ELISA聯(lián)合NAT技術(shù)對(duì)血液篩查的應(yīng)用價(jià)值和輸血?dú)堄囡L(fēng)險(xiǎn)的對(duì)比分析

林玉蓓 魯思文△ 項(xiàng)漢城 詹曉燕

(1.江蘇省中醫(yī)院輸血科，江蘇 南京 210029；2.江蘇省血液中心供血科，江蘇 南京 210000)

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ELISA聯(lián)合NAT技術(shù)對(duì)血液篩查的應(yīng)用價(jià)值和輸血?dú)堄囡L(fēng)險(xiǎn)的對(duì)比分析

林玉蓓1魯思文1△項(xiàng)漢城2詹曉燕1

(1.江蘇省中醫(yī)院輸血科，江蘇 南京 210029；2.江蘇省血液中心供血科，江蘇 南京 210000)

目的 探討ELISA聯(lián)合NAT技術(shù)對(duì)血液篩查的應(yīng)用價(jià)值并對(duì)其輸血?dú)堄囡L(fēng)險(xiǎn)進(jìn)行對(duì)比分析。方法 選擇無償獻(xiàn)血者標(biāo)本共計(jì)58 810人份為研究對(duì)象，采用兩種不同廠家生產(chǎn)的ELISA試劑盒進(jìn)行乙肝病毒表面抗原(HBsAg)、丙肝抗體(抗-HCV)及艾滋病抗體(抗-HIV)的檢測(cè)，并采用核酸擴(kuò)增技術(shù)(NAT)進(jìn)行HBV DNA、HCV RNA、HIV RNA的檢測(cè)，對(duì)ELISA陰性、NAT陽(yáng)性的標(biāo)本進(jìn)行追蹤分析。結(jié)果 58 810人份血清中ELISA檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性有607例，陽(yáng)性率1.03%，其中HBsAg陽(yáng)性率0.52%(305/58 810)，抗-HCV陽(yáng)性率0.32%(188/58 810)，抗-HIV陽(yáng)性率0.19%(114/58810)；NAT檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性有260例，陽(yáng)性率0.44%，其中HBV DNA陽(yáng)性率0.22%(128/58 810)，HCV RNA陽(yáng)性率為0.14%(80/58 810)，HIV RNA陽(yáng)性率0.09%(52/58 810)。對(duì)14例ELISA陰性、NAT陽(yáng)性標(biāo)的獻(xiàn)血者進(jìn)行定期采血隨訪分析，其中8例證實(shí)為窗口期HBV感染，6例證實(shí)為隱匿性乙型肝炎。結(jié)論 ELISA檢測(cè)對(duì)HBV感染存在一定的漏檢率，在血液篩查中，取消一遍ELISA 檢測(cè)，增加一遍NAT檢測(cè)，可有效降低輸血感染殘余風(fēng)險(xiǎn)，提高輸血安全。

酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)； 核酸擴(kuò)增技術(shù)； 血液篩查； 殘余風(fēng)險(xiǎn)

輸血傳染病的預(yù)防和控制是血液安全最重要的關(guān)注點(diǎn)之一。本文旨在分析ELISA聯(lián)合NAT技術(shù)對(duì)血液篩查的應(yīng)用價(jià)值并通過對(duì)ELISA陰性、NAT陽(yáng)性標(biāo)本的追蹤分析，探討NAT檢測(cè)技術(shù)對(duì)降低輸血傳播疾病殘余風(fēng)險(xiǎn)的可行性。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2011年1月至2013年1月來自江蘇省血站無償獻(xiàn)血者標(biāo)本共計(jì)58 810人份。其中男32 453人份(55.2%)，女26 357人份(44.8%)，年齡18～55歲，平均年齡(28.3±18.9)歲，所有獻(xiàn)血者均符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB 18467-2001《獻(xiàn)血者健康檢查要求》后方可獻(xiàn)血。每位獻(xiàn)血者均平行采集兩管血液，離心后一管采用ELISA法進(jìn)行檢測(cè)，另一管采用NAT法進(jìn)行檢測(cè)。

1.2 檢測(cè)方法 按照標(biāo)準(zhǔn)要求，采用ELISA法進(jìn)行乙肝病毒表面抗原(HBsAg)、丙肝抗體(抗-HCV)及艾滋病抗體(抗-HIV)的檢測(cè)。采用不同試劑廠家檢測(cè)2遍，HBsAg試劑盒購(gòu)自上?？迫A生物工程股份有限公司、廈門英科新創(chuàng)科技有限公司，抗-HCV試劑盒購(gòu)自北京萬泰生物藥業(yè)股份有限公司、珠海麗珠生物試劑有限公司，抗-HIV試劑盒購(gòu)自荷蘭生物梅立埃、北京萬泰生物藥業(yè)有限公司。采用NAT技術(shù)進(jìn)行HBV DNA、HCV RNA、HIV RNA的檢測(cè)，檢測(cè)試劑購(gòu)自美國(guó)諾華診斷公司，為三聯(lián)熒光病毒TMA 核酸檢測(cè)試劑盒，可同時(shí)檢測(cè) HBV、HCV、HIV三種病毒。主要檢測(cè)儀器：STAR全自動(dòng)進(jìn)樣儀、FAME2420 全自動(dòng)酶聯(lián)免疫分析儀、熒光PCR儀、核酸提取儀等。

1.3 對(duì)ELISA陰性、NAT陽(yáng)性標(biāo)本的隨訪分析 對(duì)于ELISA陰性、NAT陽(yáng)性的患者，通過省血站及時(shí)與獻(xiàn)血者取得聯(lián)系，重新采集血樣進(jìn)行乙肝表面抗原(HBsAg)、乙肝表面抗體(抗-HBs)、乙肝e抗原(HBeAg)、乙肝e抗體(抗-HBe)、乙肝核心抗體(抗-HBc)、抗-HCV及抗-HIV的檢測(cè)，于第0，7，14，21，28天進(jìn)行采樣追蹤分析，監(jiān)測(cè)感染的狀態(tài)及血清學(xué)的轉(zhuǎn)換。

2 結(jié) 果

2.1 ELISA檢測(cè)結(jié)果 陽(yáng)性607例(1.03%)，其中有12份標(biāo)本HBsAg與抗-HCV同時(shí)陽(yáng)性，其中HBsAg陽(yáng)性率0.52%(305/58 810)，抗-HCV陽(yáng)性率0.32%(188/58 810)，抗-HIV陽(yáng)性率0.19%(114/58 810)。

2.2 NAT檢測(cè)結(jié)果 陽(yáng)性260例(0.44%)，其中有8份標(biāo)本HBV DNA與HCV RNA同時(shí)陽(yáng)性，其中HBV DNA陽(yáng)性率0.22%(128/58 810)，HCV RNA陽(yáng)性率0.14%(80/58 810)，HIV RNA陽(yáng)性率0.09%(52/58 810)。

2.3 ELISA與NAT檢測(cè)結(jié)果對(duì)比 607例ELISA檢測(cè)為陽(yáng)性的標(biāo)本中，有361例經(jīng)NAT檢測(cè)為陰性，其中HBV DNA陰性者180例，占49.9%，HCV RNA陰性者110例，占30.5%，HIV RNA陰性者71例，占19.7%。58 203例ELISA檢測(cè)為陰性的標(biāo)本中，有14例經(jīng)NAT檢測(cè)為陽(yáng)性，均為HBV DNA陽(yáng)性。見表1。

表1 ELISA與NAT檢測(cè)結(jié)果對(duì)比

2.4 對(duì)ELISA陰性、NAT陽(yáng)性標(biāo)本的隨訪分析 對(duì)14例ELISA陰性、NAT陽(yáng)性標(biāo)的獻(xiàn)血者由省血站進(jìn)行定期采血追蹤分析，14例獻(xiàn)血者均為HBV DNA陽(yáng)性，第0天，乙肝五項(xiàng)陰性、HBV DNA陽(yáng)性的有8例，經(jīng)第0，7，14，21，28天的追蹤分析，均表現(xiàn)為HBsAg陽(yáng)性，其中大三陽(yáng)者5例，小三陽(yáng)3例，追蹤期間ALT升高明顯，HBV DNA陽(yáng)性，病毒載量持續(xù)增高，證實(shí)為窗口期HBV感染；另有6例雖HBsAg陰性，但HBcAb持續(xù)陽(yáng)性，證實(shí)為隱匿性乙型肝炎。

3 討 論

2012年初，國(guó)家衛(wèi)生部頒布新的《血站技術(shù)操作規(guī)程》，對(duì)血液篩查的檢測(cè)方法有了新的要求，即允許采供血機(jī)構(gòu)采用 ELISA檢測(cè)技術(shù)和NAT檢測(cè)技術(shù)對(duì)血液進(jìn)行安全檢測(cè)，NAT技術(shù)在我國(guó)逐步推廣，對(duì)降低輸血風(fēng)險(xiǎn)有重要意義。作為臨床用血單位，面臨患者用血安全問題，更應(yīng)支持兩種方法的“雙保險(xiǎn)”檢測(cè)。

本研究發(fā)現(xiàn)，樣本無償獻(xiàn)血者中，ELISA檢測(cè)陽(yáng)性率1.03%，其中HBsAg陽(yáng)性率0.52%，抗-HCV陽(yáng)性率0.32%，抗-HIV陽(yáng)性率0.19%。NAT檢測(cè)陽(yáng)性率0.44%，其中HBV DNA陽(yáng)性率0.22%，HCV RNA陽(yáng)性率0.14%，HIV RNA陽(yáng)性率0.09%。說明研究樣本獻(xiàn)血者中不合格的指標(biāo)主要是乙型肝炎病毒。本研究發(fā)現(xiàn)，607例ELISA檢測(cè)為陽(yáng)性的標(biāo)本中，有361例經(jīng)NAT檢測(cè)為陰性，其中HBV DNA陰性者180例，占49.9%，HCV RNA陰性者110例，占30.5%，HIV RNA陰性者71例，占19.7%。58 203例ELISA檢測(cè)為陰性的標(biāo)本中，有14例經(jīng)NAT檢測(cè)為陽(yáng)性，均為HBV DNA陽(yáng)性，說明ELISA檢測(cè)有漏檢標(biāo)本，存在一定的輸血傳播疾病風(fēng)險(xiǎn)。

ELISA與NAT 檢測(cè)技術(shù)在血液篩查中存在互補(bǔ)作用，主要體現(xiàn)在以下兩個(gè)方面：(1)NAT可降低窗口期對(duì)用血安全的影響。ELISA是以血液中抗體、抗原為檢測(cè)對(duì)象的，而病毒從進(jìn)入人體到產(chǎn)生足夠數(shù)量的抗體時(shí)往往需要較長(zhǎng)的時(shí)間，此為窗口期。有研究發(fā)現(xiàn)，70%的HCV及 90%的HBV及HIV及漏檢是由于窗口期引起的[1]，而NAT是以血液中病原體的核酸為檢測(cè)對(duì)象的，大大縮短了窗口期，而且在感染早期，保護(hù)性抗體尚未產(chǎn)生，病毒載量很高，傳染性很強(qiáng)，因此NAT可降低窗口期對(duì)用血安全的影響[2]。(2)ELISA可彌補(bǔ)NAT的漏檢情況。雖然抗體在機(jī)體出現(xiàn)的時(shí)間較晚，但持續(xù)時(shí)間較長(zhǎng)，而病毒在外周血中的存在有間歇性現(xiàn)象， ELISA可彌補(bǔ)NAT的漏檢情況，因此NAT也不能完全替代ELISA在血液篩查中的作用，兩者結(jié)合更能提高臨床用血的安全性[3-4]。

[1] 曾勁峰，鄭欣，許曉絢. ELISA 檢測(cè)與 NAT 在血液篩查應(yīng)用中的互補(bǔ)性研究[J].中國(guó)輸血雜志，2012，25(10)：1012-1015.

[2] 吳敬林，周仲民. 核酸檢測(cè)降低輸血?dú)堄囡L(fēng)險(xiǎn)研究現(xiàn)狀[J]. 齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2014，35(8)：1198-1199.

[3] 莫丕立，吳軍軍，馬聯(lián)．核酸檢測(cè)技術(shù)在采供血機(jī)構(gòu)中的應(yīng)用[J].中國(guó)輸血雜志，2011，24(9) : 821-823．

[4] 王芳，欒燕，劉顯智．核酸檢測(cè)技術(shù)(NAT)在獻(xiàn)血者人類免疫缺陷病毒篩查中的應(yīng)用[J].中國(guó)輸血雜志，2010，23(10)：892-894.

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1000-744X(2016)11-1212-03

2016-06-11)

△通信作者，E-mail：lusiwen_1969@126.com，13776668755