎、腦和內(nèi)分泌腺及其他臟器亦無明顯中毒反應(yīng)。因而在100g/kg劑量下無毒、安全，此劑量已相當(dāng)于人臨床劑量的58倍。

參考文獻(xiàn)：

[1]佟繼銘，華正祥.健骨沖劑對大鼠長期毒性研究[J].承德醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào) 1997，014（003）：184.編輯/倪冰冰