MDR1 C3435T基因多態(tài)性與胃潰瘍患者治療相關(guān)性分析

卜玲玲

(常州市中醫(yī)醫(yī)院消化內(nèi)科，江蘇 常州 213000)

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MDR1 C3435T基因多態(tài)性與胃潰瘍患者治療相關(guān)性分析

卜玲玲

(常州市中醫(yī)醫(yī)院消化內(nèi)科，江蘇 常州 213000)

目的 分析MDR1 C3435T基因多態(tài)性與胃潰瘍患者治療的相關(guān)性。方法 回顧性分析2010年10月至2015年10月來(lái)我院就診的胃潰瘍患者共80名，其中Hp陽(yáng)性患者47例，另選取80例健康體檢者作為對(duì)照組，測(cè)定兩組入選對(duì)象MDR1 C3435T基因多態(tài)性，比較不同基因型胃潰瘍患者治療后Hp陽(yáng)性率和耐藥率。結(jié)果 觀察組(Hp陽(yáng)性)患者3435TT基因型頻率和T等位基因頻率均明顯高于觀察組(Hp陰性)和對(duì)照組(P<0.05)；觀察組(Hp陰性)患者3435TT基因型頻率和T等位基因頻率亦均明顯高于對(duì)照組(P<0.05)。治療后3435TT基因型患者Hp陽(yáng)性率和耐藥率均明顯高于C3435T和CC3435基因型患者(P<0.05)。結(jié)論 MDR1 C3435T基因多態(tài)性與胃潰瘍患者的治療具有相關(guān)性，3435TT基因型患者較難根除Hp，耐藥性較強(qiáng)。

胃潰瘍； MDR1； 基因多態(tài)性； 3435TT基因型

胃潰瘍是臨床常見(jiàn)病和多發(fā)病，幽門螺桿菌(Hp)是引起胃潰瘍發(fā)生的重要致病因子，根除Hp是治療胃潰瘍和預(yù)防胃潰瘍復(fù)發(fā)的有效措施。無(wú)論胃潰瘍是否處于活動(dòng)期，都是根除Hp的主要指征[1]，三聯(lián)療法是目前臨床根除Hp的常用手段，但由于耐藥菌株的出現(xiàn)和患者依從性差等原因，耐藥率呈逐年上升趨勢(shì)。多耐藥基因(MDR)通過(guò)作用于藥物及其代謝物在細(xì)胞膜間的轉(zhuǎn)運(yùn)，降低細(xì)胞內(nèi)藥物濃度，影響藥物療效；P-糖蛋白是由MDR編碼的能量依賴性膜蛋白，具有多個(gè)藥物作用位點(diǎn)，PPI是其作用底物之一[2]；而研究發(fā)現(xiàn)，MDR1 C3435T基因多態(tài)性可影響MDR和P-糖蛋白的表達(dá)和功能。為論證MDR1 C3435T基因多態(tài)性與胃潰瘍患者治療的相關(guān)性，指導(dǎo)進(jìn)一步臨床工作，現(xiàn)將研究結(jié)果報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2010年10月至2015年10月來(lái)我院就診的胃潰瘍患者共80例，所有患者胃潰瘍均經(jīng)胃鏡檢查確診，排除藥物過(guò)敏、處于妊娠哺乳期、近1個(gè)月內(nèi)接受過(guò)抗菌藥物治療及合并肝腎功能不全等器質(zhì)性疾病的患者，其中Hp陽(yáng)性患者47例，診斷依據(jù)快速尿素酶實(shí)驗(yàn)。80例胃潰瘍患者，男43例，女37例，年齡23～67歲，平均(44.1±3.9)歲，病程4個(gè)月至11年，平均(3.7±2.2)年；另選取80名同期健康體檢者作為對(duì)照組，男39名，女41名，年齡21～69歲，平均年齡(45.3±3.3)歲。本研究通過(guò)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，所有入選者均簽署知情同意書，兩組患者年齡、性別、等比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

1.2 治療方法 80例胃潰瘍患者均給予三聯(lián)療法治療，埃索美拉唑鎂腸溶片(阿斯利康制藥有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字H20046379)，20 mg/次，2次/d，阿莫西林膠囊(昆明貝克諾頓制藥有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字H53021880)，1 000 mg/次，2次/d，克拉霉素分散片(哈藥集團(tuán)制藥六廠，國(guó)藥準(zhǔn)字H20040311)，500 mg/次，2次/d。用藥兩周后，快速尿素酶實(shí)驗(yàn)復(fù)查Hp陽(yáng)性胃潰瘍患者Hp根除情況，藥敏性試驗(yàn)分析所有患者耐藥情況。

1.3 MDR1 C3435T基因多態(tài)性的測(cè)定 (1)DNA制備：所有患者抽取空腹肘靜脈血2 mL，離心后取上清液，置于乙二胺四乙酸二鉀抗凝管抗凝處理，采取日本TOYOBO磁珠法DNA提取試劑盒提取外周血白細(xì)胞DNA，置于-80℃冰箱低溫保存。(2)DNA引物：5’-TGTTTTCAGCTGCTTGATGG-3’，5’-AAGGCATGTATGTTGGCCTC-3’；DNA探針：5’-TGCAGCAGATTGGTCCTGAAATAGTA-3’；限制性核酸內(nèi)切酶：Sau3AI。(3)PCR擴(kuò)增：采用PCR擴(kuò)增儀，加入提取的模板DNA 2 μL，2×PCR緩沖液14 μL，正向引物2 μL，反向引物2 μL，共計(jì)20 μL混勻反應(yīng)，42 ℃反向轉(zhuǎn)錄30 min，95 ℃預(yù)變性3 min，60 ℃退火30 s，72 ℃延伸30 s，95 ℃變性30 s，反復(fù)循環(huán)擴(kuò)增40個(gè)周期，72 ℃延伸5 min，退火過(guò)程中采用熒光定量PCR儀測(cè)定TapMan探針上的FAM熒光信號(hào)。(4)限制性核酸內(nèi)切酶片段長(zhǎng)度多態(tài)性分析：加入PCR擴(kuò)增產(chǎn)物10 μL，引物1 μL，緩沖液2 μL，水17 μL，采用限制性核酸內(nèi)切酶Sau3AI置于37 ℃水浴酶切消化；取酶切產(chǎn)物10 μL，置于3%瓊脂糖凝膠負(fù)極端加樣孔，溴酚藍(lán)作指示劑，溴化乙錠作染色劑，于75 V電壓下電泳處理30 min，置于紫外燈下，分析基因型。(5)根據(jù)基因型分析數(shù)據(jù)，采用Hardy-Weinberg平衡法分析研究對(duì)象是否具有代表性；等位基因頻率計(jì)算：(2×純合子+雜合子)/(2×受體人數(shù))。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 本臨床統(tǒng)計(jì)結(jié)果采用SPSS19.0的統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理,計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，檢驗(yàn)指標(biāo)設(shè)為0.05，P<0.05時(shí)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 MDR1 C3435T基因酶切產(chǎn)物和PCR產(chǎn)物電泳分析 MDR1 C3435T基因PCR擴(kuò)增后，經(jīng)3%瓊脂糖凝膠電泳分離，得到196 bp PCR產(chǎn)物(第5泳道)；PCR產(chǎn)物經(jīng)Sau3AI酶切后，得到CC3435基因型133 bp和96 bp兩個(gè)產(chǎn)物(第4泳道)，C3435T基因型133 bp、96 bp和16 bp三個(gè)產(chǎn)物(第3泳道)，3435TT基因型96 bp一個(gè)產(chǎn)物(第2泳道)；第1泳道為100 bp Marker。結(jié)果詳見(jiàn)圖1。

圖1 MDR1 C3435T基因酶切產(chǎn)物和PCR產(chǎn)物電泳分析

2.2 兩組入選對(duì)象各基因型頻率及等位基因頻率比較 兩組入選對(duì)象MDR1 C3435T基因型頻率和等位基因頻率觀察值與期望值相符，滿足遺傳平衡標(biāo)準(zhǔn)，研究對(duì)象具有代表性。觀察組(Hp陽(yáng)性)患者3435TT基因型頻率和T等位基因頻率均明顯高于觀察組(Hp陰性)和對(duì)照組，觀察組(Hp陰性)患者3435TT基因型頻率和T等位基因頻率亦均明顯高于對(duì)照組，統(tǒng)計(jì)學(xué)方法分析，P<0.05，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見(jiàn)表1。

表1 兩組入選對(duì)象各基因型頻率及等位基因頻率比較[n(%)]

2.3 不同基因型胃潰瘍患者治療后Hp陽(yáng)性率和耐藥率 47例Hp陽(yáng)性胃潰瘍患者經(jīng)治療后，3435TT基因型患者Hp陽(yáng)性率明顯高于C3435T和CC3435基因型患者(P<0.05)；80例胃潰瘍患者經(jīng)治療后，3435TT基因型患者耐藥率明顯高于C3435T和CC3435基因型患者(P<0.05)。見(jiàn)表2。

表2 不同基因型胃潰瘍患者治療后Hp陽(yáng)性率和耐藥率[n/N(%)]

3 討 論

胃潰瘍是臨床常見(jiàn)疾病，Hp是胃潰瘍的重要致病因子，同時(shí)Hp也與胃癌的發(fā)生密切相關(guān)，目前，世界衛(wèi)生組織已將Hp歸為第一類致癌因子。Hp根除是胃潰瘍治療的關(guān)鍵，隨著三聯(lián)療法在臨床的廣泛推廣，其耐藥性也日益凸顯。有報(bào)道顯示，MDR1基因多態(tài)性可通過(guò)改變P-糖蛋白生理活性[3]，影響藥物在機(jī)體的正常轉(zhuǎn)運(yùn)，提高耐藥性，本文旨在研究MDR1 C3435T基因多態(tài)性與胃潰瘍患者治療的相關(guān)性。

作為能量依賴性膜蛋白，P-糖蛋白是由第7號(hào)染色體上的MDR1基因編碼[4]，具有調(diào)節(jié)細(xì)胞物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)和跨膜運(yùn)動(dòng)的功能，可通過(guò)分解ATP供能，將底物泵出細(xì)胞外。表達(dá)于胃腸道、肝臟及血腦屏障等正常組織細(xì)胞表面，P-糖蛋白可將有害外源性物質(zhì)泵出細(xì)胞外，起到保護(hù)細(xì)胞正常生理功能的作用[5]；表達(dá)于腫瘤細(xì)胞表面，P-糖蛋白可將抗腫瘤藥物泵出細(xì)胞外，使腫瘤細(xì)胞具有耐藥性。PPI也是P-糖蛋白的作用底物之一[6]，胃潰瘍患者采用三聯(lián)療法治療，藥物進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)發(fā)揮作用，而P-糖蛋白可通過(guò)分解ATP供能將PPI及其代謝產(chǎn)物泵出細(xì)胞外，細(xì)胞內(nèi)藥物濃度降低，Hp很難得以根除，機(jī)體耐藥性增強(qiáng)。

本臨床調(diào)查結(jié)果顯示，觀察組(Hp陽(yáng)性)患者3435TT基因型頻率和T等位基因頻率均明顯高于觀察組(Hp陰性)和對(duì)照組，觀察組(Hp陰性)患者3435TT基因型頻率和T等位基因頻率亦均明顯高于對(duì)照組，Hp陽(yáng)性胃潰瘍患者機(jī)體抗原反應(yīng)增強(qiáng)，釋放大量炎癥因子和細(xì)胞因子，級(jí)聯(lián)反應(yīng)導(dǎo)致炎癥反應(yīng)進(jìn)一步加強(qiáng)，免疫系統(tǒng)紊亂，通過(guò)一系列病理生理變化，MDR1 C3435T基因發(fā)生突變，3435TT基因型頻率和T等位基因顯著上升[7]。同時(shí)，治療后3435TT基因型患者Hp陽(yáng)性率和耐藥率均明顯高于C3435T和CC3435基因型患者，同樣證實(shí)了MDR1 C3435T基因多態(tài)性與胃潰瘍患者治療的相關(guān)性。

總之，MDR1基因多態(tài)性通過(guò)引起P-糖蛋白過(guò)表達(dá)，影響機(jī)體正常物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)和藥代動(dòng)力學(xué)功能，使3435TT基因型患者Hp根除難度加大，耐藥性進(jìn)一步增強(qiáng)。

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Analysis relationship between MDR1C3435T gene polymorphism and the patients with gastric ulcer

BuLingling.

DepartmentofGastroenterology,ChangzhouCityChineseTraditionalMedicineHospital.Changzhou213000,China.

Objective To analyze the relationship between MDR1 C3435T gene polymorphism and the patients with gastric ulcer. Methods Retrospectively analyzed 80 cases of patients with gastric ulcer from October 2010 to October 2015 in our hospital, including 47 cases of Hp positive patients and 80 cases of healthy persons as control group. It was determinate MDR1 C3435T gene polymorphism of the two groups and Compared Hp positive rate and drug resistance rate of different genotype in patients with gastric ulcer. Results 3435TT genotype frequency and T allele frequencies in patients of observation group (Hp positive) were significantly higher than those of the control group (Hp negative) (P<0.05). And the 3435TT genotype frequency and T allele frequency in observation group (Hp negative) were significantly higher than that of the control group (P<0.05). After treatment, Hp positive rate and drug resistance rate of patients with 3435TT genotype were significantly higher than those of the patients with genotypes of C3435T and CC3435 (P<0.05). Conclusion The polymorphism of MDR1 C3435T gene is associated with the treatment of gastric ulcer patients. It is difficult to eradicate Hp of patients with 3435TT genotype, and the drug resistance is stronger.

Gastric ulcer； MDR1； Gene polymorphism； 3435TT genotype

R573.1

A

1000-744X(2016)11-1135-03

2016-08-24)